人源化的抗人PD-1抗体制造技术

本文描述了人源化的抗PD

【技术实现步骤摘要】
人源化的抗人PD
‑
1抗体
[0001]本申请是基于申请日为2019年12月17日，申请号为201980092699.X，专利技术名称为“人源化的抗人PD
‑
1抗体”的专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术涉及免疫学和免疫治疗领域，特别是在人类疾病的治疗中。更具体地，本专利技术涉及用于治疗人类疾病的人源化抗人PD
‑
1抗体或其抗原结合片段。

技术介绍

[0003]程序性细胞死亡蛋白1(PD
‑
1，也称为CD279)是一种细胞表面蛋白分子，其属于免疫球蛋白超家族。PD
‑
1在T和B淋巴细胞和巨噬细胞上表达，并在细胞命运和分化中发挥作用。特别地，PD
‑
1作为免疫检查点，通过阻止T细胞的激活，在下调免疫系统中发挥重要作用，从而降低自身免疫并促进自我耐受。已鉴定出PD
‑
1的两种配体，即PD
‑
L1和PD
‑
L2，其已被证明在结合至PD
‑
1后可下调T细胞激活，在T细胞中诱导共抑制信号并促进其凋亡、失能和功能耗竭(Freeman等，(2000)J Exp Med 192:1027
‑
34；Latchman等，(2001)Nat Immunol 2:261
‑
8；Carter等，(2002)Eur J Immunol 32:634
‑
43)。配体PD
‑
L1和PD
‑
L2在正常人细胞中不表达，但在多种人类癌症中可大量存在(Dong等，(2002)Nat Med 8:787
‑
9,Brahmer等，N Eng J Med,366(26),2012；Topalian等，N Eng J Med,366(26),2012；Wolchok等，N Engl J Med.2013Jul 11；369(2):122
–
133))。PD
‑
L1比PD
‑
L2更广泛地表达，并且由多种造血细胞和非造血细胞表达。
[0004]肿瘤、微生物和病毒采用诸如PD
‑
L1/PD
‑
1的共抑制途径，通过建立免疫抑制微环境来避开免疫防御和免疫监视。特别地，由肿瘤、微生物或病毒引起的PD
‑
L1/PD
‑
1途径可通过多种机制来逃避宿主的免疫监视，所述机制包括：促进T细胞失活、疲乏、无应答和凋亡，诱导T
‑
reg细胞扩增，以及增强肿瘤抵抗杀伤和凋亡的内在能力。由癌细胞介导的PD
‑
1和PD
‑
L1的相互作用也导致肿瘤浸润淋巴细胞减少，通过减少TCR下游信号抑制T细胞受体介导的T细胞增殖，导致激活和细胞因子产生减少(Dong等，J.Mol.Med.2003,81:281
‑
7；Blank等，Cancer Immunol.Immunother.2005,54:307
‑
314；Konishi等，Clin.Cancer Res.2004,10:5094
‑
100)。已在很多原发性肿瘤组织活检中发现了PD
‑
1在肿瘤浸润淋巴细胞或肿瘤细胞中表达(Ribas A.Cancer Discov.2015,5(9):915
‑
9)。
[0005]鉴于其免疫抑制作用，已开发出PD
‑
1抑制剂来抵消这种对人免疫系统的有害影响。此类PD
‑
1抑制剂据信可以激活免疫系统以攻击肿瘤或受感染的细胞，因此可用于治疗癌症和疾病。事实上，使用PD
‑
1或PD
‑
L1抑制剂来破坏其之间相互作用的策略已显示出改善癌症免疫疗法的潜力(Brahmer等，N Eng J Med,366(26),2012；Powles等，Nature,515(7528),2014；Topalian等，N Eng J Med,366(26),2012；Ansell,Curr Opin Hematol,22(4),2015)。特别地，阻断PD
‑
1与其配体之间的相互作用增强了能够消除肿瘤细胞的肿瘤特异性CD8 T细胞免疫(Topalian S.等，Curr Opin Immunol.2012,24(2):207
‑
12)。PD
‑
1的抑制作用也是通过促进淋巴结中抗原特异性T细胞凋亡同时减少调节性T细胞凋亡的双重机
制实现的。
[0006]本领域公知使用对PD
‑
1/PD
‑
L1阻断特异的单克隆抗体(“mAb”)来抵消PD
‑
1/PD
‑
L1信号通路的免疫抑制作用。然而，重大的实际问题阻碍了其在人体中的广泛应用。一个主要问题是非人类来源的单克隆抗体通常具有免疫原性，从而限制了其有效性，并且在一些情况下会引起危险的过敏反应。对此类外源mAb的免疫应答包括产生特异性、高亲和性的抗体，这些抗体结合并影响mAb的消除，从而通过促进mAb从体内清除并抑制其与靶向抗原结合的能力而显著降低mAb的有效性。为了克服这个问题，可以将目标非人抗体人源化以降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体(通常是小鼠抗体)的特异性和亲和性。此类人源化抗体通常包含一个或多个可变结构域，其中抗原结合结构域来源于非人抗体，以及框架区来源于人或人源化抗体序列。
[0007]因此，需要开发人源化抗体以提供用于安全免疫疗法(特别是针对癌症，靶向人PD
‑
1)的改进的药剂。

