一种快速提取高纯度大白菜原生质体的方法技术

本发明专利技术提供了一种快速提取高纯度大白菜原生质体的方法，属于植物细胞技术领域，包括以下步骤：将大白菜叶片经酶解液酶解，得到原生质体悬浮液；将原生质体悬浮液过滤、离心，得到原生质体；将原生质体经CPW溶液悬浮，得到悬浮液，将所述悬浮液添加到蔗糖溶液上部后离心，获取绿色中间层；所述蔗糖溶液中蔗糖的质量百分含量为20％；将绿色中间层经CPW溶液悬浮、离心，得到原生质体，将得到的原生质体重悬于CPW溶液，得到高纯度大白菜原生质体。采用本发明专利技术提供的蔗糖浓度能有效减少原生质体混合物中的杂质和细胞碎片，从而获得高纯度的原生质体，为后续开展原生质体再生、培养、测序等后续相关试验提供良好基础。续相关试验提供良好基础。续相关试验提供良好基础。

【技术实现步骤摘要】
一种快速提取高纯度大白菜原生质体的方法


[0001]本专利技术属于植物细胞
，尤其涉及一种快速提取高纯度大白菜原生质体的方法。

技术介绍

[0002]大白菜(B.rapa ssp.pekinensis)是我国蔬菜栽培最早的芸薹属蔬菜作物，已逐渐成为世界性蔬菜。大白菜食用器官为叶球，是由叶片向内高度卷曲生长而形成的器官。随着大白菜全基因组的公布，大白菜基因功能的研究逐渐加快，大量重要基因的功能特征需进一步鉴定，并利用这些基因进行相关的基因工程品种改良，改善大白菜的品质。
[0003]目前制备植物原生质体的最常用的方法为酶解法。在同一酶解条件下，酶解时间越长，原生质体的产量愈高，但原生质体的活力下降。草莓花药愈伤组织原生质体游离时，在同一酶解条件下，比较了5个酶解时间(1h、5h、10h、13h、14h)，结果发现酶解13h后，大部分愈伤组织被酶解，且活力达67.35％。比较不同酶解时间对辣椒原生质体的分离效果，发现酶解时间在4～10h范围内，随酶解时间的增加，原生质体的产率显著提高，酶解10h原生质体产量可达17.65
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速提取高纯度大白菜原生质体的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将大白菜叶片经酶解液酶解，得到原生质体悬浮液；2)将所述步骤1)得到的原生质体悬浮液过滤、离心，得到原生质体；3)将所述步骤2)得到的原生质体经CPW溶液悬浮，得到悬浮液，将所述悬浮液添加到蔗糖溶液上部后离心，获取绿色中间层；所述蔗糖溶液中蔗糖的质量百分含量为20％
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30％；4)将所述步骤3)得到的绿色中间层经CPW溶液悬浮、离心，得到原生质体，将得到的原生质体重悬于CPW溶液，得到高纯度大白菜原生质体。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)酶解液以CPW溶液为溶剂，含有质量体积百分含量为1％的纤维素酶和0.25％的离析酶。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述纤维素酶为纤维素酶R
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10，所述离析酶为离析酶R

【专利技术属性】
技术研发人员：孙晓雪，卢银，秦瑞鑫，赵建军，
申请(专利权)人：河北农业大学，
类型：发明
国别省市：