双功能抗PD-1/SIRPα分子制造技术

本发明专利技术涉及包含抗PD

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】双功能抗PD
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1/SIRP
α
分子
专利

[0001]本专利技术属于免疫治疗领域。本专利技术提供了一种包含与SIRPa连接的抗PD
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1抗体或其抗体片段的双功能分子及其用途。
[0002]专利技术背景
[0003]靶向T细胞抑制检查点以使用治疗性抗体解除抑制的方法是一个深入研究的领域(有关评述，请参见Pardoll,Nat Rev Cancer,2012；12:253
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264)。靶向适应性免疫的免疫检查点已显示出对抗多种癌症的巨大治疗功效，但其仅在有限比例的患者中显示。先天性骨髓细胞(巨噬细胞、树突状细胞、MDSC、PMN)上的免疫检查点仍然缺乏研究，而这些细胞代表了许多实体瘤中最丰富的免疫细胞类型，并且经常与不良结果相关联。针对先天性(由骨髓细胞介导)和适应性(由T细胞介导)免疫应答两者的免疫检查点疗法的联合在临床前模型中表现出很高的效率，但在临床上仍然是一个挑战。
[0004]免疫细胞激活由平衡共刺激和共抑制信号的整合控制。T细胞受体(TCR)介导的T细胞激活由共刺激和共抑制信号两者调节。抗原非依赖性第二信号修饰第一信号，其由抗原肽
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MHC复合物与TCR的相互作用提供，从而赋予对应答的特异性。T细胞共刺激和共抑制通路具有广泛的免疫调节功能，控制效应子、记忆和调节T细胞以及初始T细胞。那些通路的治疗调节正在转化为用于治疗癌症的有效新策略(关于综述，请参见Schildberg等，44(5)，Immunity，2016)。正在进行的关于免疫应答调节的研究已经确定了多种免疫通路，可以靶向所述通路以开发癌症疗法。那些分子在本文中称为免疫检查点共激活剂或共抑制剂(参见综述Sharma等，Cell,161(2),2015和Pardoll,Nature Reviews Cancer,12(4),2012)。
[0005]程序性细胞死亡蛋白1(PD
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1，也称为CD279)是一种细胞表面蛋白分子，其属于免疫球蛋白超家族。PD
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1在T和B淋巴细胞和巨噬细胞上表达，并在细胞命运和分化中发挥作用。特别地，PD
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1作为免疫检查点，通过阻止T细胞的激活，在下调免疫系统中发挥重要作用，从而降低自身免疫并促进自我耐受。已鉴定出PD
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1的两种配体，即PD
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L1和PD
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L2，其已被证明在结合至PD
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1后可下调T细胞激活(Freeman等，(2000)J Exp Med 192:1027
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34；Latchman等，(2001)Nat Immunol 2:261
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8；Carter等，(2002)Eur J Immunol 32:634
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43)。PD
