重组灵芝免疫调节蛋白新突变体及其应用制造技术

本申请涉及一种重组蛋白，所述重组蛋白包含间隔肽和重组灵芝免疫调节蛋白突变体(rLZ

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】重组灵芝免疫调节蛋白新突变体及其应用


[0001]本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种重组灵芝免疫调节蛋白的突变体(rLZ
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8突变体)，以及其在治疗肿瘤中的应用。

技术介绍

[0002]灵芝免疫调节蛋白(LZ
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8)是在1989年，Kino等人从赤灵芝菌丝体提取物中分离纯化所得。提取获得的LZ
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8含有1.3％的多糖，在体外具有促有丝分裂活性；在体内具有免疫调节活性。同时，LZ
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8对绵羊红细胞具有凝集作用，但对人红细胞(A、B、AB和O型)并没有凝集作用。在体内研究发现，如果反复给药，LZ
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8可防止小鼠系统性过敏反应的产生。
[0003]重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ
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8)是通过基因重组技术获得的。与天然的灵芝免疫调节蛋白相比，氨基酸序列相同、活性相似但并不含有多糖。研究显示，rLZ
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8不仅在体外能快速高效诱导多种肿瘤细胞凋亡，而且在体内小鼠肿瘤模型也能有效杀死肿瘤细胞，并能保持或升高白细胞的水平。除此之外，rLZ
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8在治疗组织纤维化、局灶性脑缺血、血小板减少症、骨质疏松和心力衰竭等方面的作用也已有相关专利公布授权。
[0004]重组灵芝免疫调节蛋白突变体(rLZ
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8突变体)是通过对rLZ
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8某个或者某几个氨基酸突变而来的。机制研究发现rLZ
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8突变体可以与人体细胞表面的表皮生长因子受体(EGFR)结合内化进入细胞，由于不能被降解而滞留在细胞内。通过高强度内化进而阻滞细胞膜循环最终使细胞皱缩、破裂和死亡。肿瘤细胞杀伤实验结果表明，rLZ
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8突变体比rLZ
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8具有更好的肿瘤杀伤效果。Biacore研究结果表明，rLZ
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8突变体与EGFR具有更好的亲和力；多种人源癌细胞原位移植瘤模型小鼠实验结果表明，rLZ
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8突变体对延长小鼠生存期、抑制肿瘤生长均优于rLZ
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8。
[0005]然而，虽然rLZ
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8和rLZ
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8突变体都表现出了肿瘤杀伤作用，但都面临低蛋白表达水平，产业化难的挑战。另一方面，蛋白分子对于人类是否安全也是药品开发需要考量的重点。

