一种验证布美他尼能改善精神分裂症认知损伤的实验方法技术

本发明专利技术提供一种验证布美他尼能改善精神分裂症认知损伤的实验方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一：制备精神分裂症模型组大鼠和对照组大鼠；步骤二：通过免疫印迹实验验证精神分裂症模型组大鼠存在NKCC1/KCC2表达失衡；步骤三：验证布美他尼能改善精神分裂症模型组大鼠认知损伤。根据多次实验发现，精神分裂症模型组大鼠存在显著NKCC1/KCC2失衡，而NKCC1/KCC2系统调节药物布美他尼可显著改善精神分裂症模型组大鼠的认知损伤，且起效周期短、改善效果高效、稳定，证实了布美他尼在精神分裂症认知损伤中的治疗价值。症认知损伤中的治疗价值。症认知损伤中的治疗价值。

【技术实现步骤摘要】
一种验证布美他尼能改善精神分裂症认知损伤的实验方法


[0001]本专利技术属于精神病研究
，具体涉及一种验证布美他尼能改善精神分裂症认知损伤的实验方法。

技术介绍

[0002]精神分裂症患者临床症状包括阳性症状、阴性症状、认知损伤，其中认知损伤是影响患者社会功能恢复的主要限制因素。而现有的抗精神病药物可显著改善患者的阳性和阴性症状，但对认知损伤的改善效果并不理想。这些药物治疗无效的根源在于导致认知缺陷的分子机制不明、进而缺乏针对认知损伤的药物治疗。
[0003]前期本人制备精神分裂症大鼠模型，发现模型大鼠成年期海马NKCC1表达增加，KCC2表达降低，存在NKCC1/KCC2失衡现象，本发现提示NKCC1/KCC2失衡有可能作为精神分裂症认知损伤的药物研发靶点。而布美他尼作为NKCC1/KCC2系统调节药物，本人猜想其可显著改善精神分裂症模型大鼠的认知损伤，故而需要一种实验进行证实。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是针对现有技术的不足，提供一种验证布美他尼能改善精神分裂症认知损伤的实验方法，具体方案如下：一种验证布美他尼能改善精神分裂症认知损伤的实验方法，其包括以下步骤：步骤一：制备精神分裂症模型组大鼠和对照组大鼠；步骤二：通过免疫印迹实验验证精神分裂症模型组大鼠存在NKCC1/KCC2表达失衡；步骤三：验证布美他尼能改善精神分裂症模型组大鼠认知损伤。
[0005]基于上述，所述步骤一包括以下操作步骤：步骤1：母体处理：模型组孕鼠在怀孕第9天一侧尾静脉注射10mg/kg的Poly I:C，对照组孕鼠在怀孕第9天一侧尾静脉注射等体积生理盐水处理；步骤2：母体检测：3小时后在模型组孕鼠、对照组孕鼠的另一侧尾静脉分别抽取约1ml血液，并添加EDTA抗凝，4℃、1000g、离心15min，取上层血清，ELISA检测二者血浆炎症因子IL
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1β、IL
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6、TNF
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α含量，当结果显示模型组孕鼠相对于对照组孕鼠的炎症因子IL
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1β、IL
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6、TNF
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α水平显著升高时，提示母体免疫激活模型制备成功；步骤3：将模型组孕鼠、对照组孕鼠的子代雄性大鼠正常饲养至成年期，即为精神分裂症模型组大鼠和对照组大鼠。
[0006]基于上述，所述步骤三包括以下操作步骤：步骤1：将精神分裂症模型组大鼠分为两组，给予其中一组连续7天腹腔注射布美他尼（15 mg/kg），以同样注射方式给予另外一组以及对照组大鼠安慰剂处理；步骤2：用新物体识别实验评估三组大鼠的认知状态；步骤3：对三组大鼠进行脑电检测。
[0007]本专利技术相对现有技术具有突出的实质性特点和显著的进步，具体地说，本专利技术具有以下优点：根据多次实验发现，精神分裂症模型组大鼠存在显著NKCC1/KCC2失衡，而NKCC1/KCC2系统调节药物布美他尼可显著改善精神分裂症模型组大鼠的认知损伤，且起效周期短、改善效果高效、稳定，证实了布美他尼在精神分裂症认知损伤中的治疗价值。
附图说明
[0008]图1是本专利技术中ELISA检测孕期母体免疫激活状态的数据分析图。
[0009]图2是本专利技术中通过免疫印迹实验检测精神分裂症模型组大鼠和对照组大鼠NKCC1/KCC2表达水平的数据分析图。
[0010]图3是本专利技术中对两组精神分裂症模型组大鼠分别给予安慰剂、布美他尼以及对照组大鼠给予安慰剂后进行新物体识别实验数据分析图。
[0011]图4是是本专利技术中对两组精神分裂症模型组大鼠分别给予安慰剂、布美他尼以及对照组大鼠给予安慰剂后进行脑电检测的数据分析图。
具体实施方式
[0012]下面通过具体实施方式，对本专利技术的技术方案做进一步的详细描述。
实施例
