重组肌酸酶的制备方法和应用技术

本申请公开了一种重组肌酸酶的制备方法和应用。本申请中，开发了基于基因工程技术的肌酸酶制备方法，将经同义密码子偏好性优化的编码肌酸酶的多核苷酸导入载体，成功构建原核表达质粒，提高了目的蛋白的表达量；本申请中经过培养基和培养温度等培养条件的优化，并组合菌种来源的筛选，进一步提高了可溶性目的蛋白的产量，所得重组肌酸酶活性高。所得重组肌酸酶活性高。所得重组肌酸酶活性高。

【技术实现步骤摘要】
重组肌酸酶的制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及基因工程领域，特别涉及重组肌酸酶的制备方法和应用。

技术介绍

[0002]肌酸酶来源于微生物，由单亚基或者2个相同的亚基组成，亚基分子量在45
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51kDa、范围内，如P.putida var.naraensis的肌酸酶分子量为94kD，由两个相同的47kD的亚基组成，每个亚基有一个巯基基团，此基团与肌酸酶的活性紧密相关；产碱菌Alcaligenes的肌酸酶是单亚基酶，分子量为51kD，用分子生物学方法对肌酸水解酶基因进行克隆表达，得到重组酶均为单亚基酶，分子量在42
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50kD之间；如黄杆菌(Flavobacterium sp.U
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188)的分子量42.7kD。
[0003]肌酐是人体中重要的代谢产物，血液中肌酐含量一般维持在35
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150μmol/L，多余的肌酐将通过肾脏系统排到体外。一旦人体肾脏功能出现问题，肌酐无法随尿液排出，血液中的肌酐含量就会随之升高，测定血液和尿液中肌酐的含量就可以反应肾脏功能。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种编码肌酸酶的分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸经密码子优化，且所述多核苷酸选自以下任一种：(i)具有如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.4所示序列的多核苷酸；(ii)具有与如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.4所示序列的同源性大于95％的多核苷酸；和(iii)具有与(i)或(ii)中所述的多核苷酸序列互补的多核苷酸。2.根据权利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，所述编码肌酸酶的多核苷酸由编码恶臭假单胞菌源肌酸酶的多核苷酸序列经同义密码子偏好性优化获得；或，所述编码肌酸酶的多核苷酸由编码恶臭假单胞菌源肌酸酶的多核苷酸序列经同义密码子偏好性优化获得。3.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包括如权利要求1或2所述的多核苷酸。4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为大肠杆菌表达载体，优选为pET
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28a。5.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括如权利要求3或4中任一项所述的表达载体；或者所述宿主细胞的基因组中整合有如权利要求1或2所述的多核苷酸。6.一种制备肌酸酶的方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱伟伟，蒋析文，张伟，刘春奇，陈园园，林海辉，
申请(专利权)人：广州达安基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：