靶向α制造技术

本发明专利技术涉及靶向α

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】靶向
α
v
β3整联蛋白的单域抗体


[0001]本专利技术涉及靶向α
v
β3整联蛋白的单域抗体及其各种应用。

技术介绍

[0002]整联蛋白(Integrin)是一种细胞表面受体，其调节细胞的重要生理功能，例如细胞粘附及移动、分化、增殖等。整联蛋白充当α和β亚基由非共价键组成的异二聚体，α和β亚基配对形成22种整联蛋白家族。整联蛋白主要结合细胞外基质蛋白，如玻连蛋白、纤连蛋白、胶原蛋白、层粘连蛋白、血管性血友病因子(vWF)、纤维蛋白原等，每种整联蛋白的配体特异性都有差异，并且一种整联蛋白可以同时与多种配体结合。其中，整联蛋白α
v
β3在包括皮肤癌、前列腺癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、肺癌、胆囊癌、胰腺癌和胃癌在内的各种癌症中的大多数侵袭性肿瘤细胞中表达，并且已知通过调节粘附依赖性肿瘤细胞的生长、存活和渗透来提高各种人类肿瘤的恶性。近年来，已经发现β整联蛋白通过调节细胞内信号传导而作为不依赖于粘附的介质增加肿瘤的生长及转移(David A Cheresh et al.，Naturemedicine 2009，15(10)：1163)。并且，已知上述α
v
β3整联蛋白在微血管生成中广泛表达。
[0003]所谓血管生成(angiogenesis)，是指从现有血管生成新的毛细血管。这是一种严格调节的现象，在正常的生理条件下几乎不发生，但是在受精卵发育过程中的胚胎发育、成人的伤口愈合以及女性的生殖周期中的生殖系统变化等中发生。在成人的情况下，毛细血管内的皮细胞相对不易分裂，分裂速度通常为数月至数年。血管生成通过各种类型的细胞与水溶性因子及细胞外基质(extracellularmatrix)成分之间的相互作用引起的复杂过程而发生，其作用机理尚未查明。上述血管生成成为多种疾病的原因。
[0004]当前，虽然已报道了商业用途的抗体有300000种以上，但只能在固定化的细胞内观察到它们，由于这些原因，无法在细胞内实时观察蛋白质的接触或蛋白质之间的相互作用等。并且，由于现有抗体非常大或者化学上不稳定，无法在活细胞内有效使用。然而，在1993年Hamers
‑
Casterman报道了单域抗体(Hamers
‑
Casterman，C.et al.1993.Nature 363：446
‑
448)，其为源自骆驼科动物的抗体，与现有抗体(两个重链(heavy chain)和两个轻链(light chain))相比，虽然只由重链组成，但功能上却起到完整的抗体的作用。现有抗体分子量为150kDa，重组抗体为25～50kDa，而源自骆驼、美洲驼、鲨鱼的单域抗体却是分子量仅为12～13kDa的非常小的抗体，因此能够轻易向细胞内移动(Cortez
‑
Retamozo，V.et al.2004.Cancer Res.64：2853
‑
2857)，易于进行遗传操作，具有易于在细菌和酵母中表达的优点(Arbabi
‑
Ghahroudii，M.et al.1997.FEBS Lett.414：521
‑
526)。并且，单域抗体具有很高的水溶性，具有在极端的pH条件和高达90℃的温度条件下也很稳定的特征(Dumoulin，M.et al.2002.Protein Sciii.11：500
‑
515，Dumoulin，m.et al.2003.Nature 424：783
‑
788)。