[0013]本专利技术提供一种验证布美他尼能改善精神分裂症认知损伤的实验方法，其包括以下步骤：步骤一：制备精神分裂症模型组大鼠和对照组大鼠；步骤二：通过免疫印迹实验验证精神分裂症模型组大鼠存在NKCC1/KCC2表达失衡（如图2A
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B所示，免疫印迹检测海马NKCC1和KCC2蛋白表达，并统计分析，结果发现，相对于对照组大鼠来说，精神分裂症模型组大鼠海马NKCC1表达显著增加、KCC2表达降低，存在NKCC1/KCC2失衡）；步骤三：验证布美他尼能改善精神分裂症模型组大鼠认知损伤。
[0014]基于上述，所述步骤一包括以下操作步骤：步骤1：母体处理：模型组孕鼠在怀孕第9天一侧尾静脉注射10mg/kg的Poly I:C，对照组孕鼠在怀孕第9天一侧尾静脉注射等体积生理盐水处理；步骤2：母体检测：3小时后在模型组孕鼠、对照组孕鼠的另一侧尾静脉分别抽取约1ml血液，并添加EDTA抗凝，4℃、1000g、离心15min，取上层血清，ELISA检测二者血浆炎症因子IL
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1β、IL
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6、TNF
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α含量，当结果显示模型组孕鼠相对于对照组孕鼠的炎症因子IL
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1β、IL
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6、TNF
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α水平显著升高时（如图1A
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C所示），提示母体免疫激活模型制备成功；步骤3：将模型组孕鼠、对照组孕鼠的子代雄性大鼠正常饲养至成年期，即为精神分裂症模型组大鼠和对照组大鼠。
[0015]基于上述，所述步骤三包括以下操作步骤：步骤1：将精神分裂症模型组大鼠分为两组，给予其中一组连续7天腹腔注射布美他尼（15 mg/kg），以同样注射方式给予另外一组以及对照组大鼠安慰剂处理；
步骤2：用新物体识别实验评估三组大鼠的认知状态（如图3所示，新物体识别实验：第1天，让大鼠在检测装置中适应30分钟熟悉环境；第2天训练期，在装置中放置2个一样的物体，让大鼠探索10分钟，随后放回笼内，2小时之后进行测试，将装置内一个物体用新物体替代，再次让大鼠进行探索，记录大鼠接触新、旧物体的时间，分别记录为T2、T1，通过T2/（T1+T2）计算大鼠对新物体的偏爱，利用啮齿类动物喜新厌旧的特性，评估大鼠的记忆，反映认知状态。结果显示，相比于给予安慰剂处理的精神分裂症模型组大鼠，给予布美他尼处理的精神分裂症模型组大鼠增加了其对新物体的探究偏爱，提示认知改善）；步骤3：对三组大鼠进行脑电检测（脑电检测大鼠的认知功能：脑立体定位大鼠右侧海马区，在大鼠海马区放置16通道电极监测海马区场电以及Gamma波信号。结果显示，相比于给予安慰剂处理的精神分裂症模型组大鼠，给予布美他尼处理可改善精神分裂症模型组大鼠海马区场电信号以及Gamma波信号，提示认知改善）。
[0016]根据多次实验发现，精神分裂症模型组大鼠存在显著NKCC1/KCC2失衡，而NKCC1/KCC2系统调节药物布美他尼可显著改善精神分裂症模型组大鼠的认知损伤，且起效周期短、改善效果高效、稳定，证实了布美他尼在精神分裂症认知损伤中的治疗价值。
[0017]最后应当说明的是：以上实施例仅用以说明本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种验证布美他尼能改善精神分裂症认知损伤的实验方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一：制备精神分裂症模型组大鼠和对照组大鼠；步骤二：通过免疫印迹实验验证精神分裂症模型组大鼠存在NKCC1/KCC2表达失衡；步骤三：验证布美他尼能改善精神分裂症模型组大鼠认知损伤。2.根据权利要求1所述的验证布美他尼能改善精神分裂症认知损伤的实验方法，其特征在于所述步骤一包括以下操作步骤：步骤1：母体处理：模型组孕鼠在怀孕第9天一侧尾静脉注射10mg/kg的Poly I:C，对照组孕鼠在怀孕第9天一侧尾静脉注射等体积生理盐水处理；步骤2：母体检测：3小时后在模型组孕鼠、对照组孕鼠的另一侧尾静脉分别抽取约1ml血液，并添加EDTA抗凝，4℃、1000g、离心15min，取上层血清，ELISA检测二者血浆炎症因子IL
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1β、I...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏玺，李文强，杨勇锋，刘青，陈祎，康宁，柴瑞，吕路线，
申请(专利权)人：河南省精神病医院新乡医学院第二附属医院，
类型：发明
国别省市：