一种提高DC细胞活性的组合物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种提高DC细胞活性的组合物及其应用。本发明专利技术以Smad3蛋白为靶标，通过免疫小鼠以及杂交瘤技术制备并获得smad3特异性的单克隆抗体，所述抗体能够较好的抑制smad3的活性进而增强DC细胞的活力能够更好的杀伤癌细胞。细胞。细胞。

【技术实现步骤摘要】
一种提高DC细胞活性的组合物及其应用


[0001]本申请涉及单克隆抗体，具体的涉及一种提高DC细胞活性的组合物及其应用。

技术介绍

[0002]胞浆蛋白Smads是传导转化生长因子
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β(TGFβ)信号通路关键的信号传导分子。其中，Smads蛋白家族中的Smad3、Smad7在肿瘤的发生、发展过程中起到重要作用，成为目前肿瘤研究的热点，倍受人们的关注。Smads蛋白由400
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500个氨基酸组成。其分子的一级结构中，有3个功能区，分别为：N端白匀MHl区，可与DNA的CAGAC序列结合，高度保守；C端的MH2区；二者之间的连接区，这一区域富含脯氨酸，可与转录辅激活蛋白或辅阻遏物相互作用。其中瑚2区是Smads蛋白的功能效应区，而MHl区是MH2区的功能抑制区。其中有一个短连接区(Linker)，位于两个结构域之间，含有若干个磷酸化位点，富含脯氨酸。这种结构导致Smads信号传导通路与MAPK信号传导通路存在交联反应川。迄今为止，在TGF
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β信号传导通路特异性的下游靶分子中，Smads蛋白是唯一被认定的。研究发现，Smads蛋白家族含有8个成员，他们是Smadl、Smad2、Smad3、Smad4、Smad5、Smad6、Smad7及Smad8。
[0003]Smads蛋白能将TGF信号从细胞外传递到细胞核内，是TGF
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β/Smads信号传导通路中的重要组成成员。如果Smads的表达缺失或突变，则可以使TGF
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β信号传导通路的传递发生中断，从而导致许多恶性肿瘤的发生发展。在结肠癌、肺癌、乳腺癌中，在染色体15q21
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22区域，发生等位缺失的情况非常常见，而Smad3N恰定位在这个区域。如果鼠缺失Smad3基因，那么它将非常有可能发生转移性结肠癌和转移性指肠癌。癌蛋白c
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Ski的扩增、融合蛋白AML/Evil的扩增和AML/MDS/Evi
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l的扩增可以导致Smad3的功能性失活。应用PCR
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SSCP技术检测36例人卵巢癌标本中的Smad3基因发现，在103位密码子呈现多态性的Smad3基因在卵巢癌的标本中占15例，其与卵巢癌的关系目前还不是很清楚，Smad3基因在这些标本中没有氨基酸的改变。Smad3表达受Smad3抑制子的调节，一旦这种调节出现错误，其后果是造成Smad3的功能性失活。以血液恶性肿瘤为例，如果恶性肿瘤细胞出现了选择性的生长优势，那么可以肯定的是Smad3的活性受到了抑制。也有研究报道，TGF
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β信号传导通路不能抑制Smad3表达缺失的胃癌细胞的生长，但是，一旦我们将Smad3基因重新导入到胃癌细胞之后，就又能发现新的生长抑制作用。
[0004]树突状细胞(Dendriticcells，DC)是目前已知的人体内功能最强大的、能唯一能激活静息期T细胞的专职抗原呈递细胞，具有强大的激活CD8+细胞毒性T细胞(cytotoxicTcell，CTL)及CD4+辅助T细胞的能力。DC肿瘤疫苗是肿瘤治疗的第四模式之一，DC肿瘤疫苗将会是一种很有实用前景的抗肿瘤方法。肿瘤全细胞抗原含有全部的肿瘤抗原，因而无需明确肿瘤抗原，致敏DC后能表达MHC
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、Ⅱ类分子及共刺激分子，会使疫苗的抗瘤作用明显提高。此类抗原包括凋亡坏死肿瘤细胞裂解物或提取物、完整肿瘤细胞等。用热休克凋亡食管癌细胞负载自体树突状细胞，实验发现其能有效刺激T细胞的增殖，明显提高对自体肿瘤细胞及细胞株的杀伤作用。应用患者自体外周血单个核细胞培养DC负载肿瘤裂解物治疗进展期结直肠癌6例，具体方法为：皮内注射DC疫苗，每2周1次，共5次，其中有5例
患者完成5次疫苗注射。患者有良好耐受性，所有患者未发现与疫苗有关的不良反应，表明DC疫苗安全、无毒。到目前为止，已经开展了黑色素瘤、肝癌、乳腺癌、白血病、肾癌、前列腺癌等肿瘤细胞与DC的融合研究。将绿色荧光标记的DC与用红色荧光标记的自身肿瘤细胞融合，然后用即时发光细胞分选技术纯化该融合细胞，将该细胞作为疫苗，治疗转移黑色素瘤患者取得了较好效果。对35例晚期肝癌患者进行Ⅱ期临床实验，使用肝癌细胞系HepG2致敏肝癌患者DC，结果显示疾病控制率(部分临床反应和病情稳定3个月)为28％，17例AFP＞1000g/L的患者中有4例AFP水平下降70％以上。肿瘤全细胞抗原负载的DC肿瘤疫苗的缺点为含非肿瘤相关抗原量大且种类多，易诱发自身免疫性疾病，所需肿瘤细胞数量多，最佳刺激量很难确定。
[0005]研究表明TGF
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β可上调Smad3的表达，从而介导TGF
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β在胞内的信号传导。研究表明用反义Smad3转染可以有效的抑制TGF
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β/Smad3信号通路。并且用全抗原负载的方法制备成乳腺癌特异性疫苗，结果表明：经siRNA
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Smad3转染的DC疫苗DC细胞表面成熟标记分子表达上调，分泌IL
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12的量显著升高，表明通过沉默Smad3阻断了DC的TGF
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β1的传导通路后，TGF
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β1对DC成熟抑制明显减弱。致敏DC诱导的CTL对乳腺癌杀伤效果也显示出siRNA
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Smad3转染DC的疫苗在TGF
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β1作用下对乳腺癌的杀伤效率明显高于未经转染的siRNA
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Smad3组。这也说明在有外源性TGF
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β1存在下，通过沉默Smad3来阻断TGF
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β1传导通路，可以逆转TGF
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β1对DC的抑制作用，并且能提高DC疫苗的抗肿瘤活性。这也为乳腺癌特异性疫苗提供了新的思路。但是目前，可供选择的肿瘤疫苗还不够多，有待进一步的提高。

