柯萨奇病毒A组6型Vero细胞适应株及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及柯萨奇病毒A组6型Vero细胞适应株及其应用。该适应株基因组由5

【技术实现步骤摘要】
柯萨奇病毒A组6型Vero细胞适应株及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及柯萨奇病毒A组6型Vero细胞适应株及其应用。

技术介绍

[0002]手足口病(Hand,foot and mouse disease,HFMD)是一种由肠道病毒引起的接触性传染疾病，致病原可通过接触患者的唾液、粪便、呼吸道分泌物或疱疹液而传播。手足口病多发生于5岁以下儿童，偶见于成人，其主要临床症状为低热、口腔粘膜内由溃疡，以及手、足、臀部等部位出现疱疹等。一般情况下，手足口病是自限性的，多数患儿在患病一周左右自愈，但少数患者可引起脑膜炎、脑炎、急性弛缓性瘫痪、心肌炎、肺水肿等严重的并发症，个别重症患儿病情发展快继而导致死亡。至今，手足口病仍是威胁全球公共健康的问题之一。
[0003]根据系统进化树同源性关系，目前将人类肠道病毒分为七个种群，分别为人肠道病毒A、B、C、D型，以及人鼻病毒A、B、C型，每个组内又可分为不同的血清型或基因型。柯萨奇病毒A6型(Coxsackievirus A6,CV
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A6)属于小核糖核酸病毒科肠道病毒属的A组病毒，其直径约为27～30nm，为单股正链RNA病毒。近年来，CV
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A6已成为引起手足口病的主要病原体。而上市的EV71疫苗对非EV71类型肠道病毒引起的HFMD无交叉保护效力。
[0004]CV
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A6衣壳由四种结构蛋白组成，含有与细胞受体结合的表位。结构蛋白区域氨基酸的变化可导致病毒表面蛋白构象的变化，由此影响病毒与细胞表面受体的结合。结构蛋白VP1、VP2、VP3含中和抗原表位。此外，非结构蛋白编码区编码的蛋白或5
’
端以及3
’
端非编码区中的核苷酸与病毒RNA复制、转录、翻译，以及病毒的组装与释放密切相关，非结构蛋白基因的变化可影响相关酶的活性、病毒RNA复制、病毒装配，继而影响病毒的细胞嗜性和生长特性。
[0005]CV
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A6可在人横纹肌瘤细胞(RD)中增殖并产生细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)，却难以在非洲绿猴肾细胞(Vero)、犬肾细胞(MDCK)、人胚肺成纤维细胞(MRC
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5)以及人胚肺二倍体细胞(2BS)等人用疫苗细胞基质中增殖并产生CPE，这使得针对CV
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A6的研究及全病毒灭活疫苗的研发难度增大。研究影响CV
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A6在Vero细胞中增殖的关键核苷酸位点和氨基酸位点，有利于研究CV
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A6感染细胞的机制，亦有利于研发针对CV
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A6的单价或含CV
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A6的手足口病多价全病毒灭活疫苗。