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1与其配体之间的相互作用导致肿瘤浸润淋巴细胞减少、T细胞受体介导的增殖减少和癌细胞的免疫逃避。特别是，PD1连接减少T细胞上TCR刺激下游的信号，抑制T细胞应答并导致激活和细胞因子产生减少。
[0006]使用抗PD1和抗PDL1抑制剂来破坏其相互作用的两种策略在癌症治疗中均取得了成功(Brahmer等，N Eng J Med,366(26),2012；Powles等，Nature,515(7528),2014；Topalian等，N Eng J Med,366(26),2012；Ansell,Curr Opin Hematol,22(4),2015)。然而，肿瘤微环境内免疫抑制性和低刺激性骨髓细胞的积累限制了T细胞应答的效率和免疫疗法的功效，尤其是那些靶向免疫检查点(例如PD
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1/PD
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L1)的免疫疗法。例如，在胰腺癌、非MSI结直肠癌、胃癌和一些乳腺癌亚型中看到低或无临床响应(Brahmer等，N Engl J Med.，2012年6月28日；366(26):2455
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65,Feng等，Cancer Lett.，2017年10月28日；407:57
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65，Borcherding等，J Mol Biol.，2018年7月6日；430(14):2014
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2029)。多种机制已被描述且可解释该低功效和对PD
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1/PD
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L1检查点疗法的抗性，例如(1)记忆T细胞的形成受损；(2)T细胞浸润受损；(3)肿瘤特异性T细胞生成不足；(4)T细胞功能不足；和(5)调节性T细胞诱导的免疫抑制微环境。
[0007]迄今为止，大多数疗法侧重于刺激适应性免疫系统来攻击癌症，包括靶向PD
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1/PD
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L1轴以拯救耗竭T细胞并恢复抗肿瘤响应的药剂(Brahmer等，N Eng J Med，366(26)，2012；Topalian等，N Eng J Med，366(26)，2012；Wolchok等，N Engl J Med.，2013年7月11日；369(2)：122
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133)。然而，巨噬细胞和其他骨髓免疫细胞也有望作为癌症免疫疗法的效应剂。CD47/信号调节蛋白α(SIRPα)轴是骨髓细胞激活的重要调节剂，并作为骨髓特异性免疫检查点发挥着广泛的作用。
[0008]信号调节蛋白α或SIRPa(也称为SIRPα、CD172a或SHPS
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1)在淋巴组织中单核细胞、大多数组织巨噬细胞亚群体、粒细胞、树突状细胞亚群体、一些骨髓祖细胞上表达，并以不同水平在神经元上表达，且在大脑中富含突触的区域中具有显著高表达。由骨髓细胞表达的SIRPa与普遍存在的CD47(其在一些癌细胞中过度表达，也在大多数健康细胞中以较低水平广泛表达)的相互作用是骨髓功能的调节中涉及的先天应答的另一重要免疫检查点。CD47与SIRPa相互作用并导致“不要吃我(don
’
t eat me)”信号传输到吞噬巨噬细胞，然后吞噬细胞离开靶细胞和潜在地肿瘤细胞未受影响。通过靶向CD47的药剂，通过增强巨噬细胞的抗体依赖性吞噬作用而对CD47/SIRPa通路的阻断已被描述为与消耗治疗性抗癌抗体协同作用，以刺激体外癌细胞吞噬作用，并在宽广范围的临床前模型中刺激体内抗肿瘤免疫应答。