技术实现思路

[0006]本申请提供了一种重组蛋白，所述重组蛋白包含间隔肽和重组灵芝免疫调节蛋白突变体(rLZ
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8突变体)，其中与SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列相比，所述rLZ
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8突变体的氨基酸序列包含至少一个氨基酸突变。本申请的重组蛋白具有选自下组的至少一种特点：(1)较高的表达量和/或分泌量(例如，在酵母表达系统中)；(2)具有较高的安全性，满足成药的安全性要求；例如，已通过临床前安全评估，和/或，获得临床试验许可(3)容易通过内化进入细胞；和(4)抑制肿瘤生长，杀伤肿瘤细胞能力强。
[0007]一方面，本申请提供了一种重组蛋白，所述重组蛋白包含间隔肽和重组灵芝免疫调节蛋白突变体(rLZ
‑
8突变体)，其中与SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列相比，所述rLZ
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8突变体的氨基酸序列包含至少一个氨基酸突变。
[0008]在某些实施方式中，所述rLZ
‑
8突变体包含SEQ ID NO：13和16
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21中任一项所示的
氨基酸序列。
[0009]在某些实施方式中，所述rLZ
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8突变体包含SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列。
[0010]在某些实施方式中，所述间隔肽包含1
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5个EA。
[0011]在某些实施方式中，所述间隔肽包含2个EA。
[0012]在某些实施方式中，所述间隔肽包含SEQ ID NO：8
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9中任一项所示的氨基酸序列。
[0013]在某些实施方式中，所述间隔肽包含SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列。
[0014]在某些实施方式中，所述间隔肽位于所述rLZ
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8或其突变体的N端。
[0015]在某些实施方式中，所述重组蛋白包含SEQ ID NO：14、15、22
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33中任一项所示的氨基酸序列。
[0016]在某些实施方式中，所述重组蛋白包含SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列。
[0017]另一方面，本申请提供了一种分离的核酸分子，所述分离的核酸分子编码所述重组蛋白。
[0018]另一方面，本申请提供了一种载体，所述载体包含所述分离的核酸分子。
[0019]另一方面，本申请提供了一种细胞，所述细胞包含所述分离的核酸分子和/或所述载体。
[0020]在某些实施方式中，所述细胞为真核细胞。
[0021]在某些实施方式中，所述细胞为酵母细胞。
[0022]另一方面，本申请提供了一种多肽，所述多肽包含所述的重组蛋白。
[0023]另一方面，本申请提供了一种制备所述的重组蛋白的方法，所述方法包括在使得所述的重组蛋白表达的条件下，培养所述的细胞。
[0024]另一方面，本申请提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含所述的重组蛋白、所述的分离的核酸分子、所述的载体、所述的多肽和/或所述的细胞，以及任选地药学上可接受的载体。
[0025]另一方面，本申请提供了一种试剂盒，所述试剂盒包含所述的重组蛋白、所述的分离的核酸分子、所述的载体、所述的细胞、所述的多肽和/或所述的药物组合物。
[0026]另一方面，本申请提供了一种给药装置，所述给药装置所述的重组蛋白、所述的分离的核酸分子、所述的载体、所述的细胞、所述的多肽和/或所述的药物组合物。
[0027]另一方面，本申请提供了一种预防、缓解或治疗肿瘤的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用所述的重组蛋白、所述的分离的核酸分子、所述的载体、所述的细胞、所述的多肽和/或所述的药物组合物。
[0028]另一方面，本申请提供了所述的重组蛋白、所述的分离的核酸分子、所述的载体、所述的细胞、所述的多肽和/或所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于预防、缓解或治疗肿瘤。
[0029]另一方面，本申请提供了所述的重组蛋白、所述的分离的核酸分子、所述的载体、所述的细胞、所述的多肽和/或所述的药物组合物，其用于预防、缓解或治疗肿瘤。
[0030]在某些实施方式中，所述肿瘤包括非实体瘤。
[0031]在某些实施方式中，所述肿瘤包括实体瘤。
[0032]在某些实施方式中，所述肿瘤包括具有EGFR表达和/或EGFR表达异常的肿瘤。
[0033]在某些实施方式中，所述肿瘤包括与EGFR突变相关的肿瘤。在某些实施方式中，所
述肿瘤包括与BRAF突变相本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.重组蛋白，其包含间隔肽和重组灵芝免疫调节蛋白突变体(rLZ
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8突变体)，其中与SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列相比，所述rLZ
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8突变体的氨基酸序列包含至少一个氨基酸突变。2.根据权利要求1所述的重组蛋白，其中所述rLZ
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8突变体包含SEQ ID NO：13和16
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21中任一项所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1
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2中任一项所述的重组蛋白，其中所述rLZ
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8突变体包含SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的重组蛋白，其中所述间隔肽包含1
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5个EA。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的重组蛋白，其中所述间隔肽包含2个EA。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的重组蛋白，其中所述间隔肽包含SEQ ID NO：8
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9中任一项所示的氨基酸序列。7.根据权利要求1
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6中任一项所述的重组蛋白，其中所述间隔肽包含SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列。8.根据权利要求1
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7中任一项所述的重组蛋白，其中所述间隔肽位于所述rLZ
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8突变体的N端。9.根据权利要求1
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8中任一项所述的重组蛋白，其包含SEQ ID NO：14、15、22
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33中任一项所示的氨基酸序列。10.根据权利要求1
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9中任一项所述的重组蛋白，其包含SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列。11.分离的核酸分子，其编码权利要求1
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10中任一项所述的重组蛋白。12.载体，其包含权利要求11所述的分离的核酸分子。13.细胞，其包含权利要求11所述的分离的核酸分子和/或权利要求12所述的载体。14.根据权利要求13所述的细胞，其为真核细胞。15.根据权利要求13
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14中任一项所述的细胞，其为酵母细胞。16.多肽，其包含权利要求1
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10中任一项所述的重组蛋白。17.制备权利要求1
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10中任一项所述的重组蛋白的方法，其包括在使得权利要求1
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10中任一项所述的重组蛋白表达的条件下，培养根据权利要求13

【专利技术属性】
技术研发人员：张欣，宋公明，贾伟，张喜田，
申请(专利权)人：上海钻智生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：