一种实时荧光恒温扩增检测m6A的方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种实时荧光恒温扩增检测m6A的方法与应用，属于生物检测技术领域。本发明专利技术提供一种实时荧光恒温扩增检测m6A的方法，本发明专利技术的实时荧光恒温扩增检测m6A的方法简便易操作，可在一个反应体系中完成扩增步骤且扩增条件易实现；本发明专利技术的实时荧光恒温扩增检测m6A的方法准确度高、差异明显，无假阳性结果，能使待测物中含m6A修饰的RNA的荧光值远高于不含m6A修饰的RNA的荧光值，荧光值差异可达10倍以上；本发明专利技术的实时荧光恒温扩增检测m6A的方法应用范围广，可用于包括mRNA，lncRNA，rRNA在内的多种RNA的m6A修饰的检测，也可用于m6A相关酶抑制剂筛选。相关酶抑制剂筛选。相关酶抑制剂筛选。

【技术实现步骤摘要】
一种实时荧光恒温扩增检测m6A的方法与应用


[0001]本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种实时荧光恒温扩增检测m6A的方法与应用。

技术介绍

[0002]m6A修饰是真核生物mRNA中的常见的修饰类型，参与了RNA代谢的各种关键过程，目前常使用的检测m6A的方法主要有MeRIP
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seq，PA
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m6A
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seq，miCLIP
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seq，SCARLET以及SELECT。MeRIP
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seq依赖于m6A抗体富集含m6A修饰的RNA片段，进行高通量测序后进行m6A的大概定位，只能进行高甲基化的大概定位，无法准确到单碱基定位。PA
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m6A
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seq、miCLIP
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seq使用紫外交联技术进行免疫沉淀，能够做到单碱基识别。目前仅有SCARLET和SELECT可用于单位点的m6A修饰检测。SCARLET用RNA酶H以及特定序列将需要测定的序列切断，然后将其用磷32标记，再特异性连接到一段DNA上，再用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种实时荧光恒温扩增检测m6A的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取样本的RNA并进行酶切处理，获得酶切片段；(2)针对检测位点设计特异性探针；所述特异性探针的一端含有荧光基团，另一端含有猝灭基团；所述特异性探针的碱基序列与待测RNA片段的部分序列相同，与扩增产物序列互补配对；所述特异性探针两臂的序列不低于4个碱基，且两臂序列互补配对；(3)针对待测RNA片段设计特异性引物；(4)针对非m6A修饰位点设计对照探针和对照引物；(5)将特异性探针和特异性引物、对照探针和对照引物分为两组与酶切片段、T7RNA聚合酶和M
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MuLv逆转录酶加入扩增检测液进行实时荧光定量扩增反应，通过比较两组扩增反应的荧光值判断是否存在m6A修饰。2.根据权利要求1所述的实时荧光恒温扩增检测m6A的方法，其特征在于，所述酶切处理采用MazF酶。3.根据权利要求1所述的实时荧光恒温扩增检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：王红胜，吴优，钟科，黎婕昕，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：