一种高效表达生产半胱氨酸蛋白酶抑制剂的方法技术

一种高效表达生产半胱氨酸蛋白酶抑制剂的方法，具体步骤为：先PCR扩增半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因CST7，通过双酶切与表达载体质粒pPIC9K连接，在毕赤酵母里构建了重组基因，引入了外源基因CST7，通过诱导CST7基因表达。本发明专利技术构建的高效表达半胱氨酸蛋白酶抑制剂工程菌能够高效生产半胱氨酸蛋白酶抑制剂，对表达的产物进行分离纯化后半胱氨酸蛋白酶抑制剂含量可达到80％以上。本发明专利技术应用于生产半胱氨酸蛋白酶抑制剂领域。氨酸蛋白酶抑制剂领域。氨酸蛋白酶抑制剂领域。

【技术实现步骤摘要】
一种高效表达生产半胱氨酸蛋白酶抑制剂的方法


[0001]本专利技术涉及一种蛋白酶抑制剂的制备方法，更具体地说，涉及半胱氨酸蛋白酶抑制剂的生产方法。

技术介绍

[0002]半胱氨酸蛋白酶抑制剂又名巯基蛋白酶抑制剂，是指一类可逆竞争性地结合半胱氨酸蛋白酶并对其活性具有抑制效果的蛋白酶抑制因子。分布于各生物体内，并且在生物体的各个生理和病理过程中发挥着重要作用。比如蛋白质代谢，抗原加工，炎症反应，营养失调和新陈代谢及控制酶活力等。半胱氨酸蛋白酶抑制剂可以与木瓜蛋白酶，组织蛋白酶等酸性蛋白酶形成紧密的复合物，抑制他们的活性，从而保护蛋白质的二硫键不被半胱氨酸蛋白酶破坏，组织蛋白的降解。植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂可抑制致病真菌，如赤霉菌和稻瘟病等的生长，其作用机制可能与半胱氨酸蛋白酶抑制剂抑制了半胱氨酸肽链内切酶的侵害有关。人类半胱氨酸蛋白酶抑制剂对肿瘤转移、病毒的感染都有抑制作用。半胱氨酸蛋白酶抑制剂C在动物胚胎中含量最高，可能对发育着的胚胎有保护作用。近年来有报道，半胱氨酸蛋白酶抑制剂在细胞程序性死亡中也起重要的调节作用。对于鱼类的半胱氨酸蛋白酶抑制剂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高效表达生产半胱氨酸蛋白酶抑制剂的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、根据NCBI上半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因序列设计引物SsCyt/F和SsCyt/R，然后PCR扩增得到半胱氨酸蛋白酶抑制剂CST7；其中，所述半胱氨酸蛋白酶抑制剂的基因序列NCBIGeneID：100152012；所述引物SsCyt/F序列为：5'
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atgcgtcctgccagggtgct
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3'；所述引物SsCyt/R序列为：5'
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tcagtgacatcggagaacag
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3'S2、将所述抑制剂CST7利用引物CytF/HF和Cyt/ER进行PCR扩增，并插入HindIII和EcoRI两个酶切位点，连接形成融合片段Hind III
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CST7
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EcoR I，然后用Hind III和EcoR I对上述融合片段进行双酶切，同时对表达载体pPIC9K进行双酶切；将双酶切后的半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因CST7的融合片段与双酶切的后的表达载体pPIC9K连接，再热激转入大肠杆菌中，获得重组质粒pPIC9K
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CST7；其中，所述引物CytF/HF序列为：5'
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cccaagcttatgcgtcctgccagggtgct
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3'；所述引物Cyt/ER序列为：5'
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cggaattcgtgacatcggagaacagag
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【专利技术属性】
技术研发人员：王震宇，常思佳，杜明，吴超，王嘉敏，王逐鹿，
申请(专利权)人：大连工业大学，
类型：发明
国别省市：