技术实现思路

[0006]本申请针对Smad3蛋白制备并获得了单克隆抗体S13H4。
[0007]具体的，本专利技术的单克隆抗体S13H4，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0008]进一步的，本专利技术的单克隆抗体能够特异性的结合Smad3蛋白表现了较好的特异性。
[0009]具体的，本专利技术的单克隆抗体能够以大于1
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105L/mol亲和效果亲和Smad3蛋白；本专利技术的单克隆抗体能够以大于1
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106L/mol亲和效果亲和Smad3蛋白；本专利技术的单克隆抗体能够以大于1
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107L/mol亲和效果亲和Smad3蛋白；本专利技术的单克隆抗体能够以大于1
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108L/mol亲和效果亲和Smad3蛋白；本专利技术的单克隆抗体能够以大于1
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109L/mol亲和效果亲和Smad3蛋白；本专利技术的单克隆抗体能够以大于1.5
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109L/mol亲和效果亲和Smad3蛋白；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性针对Smad3的单克隆抗体，其特征在于所述单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。2.一种用于抑制细胞中Smad3蛋白活性的药物组合物，其特征在于所述组合物中含有特异性针对Smad3的单克隆抗体，所述单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：李俊明，江子杨，
申请(专利权)人：成都俊贤明干细胞生物科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：