技术实现思路

[0009]为了提高抗PD1免疫疗法的功效并克服患者潜在的抗PD
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1抗性，开发同样靶向SIRPalpha/CD47的联合治疗可能是一个好策略。因此，本领域仍然非常需要用于安全免疫疗法的新的改善药剂，特别是针对癌症，靶向先天性骨髓免疫细胞，并且对适应性免疫应答(特别是T细胞免疫应答)具有有效的积极影响的安全免疫疗法。本专利技术人已经用本文公开的专利技术向前迈出了重要的一步。在具体实施方式的开头处和实施例中特别显示和解释了强烈的有益和出乎意料的效果。
[0010]本专利技术人提供了包含抗hPD
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1抗体和人SIRPα的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种双功能分子，其包含：(a)抗人PD
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1抗体或其抗原结合片段，其包含：(i)包含HCDR1、HCDR2和HCDR3的重链可变结构域(VH)，和(ii)包含LCDR1、LCDR2和LCDR3的轻链可变结构域(VL)，和(b)人SIRPa或其片段或变体，其中所述抗体或其抗原结合片段的重链和/或轻链的C
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端末端，优选地通过肽接头，与所述SIRPa或其片段或变体的N端末端共价连接作为融合蛋白。2.根据权利要求1中任一项所述的双功能分子，其中所述抗体是嵌合、人源化或人抗体。3.根据权利要求1
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2中任一项所述的双功能分子，其中所述SIRPa片段包含SIRPa的胞外结构域或由SIRPa的胞外结构域组成。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的双功能分子，其中所述SIRPa片段缺乏其胞内部分和任选地缺乏其跨膜结构域，优选地其中所述SIRPa包含SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列或其片段，或由SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列或其片段组成。5.根据权利要求1
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4所述的双功能分子，其中所述抗人PD
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1抗体或其抗原结合片段包含：(i)包含HCDR1、HCDR2和HCDR3的重链可变结构域(VH)，和(ii)包含LCDR1、LCDR2和LCDR3的轻链可变结构域(VL)，所述重链CDR1(HCDR1)包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成；
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所述重链CDR2(HCDR2)包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或由SEQ ID NO:2的氨基酸序列组成；
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所述重链CDR3(HCDR3)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或由SEQ ID NO:3的氨基酸序列组成，其中X1是D或E，并且X2选自T、H、A、Y、N、E和S，优选地选自H、A、Y、N和E；
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所述轻链CDR1(LCDR1)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列或由SEQ ID NO:12的氨基酸序列组成，其中X是G或T；
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所述轻链CDR2(LCDR2)包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列或由SEQ ID NO:15的氨基酸序列组成，
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所述轻链CDR3(LCDR3)包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列或由SEQ ID NO:16的氨基酸序列组成。6.根据权利要求1
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5所述的双功能分子，其中所述抗人PD
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1抗体或其抗原结合片段包含(a)包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列或由SEQ ID NO:17的氨基酸序列组成的VH，其中X1是D或E，并且X2选自T、H、A、Y、N、E和S，优选地选自H、A、Y、N和E；(b)包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列或由SEQ ID NO:26的氨基酸序列组成的VL，其中X是G或T。7.根据权利要求1
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6中任一项所述的双功能分子，其中所述抗体或其抗原结合片段包含来源于人κ轻链恒定结构域的轻链恒定结构域和来源于人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4重链恒定结构域的重链恒定结构域，优选地来源于IgGl或IgG4重链恒定结构域。8.根据权利要求1至7中任一项所述的双功能分子，其中所述抗体或其抗原结合片段包含来源于人κ轻链恒定结构域的轻链恒定结构域和来源于人IgGl重链恒定结构域的重链恒
定结构域，其任选地具有选自以下的置换或置换的组合：T250Q/M428L；M252Y/S254T/T256E+H433K/N434F；E233P/L234V/L235A/G236A+A327G/A330S/P331S；E333A；S239D/A330L/I332E；P257I/Q311；K326W/E333S；S239D/I332E/G236A；N297A；L234A/L235A；N297A+M252Y/S254T/T256E；K322A和K444A，优选地选自以下：N297A，其任选地与M252Y/S254T/T256E组合，和L234A/L235A。9.根据权利要求1至7中任一项所述的双功能分子，其中所述抗体或其抗原结合片段包含来源于人κ轻链恒定结构域的轻链恒定结构域和来源于人IgG4重链恒定结构域的重链恒定结构域，任选地具有选自以下的置换或置换的组合：S228P；L234A/L235A、S228P+M252Y/S254T/T256E和K444A。10.根据权利要求1
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4所述的双功能分子，其中所述抗PD1抗体选自派姆单抗，纳武单抗，匹地利珠单抗，西米普利单抗，PDR001以及单克隆抗体5C4、17D8、2D3、4H1、4A11、7D3和5F4。11.一种分离的核酸分子或分离的核酸分子组，其编码根据权利要求1
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10中任一项所述的双功能分子。12.一种载体，其包含根据权利要求11所述的核酸或核酸分子组。13.一种宿主细胞，其包含根据权利要求12所述的载体或根据权利要求11所述的核酸或核酸分子组。14.一种用于产生根据权利要求1
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10中任一项所述的双功能分子的方法，其包括培养根据权利要求13所述的宿主细胞的步骤和任选地分离所述双功能分子的步骤。15.一种药物组合物，其包含根据权利要求1
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10中任一项所述的双功能分子、根据权利要求11所述的核酸或核酸分子组、根据权利要求12所述的载体或根据权利要求13所述的宿主细胞和药学上可接受的载体。16.根据权利要求15所述的药物组合物，其中其还包含另外的治疗...

【专利技术属性】
技术研发人员：N，
申请(专利权)人：OSE免疫疗法公司，
类型：发明
国别省市：