一种实现DNA上C/G到T/A编辑的RsCBE系统技术方案

本发明专利技术属于基因编辑技术领域，公开了一种实现DNA上C/G到T/A编辑的RsCBE编辑系统。该编辑系统采用Ruminococcus sp.AF17

【技术实现步骤摘要】
一种实现DNA上C/G到T/A编辑的RsCBE系统


[0001]本专利技术属于基因编辑
，是一种实现DNA上C/G到T/A编辑的RsCBE编辑系统。

技术介绍

[0002]线粒体疾病是一类严重危害人类健康可致残致死的母性遗传疾病，如线粒体脑肌病、共济失调等。线粒体疾病常由细胞核基因突变和线粒体DNA突变引起，特别地，针对线粒体DNA(mtDNA)突变造成的线粒体疾病更是束手无策，其中最重要的原因是缺少线粒体基因编辑工具构建线粒体疾病动物模型，以开展系统的分子机制研究和治疗方法探索。
[0003]由于RNA无法进入线粒体，因此现有的基于CRISPR的编辑工具无法用来编辑mtDNA。通过融合线粒体定位信号肽的限制性内切酶、mito
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ZFN和mito
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TALEN可以对突变的mtDNA引入DNA双链断裂(DSB)，以降低突变mtDNA的比例。然而，这些方法不能实现对mtDNA进行单个碱基的精准编辑，因此不能用来构建mtDNA突变动物疾病模型，也无法用于探索线粒体疾病的精准治疗。<br/>[0004]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种双链DNA胞嘧啶脱氨基酶DddA结构域，其特征在于该DddA结构域为Ruminococcus sp.AF17
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6来源的双链DNA胞嘧啶脱氨基酶DddA结构域，其基因名为DWW94_10390，编码INTEIN_C_TER domain
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containing protein的145
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281位氨基酸(Uniprot ID：A0A373WC03)。2.权利要求1所述的胞嘧啶脱氨基酶DddA结构域，其特征在于该DddA结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。3.来自权利要求1所述DddA结构域的分割蛋白，其特征在于，按该DddA的结构域的氨基酸结构特征选择在N188N位点进行分割得到一对half DddA的分割蛋白，为：N188N和N188C，以及，按该DddA的结构域的氨基酸结构特征选择在N256位点进行分割得到一对half DddA的分割蛋白，为N256N和N256C；分割蛋白成对使用。4.根据权利要求3所述的分割蛋白，其特征在于，该分割蛋白为核苷酸序列如下所示的分割蛋白：N188N氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；N188C氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；N256N氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；N256C氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示。5.权利要求1、2所述DddA结构域或者权利要求3、4所述分割蛋白在构建DNA的C/G到A/T编辑的胞嘧啶编辑系统RsCBE中的应用。6.采用权利要求1、2所述DddA结构域或者权利要求3、4所述分割蛋白构建的胞嘧啶编辑系统RsCBE。7.根据权利要求6所述胞嘧啶编辑系统RsCBE，包括RVD文库、线粒体定位骨架载体和细胞核定位骨架载体，其特征在于，用于实现线粒体DNA的C/G到T/A编辑的胞嘧啶编辑系统RsCBE采用MTS
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RsCBE骨架载体，用于实现细胞核DNA的C/G到T/A编辑的胞嘧啶编辑系统RsCBE采用NLS
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RsCBE骨架载体；即：将Ruminococcus来源的双链DNA胞嘧啶脱氨基酶DddA结构域的分割成half DddA的4个分割蛋白配对分别和糖基化酶抑制剂(UGI)融合之后分别插入到MTS
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TALE骨架载体的NheⅠ和PmeⅠ这两个酶切位点之间分别得到4个MTS
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RsCBE骨架载体；将Ruminococcus来源的双链DNA胞嘧啶脱氨基酶DddA结构域的分割成half DddA的4个分割蛋白配对分别和糖基化酶抑制剂(UGI)融合之后分别插入到NLS
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TALE骨架载体的NheⅠ和PmeⅠ这两个酶切位点之间分别得到4个NLS
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RsCBE骨架载体。8.根据权利要求7所述胞嘧啶编辑系统RsCBE，其特征在于，4个MTS
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RsCBE骨架载体分别为：MTS
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ccdb
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N188N
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UGI、MTS
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ccdb
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N188C
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UGI、MTS
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ccdb
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N256N
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UGI、MTS
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ccdb
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N256C
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UGI；4个NLS
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RsCBE骨架载体分别为：NLS
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ccdb
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N188N
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UGI、NLS
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ccdb
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N188C
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UGI、N...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈彬，程凯，郭佳银，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：