结合TIGIT抗原的抗体及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种高亲和力结合人TIGIT抗原并拮抗抑制TIGIT与其配体如CD155结合的抗体或其衍生体，其抗体轻链可变区的抗原互补决定区(CDR

【技术实现步骤摘要】
结合TIGIT抗原的抗体及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于生物技术-抗体领域。本专利技术涉及一种拮抗抑制T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域蛋白TIGIT(T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains)与其配体结合的抗体及其编码序列与其制备方法和用途。

技术介绍

[0002]T淋巴细胞介导的细胞免疫在识别监控、与攻击杀灭肿瘤细胞的过程中起着非常关键的作用。T淋巴细胞通过协同刺激因子(co-stimulatory molecules)或协同抑制因子(co-inhibitory molecules)与表达在如肿瘤靶细胞或抗原呈递细胞(Antigen presenting cells，APC)上的配体结合而传导免疫功效。其中协同抑制因子也叫免疫抑制检查点(Inhibitory immune checkpoint molecules)，主要包括CTLA-4(cytotoxic T-lymphocyte antigen-4)与其配体B7-1(CD80)、B7-2(CD86)；程序性死亡受体PD-1(programmed death-1)与其配体PD-L1和PD-L2；LAG-3(lymphocyte activation gene-3)与其配体；TIM-3(T-cell immunoglobulin domain and mucin domain 3)与其配体；BTLA(B and T lymphocyte attenuator)与其配体等。这些免疫检查点蛋白在分子结构上都很相似，多数属于免疫球蛋白超家族成员。
[0003]已有多个拮抗抑制CTLA-4，或PD-1/PD-L1的单克隆抗体药物上市销售，在多种肿瘤治疗上表现出显著的疗效。如2011年美国FDA批准上市用于治疗晚期黑色素瘤(Melanoma)的抗CTLA-4单抗药物Ipilimumab(商品名YERVOY)；2014年批准用于治疗非小细胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC)的抗PD-1单抗药物Nivolumab(商品名Opdivo)、Pembrolizumab(商品名Keytruda)和2016年批准用于治疗非小细胞肺癌的抗PD-L1单抗药物Atezolizumab(商品名Tecentriq)等。
[0004]目前该领域的一大热点是寻找新型靶点以研究开发出更多类似靶向CTLA-4和PD-1/PD-L等拮抗免疫抑制检查点的单抗类药物。TIGIT则是新发现的一种具有类似潜在药物开发前景的免疫抑制检查点分子。
[0005]TIGIT(T cell immunoreceptor with Ig and ITIM domain)，最早由Yu X等发现与报道(Yu X：Nat Immunol.2009，10:48-57)。TIGIT又称为WUCAM(Washington University cell adhesion molecule；Vermi KS：Eur J Immunol 2009,39:695-703)，VSTM3(V-set and transmembrane domain-containing protein 3；Levin S：Eur J Immunol 2011,41:902-915)或VSIG9(V-set and immunoglobulin domain-containing protein 9)。
[0006]人TIGIT蛋白全长有244个氨基酸，其中胞外区有141个氨基酸，跨膜区23个氨基酸，胞质区80个氨基酸。小鼠TIGIT蛋白全长有241个氨基酸，与人TIGIT蛋白氨基酸序列同源性为60％。TIGIT蛋白的一个重要结构特征是在其胞内区尾部存在典型的免疫受体酪氨酸抑制基序(immunoreceptor tyrosine-based inhibition motif,ITIM)，从而介导出免疫抑制信号，ITIM同样也存在于PD-1结构域中。
[0007]与PD-1类似，TIGIT主要表达在T细胞(包括辅助性T细胞，记忆性T细胞，CD8+效应T
细胞)和自然杀伤(Natural killer,NK)细胞上，而识别与结合TIGIT的配体则主要表达在抗原呈递细胞如树突状细胞(dendritic cells，DC)、巨噬细胞、肿瘤细胞等靶向细胞上。
