基于长寿花转录组测序信息开发的SSR引物组及其在单瓣种质鉴定中的应用制造技术

本发明专利技术适用于生物技术领域，提供了基于长寿花转录组测序信息开发的SSR引物组及其在单瓣种质鉴定中的应用，包括20对SSR引物组，其中1至20对引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1至SEQ IDNo.40所示，本发明专利技术通过对48个长寿花品种的DNA进行扩增，并利用6％非变性聚丙烯酰氨凝胶电进行检测，发现本发明专利技术的3组SSR引物的扩增产物带型明显，且在品种间具有很好的多态性，能够很好的快速区分单瓣种质，为长寿花种质资源的鉴定、保护以及遗传多样性分析提供参考。保护以及遗传多样性分析提供参考。

【技术实现步骤摘要】
ID No.6所示的反向引物序列组成；
[0011]第4对引物由核苷酸序列如SEQ ID No.7所示的正向引物序列和核苷酸序列如SEQ ID No.8所示的反向引物序列组成；
[0012]第5对引物由核苷酸序列如SEQ ID No.9所示的正向引物序列和核苷酸序列如SEQ ID No.10所示的反向引物序列组成；
[0013]第6对引物由核苷酸序列如SEQ ID No.11所示的正向引物序列和核苷酸序列如SEQ ID No.12所示的反向引物序列组成；
[0014]第7对引物由核苷酸序列如SEQ ID No.13所示的正向引物序列和核苷酸序列如SEQ ID No.14所示的反向引物序列组成；
[0015]第8对引物由核苷酸序列如SEQ ID No.15所示的正向引物序列和核苷酸序列如SEQ ID No.16所示的反向引物序列组成；
[0016]第9对引物由核苷酸序列如SEQ ID No.17所示的正向引物序列和核苷酸序列如SEQ ID No.18所示的反向引物序列组成；
[0017]第10对引物由核苷酸序列如SEQ ID No.19所示的正向引物序列和核苷酸序列如SEQ ID No.20所示的反向引物序列组成；
[0018]第11对引物由核苷酸序列如SEQ ID No.21所示的正向引物序列和核苷酸序列如SEQ ID No.22所示的反向引物序列组成
[0019]第12对引物由核苷酸序列如SEQ ID No.23所示的正向引物序列和核苷酸序列如SEQ ID No.24所示的反向引物序列组成
[0020]第13对引物由核苷酸序列如SEQ ID No.25所示的正向引物序列和核苷酸序列如SEQ ID No.26所示的反向引物序列组成
[0021]第14对引物由核苷酸序列如SEQ ID No.27所示的正向引物序列和核苷酸序列如SEQ ID No.28所示的反向引物序列组成
[0022]第15对引物由核苷酸序列如SEQ ID No.29所示的正向引物序列和核苷酸序列如SEQ ID No.30所示的反向引物序列组成
[0023]第16对引物由核苷酸序列如SEQ ID No.31所示的正向引物序列和核苷酸序列如SEQ ID No.32所示的反向引物序列组成
[0024]第17对引物由核苷酸序列如SEQ ID No.33所示的正向引物序列和核苷酸序列如SEQ ID No.34所示的反向引物序列组成
[0025]第18对引物由核苷酸序列如SEQ ID No.35所示的正向引物序列和核苷酸序列如SEQ ID No.36所示的反向引物序列组成
[0026]第19对引物由核苷酸序列如SEQ ID No.37所示的正向引物序列和核苷酸序列如SEQ ID No.38所示的反向引物序列组成
[0027]第20对引物由核苷酸序列如SEQ ID No.39所示的正向引物序列和核苷酸序列如SEQ ID No.40所示的反向引物序列组成
[0028]基于长寿花转录组测序信息开发的SSR引物组在单瓣种质鉴定中的应用。
[0029]优选的，所述SSR引物组进行单瓣种质鉴定的方法包括以下方法：
[0030](1)DNA提取：利用植物DNA提取试剂盒提取待测长寿花叶片基因组DNA；
[0031](2)SSR
‑
PCR扩增：以(1)提取的DNA为模板，采用如序列表SEQ ID No.1
‑
40所示物
进行SSR
‑
PCR扩增；
[0032](3)电泳检测：采用6％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，通过银染法对PCR产物进行检测，根据条带的有无和大小来判断结果；
[0033](4)数据记录统计：将(3)中的检测判断结果进行记录统计；
[0034](5)结果判定：将(4)中数据进行判定分析，从而进行长寿花单瓣种质鉴定分析。
[0035]优选的，所述(2)中SSR