技术实现思路

[0008]本专利技术基于特异性靶向人PD
‑
1的人源化抗体的开发，该抗体显示出对PD
‑
1的高结合亲和性并与其配体PDL
‑
1和/或PDL
‑
2的强烈竞争。这种人源化抗体经过工程改造，在基于哺乳动物细胞的生产系统中具有很高的可制备性和产量。这种人源化抗体在本文中特别地称为“HKLD”。
[0009]此外，申请人已经观察到抗体的实质和出乎意料的作用，导致巨噬细胞对不表达PD
‑
L1的肿瘤细胞的吞噬作用，该抗体具有良好(promising)的疗效，特别是用于治疗PD
‑
L1阴性肿瘤和/或具有T细胞免疫应答缺陷的患者。
[0010]在具体实施方式和在实施例中特别显示和解释了强烈的有益和意料不到的效果。
[0011]在第一个方面中，人源化单克隆抗人PD
‑
1抗体或其抗原结合片段包含：
[0012](i)重链可变结构域，所述重链可变结构域包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或由SEQ ID NO:1的氨基酸序本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人源化单克隆抗人PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，其包含：(i)重链可变结构域，所述重链可变结构域包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成，所述HCDR2包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或由SEQ ID NO:2的氨基酸序列组成，和所述HCDR3包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列或由SEQ ID NO:9的氨基酸序列组成，和(ii)轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列或由SEQ ID NO:12的氨基酸序列组成，所述LCDR2包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列或由SEQ ID NO:13的氨基酸序列组成，和所述LCDR3包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列或由SEQ ID NO:14的氨基酸序列组成，其中所述抗体或其抗原结合片段是人PD
‑
L1和/或PD
‑
L2与人PD
‑
1结合的拮抗剂。2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中：(i)所述重链可变结构域包含重链可变区框架区(HFR)HFR1、HFR2、HFR3和HFR4，其分别包含SEQ ID NO:37、38、39和40的氨基酸序列或由其组成，其任选地具有一个、两个或三个选自在HFR3的除位置27、29和32以外的任何位置处一个或多个置换、一个或多个添加、一个或多个缺失及其任何组合的修饰，和(ii)所述轻链可变结构域包含轻链可变区框架区(LFR)LFR1、LFR2、LFR3和LFR4，其分别包含SEQ ID NO:41、42、43和44的氨基酸序列或由其组成，其任选地具有一个、两个或三个选自一个或多个置换、一个或多个添加、一个或多个缺失及其任何组合的修饰。3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中其包含：(i)重链，其包含选自SEQ ID NO:31的氨基酸序列，其具有一个、两个或三个选自在SEQ ID NO:31的除位置7、16、17、20、33、38、43、46、62、63、65、69、73、76、78、80、84、85、88、93、95、96、97、98、100、101、105、106和112以外的任何位置处的一个或多个置换、一个或多个添加、一个或多个缺失及其任何组合的修饰；和(ii)轻链，其包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列，其具有一个、两个或三个选自在SEQ ID NO:34的除位置3、4、7、14、17、18、28、29、33、34、39、42、44、50、81、88、94、97、99和105以外的任何位置处的一个或多个置换、一个或多个添加、一个或多个缺失及其任何组合的修饰。4.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含来源于人κ轻链恒定结构域的轻链恒定结构域和来源于人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4重链恒定结构域的重链恒定结构域。5.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含来源于人κ轻链恒定结构域的轻链恒定结构域和来源于人IgG1重链恒定结构域的重链恒定结构域。6.根据权利要求5所述的抗体或其抗原结合片段，其具有选自以下的置换或置换的组合：T250Q/M428L；M252Y/S254T/T256E+H433K/N434F；E233P/L234V/L235A/G236A+A327G/A330S/P331S；E333A；S239D/A330L/I332E；P257I/Q311；K326W/E333S；S239D/I332E/G236A；N297A；L234A/L235A；N297A+M252Y/S254T/T256E；K322A和K444A。7.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含来源于人κ轻链恒定结构域的轻链恒定结构域和来源于人IgG4重链恒定结构域的重链恒定结构域。
8.根据权利要求7所述的抗体或其抗原结合片段，其具有选自以下的置换或置换的组合：S228P；L234A/L235A；S228P+M252Y/S254T/T256E和K444A。9.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其以等于或低于10
‑7M的对人PD
‑
1的结合亲和性常数(KD)特异性结合至人PD
‑
1，所述亲和性由表面等离子共振测量。10.一种分离的核酸分子或分离的核酸分子组，其编码权利要求1至9中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。11.一种载体，其包含权利要求10所述的分离的核酸分子或分离的核酸分子组。12.一种宿主细胞，其包含权利要求10所述的分离的核酸分子或分离的核酸分子组或根据权利要求11所述的载体。13.一种用于生产根据权利要求1
‑
9中任一项所述的抗体或其抗原结合片段的方法，其包含培养根据权利要求12所述的宿主细胞的步骤，和分离抗体或其抗原结合片段的步骤。14.一种药物组合物，其包含根据权利要求1
‑
9中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，根据权利要求10所述的分离的核酸分子或分离的核酸分子组，根据权利要求11所述的载体，和/或根据权利要求12所述的宿主细胞，以及药学上可接受的载体。15.根据权利要求14所述的药物组合物，其中其还包含另外的治疗剂，所述另外的治疗剂选自以下：烷化剂、血管生成抑制剂、抗体、激酶抑制剂、凋亡促进剂、细胞周期抑制剂、激素、多价结合蛋白、抗代谢物、抗有丝分裂剂、抗增殖剂、抗病毒剂和嵌入性抗生素。16.根据权利要求15所述的药物组合物，其中所述另外的治疗剂是选自以下中的一种或多种：抗肿瘤靶向抗体、极光激酶抑制剂、死亡受体通路激活剂、Bcr
‑
Abl激酶抑制剂、BiTE(双特异性T细胞接合...

【专利技术属性】
技术研发人员：N，
申请(专利权)人：OSE免疫疗法公司，
类型：发明
国别省市：