Taq酶突变体及其在SNP相关研究上的应用制造技术

本发明专利技术属于生物化学领域，具体涉及Taq酶突变体及其在SNP相关研究上的应用。具体技术方案为：一种Taq酶突变体，所述Taq酶突变体由野生型C

【技术实现步骤摘要】
Taq酶突变体及其在SNP相关研究上的应用


[0001]本专利技术属于生物化学领域，具体涉及Taq酶突变体及其在SNP相关研究上的应用。

技术介绍

[0002]单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphisms，SNP）主要指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。这种变异主要由单个碱基的转换、颠换、插入和缺失等导致。这是人类可遗传的变异中最常见的一种，占所有已知多态性的90%以上。SNP具有密度高、更高的遗传稳定性，在人群中主要以二态形式存在，具有易于分型等特点；其作为第三代分子标记物被广泛用于分子遗传学、法医物证检验、疾病诊断和指导个性化用药等众多领域。研究发现：某些SNP位点的多态性与个体对药物的敏感性存在关联，通过对相应位点进行SNP分型检测可以指导患者根据自身不同基因型进行个性化用药。
[0003]目前常用的SNP检测的方法有测序、PCR荧光探针法、ARMS
‑
PCR、高分辨率溶解曲线等。PCR荧光探针法因其操作简单、快速、结果易于判读等特点应用最为广泛。PCR荧光探针法需要设计两条在SNP位点分别与野生型和突变型互补配对的探针进行基因分型检测。因长度比较长，普通TaqMan探针容易出现单碱基错配，从而探针也能与模板结合，进而导致扩增结果有非特异，影响结果判读。MGB修饰能与小沟结合而提高探针Tm值从而缩短探针长度，提高特异性，在SNP分型上得到广泛应用。但MGB探针的成本更高，且同样需要频繁调整，才能筛选到错配探针起峰低、不影响分型判读的探针。
[0004]因此，亟需开发一款普适强、区分度较大、适用于SNP分型的产品以降低研发成本。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种通用性SNP扩增酶及其应用。
[0006]为实现上述专利技术目的，本专利技术所采用的技术方案是：一种Taq酶突变体，所述Taq酶突变体由野生型C
‑
Taq酶突变而来，野生型C
‑
Taq酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，在野生型C
‑
Taq酶基础上至少进行如下突变：将所述野生型C
‑
Taq酶的506号位点的苏氨酸突变为赖氨酸。
[0007]相应的，一种Taq酶突变体，所述Taq酶突变体由野生型C
‑
Taq酶突变而来，野生型C
‑
Taq酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，在野生型C
‑
Taq酶基础上至少进行如下突变：将所述野生型C
‑
Taq酶的506号位点的苏氨酸突变为赖氨酸，将所述野生型C
‑
Taq酶的510号位点的甘氨酸突变为精氨酸。
[0008]相应的，所述Taq酶突变体在SNP研究中的非疾病诊断、治疗上的应用。
[0009]优选的，在区分单碱基错配中的应用。
[0010]优选的，在筛选MGB探针中的应用。
[0011]本专利技术具有以下有益效果：本专利技术通过对野生型C
‑
Taq酶的关键活性位点进行的分析并进行定点突变，并使用高低GC目的片段的多对SNP分型引物探针对候选突变酶进行测试，筛选到两个对单碱基错配有更好区分能力的酶。本专利技术提供的突变体酶的单碱基错
配探针起峰更低，分型准确度更高。本专利技术提供的突变体酶对中高低GC位点都能很好扩增，普适应广；使用这些突变体酶可以有效节省筛选MGB探针的成本。
附图说明
[0012]图1为各Taq酶及突变体使用通用性SNP分型buffer扩增APOE
‑
526位点的qPCR检测结果示意图；图2为C1
‑
Taq酶扩增CYP2C19野生型模板结果示意图；图3为C1
‑
Taq酶扩增CYP2C19突变型型模板结果示意图；图4为C1
‑
Taq酶扩增AGTR1野生型模板结果示意图；图5为C1
‑
Taq酶扩增AGTR1突变型型模板结果示意图；图6为C1
‑
Taq酶扩增UGT1A1野生型模板结果示意图；图7为C1
‑
Taq酶扩增UGT1A1突变型型模板结果示意图；图8为C1
‑
Taq酶扩增MTHFR野生型模板结果示意图；图9为C1
‑
Taq酶扩增MTHFR突变型型模板结果示意图；图10为C1
‑
Taq酶扩增CYP2D6野生型模板结果示意图；图11为C1
‑
Taq酶扩增CYP2D6突变型型模板结果示意图；图12为C1
‑
Taq酶扩增APOE野生型模板结果示意图；图13为C1
‑
Taq酶扩增APOE突变型型模板结果示意图。
具体实施方式
[0013]本专利技术提供了一种Taq酶突变体：C
‑
Taq酶突变体。所述C
‑
Taq酶突变体由野生型C
‑
Taq酶突变而来，野生型C
‑
Taq酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。所述C
‑
Taq酶突变体的突变位点包括：将所述野生型C
‑
Taq酶的506号位点的苏氨酸（T）突变为赖氨酸（K）；优选的方案为：突变位点还包括：将所述野生型C
‑
Taq酶的510号位点的甘氨酸（G）突变为精氨酸（R）。将同时发生T506K、G510R突变的C
‑
Taq酶突变体命名为C1
‑
Taq酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，将只发生T506K突变的C
‑
Taq酶突变体命名为C2
‑
Taq酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。同时设置对照组：C3
‑
Taq酶（只发生T506R突变，其氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示）、C4
‑
Taq酶（只发生G510K突变，其氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示）、C5
‑
Taq酶（只发生G510R突变，其氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示）。
[0014]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。所获得的数据均为进行至少3次重复后获得的平均值，且各重复获得的均为有效数据。
[0015]实施例：Taq酶突变体效果展示1、本实施例选择在SNP研究和检测方向较为常见的数个SNP位点，GC含量（在DNA四种碱基中，鸟嘌呤和胞嘧啶所占的比率）为30%～75%，并针对这些位点设计引物及MGB探针，具体如表1所示，其中P1全部为野生型探针，P2为突变型探针。
[0016]表1 各SNP位点信息对照表
再进一步合成对应的质粒序列，具体如表本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种Taq酶突变体，其特征在于：所述Taq酶突变体由野生型C
‑
Taq酶突变而来，野生型C
‑
Taq酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，在野生型C
‑
Taq酶基础上至少进行如下突变：将所述野生型C
‑
Taq酶的506号位点的苏氨酸突变为赖氨酸。2.一种Taq酶突变体，其特征在于：所述Taq酶突变体由野生型C
‑
Taq酶突变而来，野生型C
‑
Taq...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋东亮，黄淑云，柴常升，顾玲，卢瑶，孙晓亮，李俊辉，
申请(专利权)人：翌圣生物科技上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：