‑
PCR采用20uL反应体系：DNA模板2.00μL，上下引物各1μL，2
×
PCR Mix混合液10μL，ddH2O 6μL。
[0036]优选的，所述(2)中PCR反应条件为94℃预变性5min，94℃变性40s，57℃退火45s，72℃延伸45s，30个循环，最后72℃延伸5min，12℃保存。
[0037]优选的，所述(3)中电泳检测具体步骤包括：
[0038](a)取30％丙烯酰胺溶液8.3mL，加入5
×
TBE 7mL、TEMED24.8μL、10％过硫酰胺380μL和ddH2O 16.3mL混合均匀，制胶；
[0039](b)在电泳槽中加1
×
TBE缓冲液，样品孔中加入1μL的PCR扩增产物，电泳条件为恒定电压120V，电泳时间2h；
[0040](c)银染：将凝胶浸在固定液(10％乙醇、0.5％冰醋酸)15min，0.2％硝酸银溶液银染10min，超纯水快速漂洗两次，显影液显色10min，直至条带清晰，超纯水再次水洗两次；
[0041](d)SSR谱带分析：在相同迁移率位置上进行“1、0”标注，扩增出条带的记为1，未扩增出条带的记为0，构建出SSR引物对供试样品的SSR分析谱带数据；品种间差异位点数≥1，即判定为不同品种。
[0042]本公开的有益效果为：本专利技术通过对48个长寿花品种的DNA进行扩增，并利用6％非变性聚丙烯酰氨凝胶电泳进行检测，发现本专利技术的3组SSR引物的扩增产物带型明显，且在品种间具有很好的多态性，能够很好的区分不同的品种，这样能够对长寿花种质资源的鉴定、保护以及遗传多样性分析提供参考。
附图说明
[0043]图1为基于长寿花转录组测序信息开发的SSR引物组的引物5的电泳图；
[0044]图2为基于长寿花转录组测序信息开发的SSR引物组的引物9的电泳图；
[0045]图3为基于长寿花转录组测序信息开发的SSR引物组的引物15的电泳图；
[0046]图4为基于长寿花转录组测序信息开发的SSR引物组的引物的区分图。
具体实施方式
[0047]下面将结合附图对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0048]通常在此处附图中描述和显示出的本专利技术实施例的组件可以以各种不同的配置来布置和设计。因此，以下对在附图中提供的本专利技术的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本专利技术的范围，而是仅仅表示本专利技术的选定实施例。
[0049]基于长寿花转录组测序信息开发的SSR引物组，包括20对SSR引物组，其中：
[0050]第1对引物由核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的正向引物序列和核苷酸序列如SEQ ID No.2所示的反向引物序列组成；
[0051]第2对引物由核苷酸序列如SEQ ID No.3所示的正向引物序列和核苷酸序列如本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
ID No.38所示的反向引物序列组成第20对引物由核苷酸序列如SEQ ID No.39所示的正向引物序列和核苷酸序列如SEQ ID No.40所示的反向引物序列组成。2.权利要求1所述的基于长寿花转录组测序信息开发的SSR引物组在单瓣种质鉴定中的应用。3.如权利要求2所述的基于长寿花转录组测序信息开发的SSR引物组在单瓣种质鉴定中的应用，其特征在于：所述SSR引物组进行单瓣种质鉴定的方法包括以下方法：(1)DNA提取：利用植物基因组DNA提取试剂盒提取待测长寿花叶片基因组DNA；(2)SSR
‑
PCR扩增：以(1)提取的DNA为模板，采用如序列表SEQ ID No.1
‑
40所示引物进行SSR
‑
PCR扩增；(3)电泳检测：采用6％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，通过银染法对PCR产物进行检测，根据条带的有无和大小来判断结果；(4)数据记录统计：将(3)中的检测判断结果进行记录统计；(5)结果判定：将(4)中数据进行判定分析，从而进行长寿花单瓣种质鉴定分析。4.如权利要求3所述的基于长寿花转录组测序信息开发的SSR引物组在单瓣种质鉴定中的应用，其特征在于：所述(2)中SSR
‑
PCR采用20μL应体系：DNA模板2.00μL，上下引物各1μL，2

【专利技术属性】
技术研发人员：裴徐梨，焦鹏，荆赞革，冯鹏宇，刘院梅，
申请(专利权)人：昆明学院，
类型：发明
国别省市：