技术实现思路

[0005]技术问题
[0006]本专利技术的目的在于，可以提供靶向α
v
β3整联蛋白(Integrin)单域抗体(Single
‑
domain antibody)。
[0007]并且，本专利技术的目的在于，可以提供包含选自由序列编号1、序列编号2、序列编号3、序列编号4、序列编号5、序列编号6、序列编号7、序列编号8、序列编号9及序列编号10表示的碱基序列组成的组中的一种以上的重组载体。
[0008]并且，本专利技术的目的在于，可以提供由上述重组载体转化的重组微生物。
[0009]并且，本专利技术的目的在于，可以提供用于检测血管生成的组合物。
[0010]并且，本专利技术的目的在于，可以提供用于检测血管生成的试剂盒。
[0011]并且，本专利技术的目的在于，可以提供包含上述单域抗体的用于诊断血管生成相关疾病的组合物。
[0012]并且，本专利技术的目的在于，可以提供靶向α
v
β3整联蛋白的单域抗体的制备方法。
[0013]并且，本专利技术的目的在于，可以提供血管生成抑制剂或血管生成促进剂的筛选方法。
[0014]并且，本专利技术的目的在于，可以提供用于诊断血管生成相关疾病的信息的方法。
[0015]技术方案
[0016]为了实现上述目的，本专利技术提供一种靶向α
v
β3整联蛋白(Integrin)的单域抗体(Single
‑
domain antibody)，其由选自由序列编号1、序列编号2、序列编号3、序列编号4、序列编号5、序列编号6、序列编号7、序列编号8、序列编号9及序列编号10表示的碱基序列组成的组中的一种以上编码。
[0017]并且，本专利技术提供一种重组载体，其包含选自由序列编号1、序列编号2、序列编号3、序列编号4、序列编号5、序列编号6、序列编号7、序列编号8、序列编号9及序列编号10表示的碱基序列组成的组中的一种以上。
[0018]并且，本专利技术提供一种重组微生物，其由上述重组载体转化。
[0019]并且，本专利技术提供一种用于检测血管生成的组合物，其包含上述单域抗体。
[0020]并且，本专利技术提供一种用于检测血管生成的试剂盒，其包含上述单域抗体。
[0021]并且，本专利技术提供一种用于诊断血管生成相关疾病的组合物，其包含上述单域抗体。
[0022]并且，本专利技术提供一种靶向α
v
β3整联蛋白的单域抗体的制备方法，其包括：步骤(1)，培养由重组载体转化的重组微生物，上述重组载体包含选自由序列编号1、序列编号2、序列编号3、序列编号4、序列编号5、序列编号6、序列编号7、序列编号8、序列编号9及序列编号10表示的碱基序列组成的组中的一种以上；以及步骤(2)，在上述微生物中表达对于α
v
β3整联蛋白的单域抗体。
[0023]并且，本专利技术提供一种血管生成抑制剂或血管生成促进剂的筛选方法，其包括：步骤(1)，在从样本分离的生物试样或动物模型中处理所要分析的候选药物；步骤(2)，使上述试样与上述靶向α
v
β3整联蛋白的单域抗体相结合，并测定α
v
β3整联蛋白的水平；以及步骤(3)，选择上述步骤(2)的α
v
β3整联蛋白的水平相对于对照组被抑制或增强的候选药物。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种靶向α
v
β3整联蛋白的单域抗体，其特征在于，由选自由序列编号1、序列编号2、序列编号3、序列编号4、序列编号5、序列编号6、序列编号7、序列编号8、序列编号9及序列编号10表示的碱基序列组成的组中的一种以上编码。2.根据权利要求1所述的靶向α
v
β3整联蛋白的单域抗体，其特征在于，由上述序列编号1表示的碱基序列编码由序列编号11表示的氨基酸序列，由序列编号2表示的碱基序列编码由序列编号12表示的氨基酸序列，由序列编号3表示的碱基序列编码由序列编号13表示的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的靶向α
v
β3整联蛋白的单域抗体，其特征在于，上述抗体为源自骆驼科的重链抗体可变区。4.根据权利要求1所述的靶向α
v
β3整联蛋白的单域抗体，其特征在于，在上述抗体进一步结合有功能分子或元素。5.根据权利要求4述的靶向α
v
β3整联蛋白的单域抗体，其特征在于，上述功能分子或元素为选自由无机粒子、放射性同位素、化学物质、肽、多肽、核酸、碳水化合物及脂质组成的组中的一种以上。6.根据权利要求5所述的靶向α
v
β3整联蛋白的单域抗体，其特征在于，上述无机粒子为荧光标记或染色物质。7.根据权利要求6所述的靶向α
v
β3整联蛋白的单域抗体，其特征在于，上述荧光标记或染色物质为选自由绿色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、蓝色荧光蛋白、蓝绿色荧光蛋白、吖啶染料、花青染料、荧光酮染料、恶嗪染料、菲啶染料及罗丹明染料组成的组中的一种以上。8.根据权利要求5所述的靶向α
v
β3整联蛋白的单域抗体，其特征在于，上述放射性同位素为选自由
18
F(氟)、
11
C(碳)、
15
O(氧)、
13
N(氮)、
89
Zr(锆)、C
15
O、
13
N(氨)、H
215
O及
18
FDG组成的组中的一种以上。9.一种重组载体，其特征在于，包含选自由序列编号1、序列编号2、序列编号3、序列编号4、序列编号5、序列编号6、序列编号7、序列编号8、序列编号9及序列编号10表示的碱基序列组成的组中的一种以上。10.一种重组微生物，其特征在于，由权利要求9所述的重组载体转化。11.一种用于检测血管生成的组合物，其特征在于，包含权利要求1所述的单域抗体。12.一种用于检测血管生成的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的单域抗体。13.一种用于诊断血管生成相关疾病的组合物，其特征在于，包含权利要求1所述的单域抗体。14.根据权利要求13所述的用于诊断血管生...

【专利技术属性】
技术研发人员：张基堉，洪官秀，金灿宇，李炫昇，金县珉，
申请(专利权)人：韩国基础科学支援研究院，
类型：发明
国别省市：