[0008]已知的识别与结合TIGIT的配体主要有3个：分别为CD155、CD112和CD113。CD155又称为PVR(poliovirus receptor，脊髓灰质炎病毒受体)；CD112和CD113则又分别称为PVRL-2和PVRL-3(poliovirus receptor-related protein-2，-3)。CD155与TIGIT的结合强于CD112或CD113与TIGIT的结合(Yu X,Nat Immunol.2009,10:48-57；Stanietsky N,Proc Natl Acad Sci U S A.2009,106:17858-63)。CD155、CD112及CD113均为Nectin家族成员。
[0009]CD155或CD112也可与协同刺激因子CD226(DNAM-1)结合，从而激活或上调T细胞免疫功效。但CD155或CD112与免疫抑制因子TIGIT结合的强度要稍高于其与CD226(DNAM-1)的结合。TIGIT-CD226/CD155-CD112这种相互作用形成的平衡系统类似于CD28-CTLA4/CD80-CD86免疫网络平衡系统。
[0010]CD155在人多种正常细胞上低水平表达，而在多种肿瘤细胞上高表达。肿瘤细胞通过上调表达CD155而抑制T细胞/NK细胞的免疫杀伤作用。因此，如开发出拮抗阻断TIGIT与其配体如CD155结合的单克隆抗体，则可解除免疫抑制，达到恢复T细胞/NK细胞对肿瘤的攻击杀伤作用。
[0011]国际上目前尚无TIGIT靶点相关药物获批上市，但已有多家制药企业如美国基因泰克公司(Genentech)、百时美施贵宝(BMS)、默沙东(MSD)、OncoMed等启动了抗TIGIT抗体新药研制并申请了相关专利保护。其中临床进展最快的为Genentech公司代号为MTIG-7192A的抗TIGIT单抗Tiragolumab,目前已进入III期临床试验阶段，用于联合靶向PD-L1单克隆抗体Atezolizumab(商品名Tecentriq)治疗非小细胞肺癌；Genentech公司递交申请了抗TIGIT单抗一系列专利(包括授权美国专利号：US9499596B2及US10017572B2)。
[0012]BMS公司代号为“BMS-986207”的抗TIGIT单抗药物处于II期临床研究阶段，用于单药或与BMS公司的PD-1靶向药Nivolumab(商品名Opdivo)联合使用治疗肿瘤；BMS公司递交申请了抗TIGIT单抗专利及授权(美国专利申请号:2016/0176963A1；授权美国专利号：US1018990本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种结合人TIGIT抗原的抗体或其衍生体，其特征在于，其包含第一可变区和第二可变区，其中所述第一可变区是抗体轻链可变区，其抗原互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：9，SEQ ID NO：10及SEQ ID NO：11所示；其中所述第二可变区是抗体重链可变区，其抗原互补决定区CDR1，CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：15及SEQ ID NO：16所示。2.根据权利要求1所述的抗体或其衍生体，其特征在于，所述抗体或其衍生体具有以下一项或多项特征：a)包含抗体轻链可变区及抗体重链可变区，其轻链可变区序列与SEQ ID NO：17所示的氨基酸序列至少90％以上相同，其重链可变区序列与SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列至少90％以上相同；b)其与人TIGIT抗原结合的亲和力常数值为10nM或小于10nM；c)拮抗阻断TIGIT与其配体CD155(PVR)或CD112(PVRL-2)结合。3.根据权利要求2所述的抗体或其衍生体，其特征在于，所述拮抗阻断TIGIT与其配体CD155(PVR)结合的IC
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值为1nM或小于1nM。4.根据权利要求2所述的抗体或其衍生体，其特征在于，所述第一可变区是抗体轻链可变区，其氨基酸序列为SEQ ID NO：17所示；所述第二可变区是抗体重链可变区，其氨基酸序列为SEQ ID NO：19所示。5.根据权利要求1所述的抗体或其衍生体，其特征在于，所述第一可变区是抗体轻链可变区，其氨基酸序列为SEQ ID NO：8所示；所述第二可变区是抗体重链可变区，其氨基酸序列为SEQ ID NO：13所示。6.根据权利要求1-5任一项所述的抗体或其衍生体，其特征在于，其能拮抗阻断TIGIT与其配体CD155(PVR)或CD112(PVRL-2)结合。7.根据权利要求1-5任一项所述的抗体或其衍生体，其特征在于，其包含所述抗体轻链可变区和人抗体轻链恒定区，及包含所述抗体重链可变区和人抗体重链恒定区的...

【专利技术属性】
技术研发人员：周群敏，孙薇薇，陈蕞，马晓晓，范金玲，胡红群，
申请(专利权)人：广州昂科免疫生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：