技术实现思路

[0006]基于此，本专利技术的目的之一在于提供一种柯萨奇病毒A组6型Vero细胞适应株，其基因组序列如SEQ ID NO:1所示。
[0007]本专利技术所提供的柯萨奇病毒A组6型Vero细胞适应株为湖北省襄阳市临床确诊为手足口病患者的肛拭子样品，经离心和抗生素过夜处理，然后以RD细胞为宿主分离及培养CV
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A6
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RD细胞分离株，之后以Vero细胞为宿主进行柯萨奇病毒CV
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A6型的适应性传代之后
获得的，并测序确定了其核苷酸和氨基酸序列。以此序列为模板在体外合成感染性cDNA，利用T7 RNA聚合酶进行体外转录生成病毒RNA，转染至Vero细胞中拯救病毒。并以此进一步验证了该适应株核苷酸和氨基酸序列与细胞嗜性的关系。
[0008]该适应株命名为人柯萨奇病毒CV
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A6
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712，拉丁文名称为：Coxsackievirus A6
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712，并于2022年8月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:V202264。
[0009]该适应株共编码11个蛋白，分别为结构蛋白VP4、VP2、VP3、VP1及非结构蛋白2A、2B、2C、3A、3B、3C、3D，及氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，编码的氨基酸序列对应分别为：
[0010]VP4蛋白为SEQ ID NO:24中的第1
‑
69位氨基酸序列；
[0011]VP2蛋白为SEQ ID NO:24中的第70
‑
325位氨基酸序列；
[0012]VP3蛋白为SEQ ID NO:24中的第326
‑
565位氨基酸序列；
[0013]VP1蛋白为SEQ ID NO:24中的第566
‑
870位氨基酸序列；
[0014]2A蛋白为SEQ ID NO:24中的第871
‑
1020位氨基酸序列；
[0015]2B蛋白为SEQ ID NO:24中的第1021
‑
1119位氨基酸序列；
[0016]2C蛋白为SEQ ID NO:24中的第1120
‑
1448位氨基酸序列；
[0017]3A蛋白为SEQ ID NO:24中的第1449
‑
1534位氨基酸序列；
[0018]3B蛋白为SEQ ID NO:24中的第1535
‑
1556位氨基酸序列；
[0019]3C蛋白为SEQ ID NO:24中的第1557
‑
1739位氨基酸序列；
[0020]3D蛋白为SEQ ID NO:24中的第1740
‑
2201位氨基酸序列。
[0021]本专利技术的目的之二在于提供一种生物材料，其为以下(1)～(5)中的任意一种：
[0022](1)序列如SEQ ID NO:1所示或如SEQ ID NO:1所示序列的完全互补序列所示的核酸分子；
[0023](2)含有(1)中所述核酸分子的表达框；
[0024](3)含有(1)中所述核酸分子的重组载体；
[0025](4)含有(1)中所述核酸分子的重组微生物；
[0026](5)含有(1)中所述核酸分子的细胞系。
[0027]本专利技术的目的之三在于提供上述柯萨奇病毒A组6型Vero细胞适应株的培养方法，为采用Vero细胞作为宿主进行培养。
[0028]本专利技术的目的之四在于提供上述柯萨奇病毒A组6型Vero细胞适应株在制备预防和/或治疗柯萨奇病毒引起疾病的疫苗中的应用。
[0029]本专利技术的目的之五在于提供上述生物材料在制备和/或预防柯萨奇病毒引起疾病的疫苗中的应用。
[0030]本专利技术的目的之六在于提供上述柯萨奇病毒A组6型Vero细胞适应株在CV
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A6文库构建中的应用。
[0031]本专利技术的目的之七在于提供一种产品，该产品包含上述的柯萨奇病毒A组6型Vero细胞适应株和/或上述的生物材料。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种柯萨奇病毒A组6型Vero细胞适应株，其特征在于，其基因组序列如SEQ ID NO:1所示。2.根据权利要求1所述的柯萨奇病毒A组6型Vero细胞适应株，其特征在于，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:V202264。3.根据权利要求1所述的柯萨奇病毒A组6型Vero细胞适应株，其特征在于，其编码的蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，各个蛋白氨基酸序列分别为：VP4蛋白为SEQ ID NO:24中的第1
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69位氨基酸序列；VP2蛋白为SEQ ID NO:24中的第70
‑
325位氨基酸序列；VP3蛋白为SEQ ID NO:24中的第326
‑
565位氨基酸序列；VP1蛋白为SEQ ID NO:24中的第566
‑
870位氨基酸序列；2A蛋白为SEQ ID NO:24中的第871
‑
1020位氨基酸序列；2B蛋白为SEQ ID NO:24中的第1021
‑
1119位氨基酸序列；2C蛋白为SEQ ID NO:24中的第1120
‑
1448位氨基酸序列；3A蛋白为SEQ ID NO:24中的第1449
‑
1534位氨基酸序列；3B蛋白为SEQ ID NO:24中的第1535
‑
1556位氨基酸序列；3C蛋白为SEQ ID NO:24中的第1557
‑
1739位氨基酸序列；3D蛋白为SEQ ID NO:24中的第1740
‑
2201位氨基酸序列。4.一...

【专利技术属性】
技术研发人员：申硕，周金戈，钱莎莎，麦建仪，王泽鋆，孟胜利，
申请(专利权)人：武汉生物制品研究所有限责任公司，
类型：发明
国别省市：