一种抑肽酶的提取纯化方法技术

本发明专利技术涉及蛋白质提取纯化技术领域，公开了一种抑肽酶的提取纯化方法，包括以下步骤：(1)将牛肺绞碎成浆后加入硫酸溶液进行提取，过滤后得到滤液；(2)在所述滤液中加入三氯乙酸，经静置沉淀、过滤、超滤浓缩，得到浓缩液；(3)将所述浓缩液上样至疏水层析柱中，经洗涤、洗脱处理后收集洗脱液；(4)将所述洗脱液上样至凝胶过滤层析柱，经冲洗后收集流出液；(5)所述流出液经超滤换盐、冻干，得到抑肽酶成品。本发明专利技术具有工艺时间短，操作简便的优点，纯化过程可以使抑肽酶理化性质和生物活性保持稳定，最终使抑肽酶的各项指标均符合中国药典标准，本发明专利技术得到的抑肽酶效价达到6000KIU/mg以上，产品收率达85％以上。产品收率达85％以上。

【技术实现步骤摘要】
一种抑肽酶的提取纯化方法


[0001]本专利技术涉及蛋白质提取纯化
，特别是涉及一种抑肽酶的提取纯化方法。

技术介绍

[0002]抑肽酶(Aprotinin)是一种碱性多肽，分子量6500，由58个氨基酸残基组成，它的分子内有3对双硫键，其中一对双硫键(14
‑
38)位于分子表面，它使两段肽链(32
‑
42，9
‑
21)连接在一起，这一对双硫键被还原和重新氧化后不影响抑制剂活力，另外两对双硫键(5
‑
55，30
‑
51)位于分子内部，一旦还原后即失活，整个分子呈梨形，长29A，中部圆形部位直径19A，其活性中心为赖氨酸，位于分子的顶端。抑肽酶为非特异性蛋白酶抑制剂，能抑制多种含有丝氨酸活性基因的蛋白酶，主要抑制纤溶酶；抑肽酶能抑制中性白细胞激活和脱颗粒，减少补体激活，具有抗炎作用：因纤溶酶对血小板数量和功能有破坏作用，抑肽酶对血小板也有保护作用，在临床上已广泛的应用于治疗急性胰腺炎、喘息性支气管炎、烧伤性休克及癌症手术、脑外科、骨科、预防肠粘连、治疗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抑肽酶的提取纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将牛肺绞碎成浆后加入硫酸溶液进行提取，过滤后得到滤液；(2)在所述滤液中加入三氯乙酸，经静置沉淀、过滤、超滤浓缩，得到浓缩液；(3)将所述浓缩液上样至疏水层析柱中，经洗涤、洗脱处理后收集洗脱液；(4)将所述洗脱液上样至凝胶过滤层析柱，经冲洗后收集流出液；(5)所述流出液经超滤换盐、冻干，得到抑肽酶成品。2.根据权利要求1所述的抑肽酶的提取纯化方法，其特征在于，步骤(1)中所述硫酸溶液浓度为0.1
‑
0.2mol/L，且所述硫酸添加量与所述牛肺的比例为(0.5
‑
3)L：1kg。3.根据权利要求1所述的抑肽酶的提取纯化方法，其特征在于，步骤(1)中所述提取为搅拌提取，且所述搅拌提取时间为1
‑
5h。4.根据权利要求1所述的抑肽酶的提取纯化方法，其特征在于，步骤(2)中加入三氯乙酸至滤液饱和度为3.2％；和/或所述静置沉淀时间为2
‑
3h，静置环境温度为10℃以下。5.根据权利要求1所述的抑肽酶的提取纯化方法，其特征在于，步骤(2)中所述超滤浓缩采用的是1KD超滤膜。6.根据权利要求1所述的抑肽酶的提取纯化方法，其特征在于，步骤(3)中将所述浓缩液上样至疏水层析柱之前还包括：加入...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡著阳，万偲，耿卫锋，李菊根，魏超娟，夏克坚，
申请(专利权)人：江西浩然生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：