外泌体分离方法和分离系统技术方案

本文提供了一种分离外泌体的方法，包括1)采用死端过滤从包括所述外泌体的细胞培养上清液中除去粒径大于所述外泌体的粒径的细胞组分；以及2)采用切向流过滤对步骤1)获得的滤出液进行循环浓缩，同时除去粒径小于所述外泌体的粒径的细胞组分。本文还提供了外泌体分离系统。本文提供的外泌体分离方法和分离系统可用于外泌体大规模分离，解决了现有技术中外泌体分离操作复杂、样本量小、重复性差的问题。重复性差的问题。重复性差的问题。

【技术实现步骤摘要】
外泌体分离方法和分离系统


[0001]本文涉及分离外泌体的方法和系统，尤其是用于大规模外泌体分离的方法和工艺系统。

技术介绍

[0002]外泌体(Exosomes)是活细胞分泌的，大小为30
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200nm，密度为1.13
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1.18g/ml的双层膜结构囊泡状小体。外泌体携带了多种生物活性物质(如蛋白质、脂质、miRNA等)，因此由细胞分泌的外泌体可代替细胞发挥修复治疗多种重要器官及组织损伤的功能。而且，外泌体的应用避免了细胞直接移植存在的多种潜在风险，且免疫原性低又便于保存和运输，作为“无细胞的细胞治疗技术”显示出独特的优势。因为外泌体的独特运输特性，其也被研究做为药物递送载体，如递送RNA用于基因治疗。而做为递送平台，外泌体的需求量非常大，仅在一只动物(如小鼠)身上进行实验就需要109‑
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个外泌体，因此大规模生产外泌体以及大规模分离外泌体是外泌体临床转化的重要的技术。
[0003]获取高纯度、高产量、标准化的外泌体，是外泌体广泛应用的前提条件。然而，针对外泌体的分本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.分离外泌体的方法，包括步骤：1)采用死端过滤从包括所述外泌体的细胞培养上清液中除去粒径大于所述外泌体的粒径的细胞组分；以及2)采用切向流过滤对步骤1)获得的滤出液进行循环浓缩，同时除去粒径小于所述外泌体的粒径的细胞组分。2.如权利要求1所述的方法，其中步骤1)采用串联连接的两个或更多个死端过滤器进行所述死端过滤。3.如权利要求1或2所述的方法，其中步骤1)中至少一个所述死端过滤器的滤孔孔径为0.22μm。4.如权利要求1
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3任一项所述的方法，其中步骤1)采用两个死端过滤器，其中一个死端过滤器的滤孔孔径为1μm，另一个死端过滤器的滤孔孔径为0.22μm。5.如权利要求1
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4任一项所述的方法，其中所述死端过滤器为囊式过滤器。6.如权利要求1
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5任一项所述的方法，其中所述切向流过滤采用中空纤维柱进行。7.如权利要求1
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6任一项所述的方法，其中所述中空纤维柱的截留分子量为100
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750KD，优选300
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500KD。8.如权利要求1
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7任一项所述的方法，其中步骤2)中切向流过滤采用3psi的剪切力进行。9.如权利要求1
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8任一项所述的方法，其中所述细胞为间充质干细胞。10.如权利要求1
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9任一项所述的方法，其中所述外泌体的平均粒径为30
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200nm。11.外泌体分离系统，包括：1)第一死端过滤装置，用于从包括所述外泌体的细胞培养上清液中除去粒径大于所述外泌体的粒径的细胞组分；2)与所述第一死端过滤装置连接的第一容器，其容纳经所述死端过滤装置过滤后的滤出液；以及3)切向流过滤...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘伟，鄢晓君，张志华，张元元，
申请(专利权)人：北京华龛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：