一种蛋白或酶的封装方法技术

本发明专利技术公开了一种蛋白或酶的封装方法，包括以下步骤：1）在容器中加入待封装的蛋白或酶，而后加入蜡质材料，将容器加热至70

【技术实现步骤摘要】
一种蛋白或酶的封装方法


[0001]本专利技术涉及生物制药及医学领域，尤其涉及一种蛋白或酶的封装方法。

技术介绍

[0002]DNA聚合酶进行PCR反应时，由低温(20℃～37℃)升至高温(94℃～95℃)的过程中，仍然具有残留的酶活性，低水平的非特异性退火和延伸在反应开始和热循环期间发生，这反过来又导致了随后的PCR循环中的非特异性扩增产物的形成，最终通过降低所需扩增信号或信号被高背景值掩盖而使反应的灵敏度和产量降低。热启动PCR是在起始变性阶段后开始PCR酶促反应，通过热启动降低引物二聚体的形成、引物错配和非特异性扩增，从而增加PCR的特异性和敏感性，提高PCR产量。自从热启动作为在较低温度下阻断DNA聚合酶延伸的一种手段以来，针对反应的基本成分如Mg2+、DNA聚合酶、引物和dNTP，也开发了许多方法。现在有几种技术，比如化学修饰，配体修饰，抗体结合法等。但是化学修饰会大大降低酶的活性，同时酶激活时间较长，导致PCR产物的产量降低；配体修饰稳定性不足，特异性不够强；抗体结合法中制备抗体周期长、成本高；而且在给定的温度下，抗体不一定能全部变性掉，会在反应体系中引入其他反应。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种蛋白或酶的封装方法。
[0004]为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：一种蛋白或酶的封装方法，包括以下步骤：1）在容器中加入待封装的蛋白或酶，而后加入蜡质材料，将容器加热至70
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80℃，待蜡质材料融化后，搅拌均匀，其中蜡质材料与蛋白或酶的投加质量比在5
‑
50：1之间；2）称取惰性调节剂加入步骤1）中的容器中继续搅拌至均匀，惰性调节剂与蛋白或酶的投加质量比在5
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50：1之间；3）另取烧瓶加入乳化剂，并加入分散剂，置于恒温油浴锅中，升温至70
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80℃，并进行搅拌；4）将步骤2中的物料加入到步骤3）中的烧瓶内，搅拌混匀10
‑
30min；5）关闭加热，冷却至室温，收集样品，并过筛。
[0005]作为一种具体的实施方式，所述蜡质材料选自石蜡、蜂蜡、棕榈蜡、米糠蜡中的一种或多种的混合。
[0006]作为一种具体的实施方式，步骤3）中，在恒温油浴锅中的搅拌速度在150
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500rpm/min之间。
[0007]作为一种具体的实施方式，步骤4）中的搅拌速度在200
‑
2000rpm/min之间。
[0008]作为一种具体的实施方式，步骤3）中所采用的乳化剂选自十二烷基磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠、聚乙二醇辛基苯基醚、山梨醇酐油酸酯中的一种或多种的混合。
[0009]作为一种具体的实施方式，步骤3）中所采用的分散剂选自水、乙醇、乙二醇中的一
种或多种的混合。
[0010]作为一种具体的实施方式，步骤2）中所采用的惰性调节剂选自氧化硅粉末、氧化锡粉末或氧化钛粉末中的一种或多种的混合。采用惰性调节剂的目的是为了调整最终产物的密度。
[0011]作为一种具体的实施方式，步骤5）过筛的颗粒粒径在10
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1000μm之间。更为优选地，步骤5）过筛的颗粒粒径在15
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100μm之间。
[0012]本专利技术的有益效果：本专利技术的封装方法，过程简单，无需对其化学修饰，也不需要先进行低温阻断NDA聚合酶的眼神，在本封装方法下可以彻底阻止taq酶在低温下参与体系反应，并在一定的温度下将酶释放于体系中参与反应。在不引入新的蛋白的情况下，确保了酶的活性。
附图说明
[0013]图1是实施例1所得的石蜡微球溶液在400倍光学显微镜下的图像；图2是实施例2所得的蜂蜡微球溶液在400倍光学显微镜下的图像；图3是实施例3所得的棕榈蜡微球溶液在400倍光学显微镜下的图像。
实施方式
[0014]下面结合附图并通过具体实施例来进一步说明本专利技术的技术方案。
实施例1
[0015]本例中提供一种taq酶的封装方法，包括以下步骤：1、取一个烧杯，加入taq酶20mg，加入0.1g石蜡，将容器加热至70℃，待石蜡完全融化后，搅拌均匀；2、称取0.1g氧化硅粉末，加入上述石蜡中，继续搅拌至均匀；3、另取100mL三口烧瓶，加入0.6g十二烷基磺酸钠，再加入乙醇50mL，放入恒温油浴锅中，并安装好机械搅拌装置，搅拌速度为300rpm/min，升温至70℃；4、将步骤2中的烧杯中迅速加入步骤3的烧瓶中，搅拌，转速升高至1000rpm/min，计时15min；5、关闭加热，冷却至室温。收集烧瓶内样品，用标准筛网湿态筛选粒径子在10
‑
100μm的颗粒，即最终制备得到石蜡微球溶液，用移液枪取一滴石蜡微球溶液，置于400倍的光学显微镜下，其图像见附图1。
[0016]这里将粒径设置为不超100μm，是为了防止大颗粒溶液堵塞移液枪。
[0017]这里采用惰性调节剂的目的是为了在石蜡微球使用过程中，防止其浮于液体表面而出现不能与液体混合均匀的情况。
实施例2
[0018]本例中提供一种taq酶的封装方法，包括以下步骤：1、取一个烧杯，加入taq酶20mg，加入0.5g蜂蜡，将容器加热至75℃，待蜂蜡完全融化后，搅拌均匀；
2、称取0.3g氧化锡粉末，加入上述蜂蜡中，继续搅拌至均匀；3、另取100mL三口烧瓶，加入0.8g十二烷基苯磺酸钠，再加入乙醇70mL，放入恒温油浴锅中，并安装好机械搅拌装置，搅拌速度为500rpm/min，升温至75℃；4、将步骤2中的烧杯中迅速加入步骤3的烧瓶中，搅拌，转速升高至500rpm/min，计时30min；5、关闭加热，冷却至室温。收集烧瓶内样品，用标准筛网湿态筛选粒径子在15
‑
100μm的颗粒，即最终制备得到蜂蜡微球溶液，用移液枪取一滴蜂蜡微球溶液，置于400倍的光学显微镜下，其图像见附图2。
实施例3
[0019]本例中提供一种taq酶的封装方法，包括以下步骤：1、取一个烧杯，加入taq酶20mg，加入1g棕榈蜡，将容器加热至80℃，待棕榈蜡完全融化后，搅拌均匀；2、称取1g氧化钛粉末，加入上述棕榈蜡中，继续搅拌至均匀；3、另取100mL三口烧瓶，加入0.6g triton 100，再加入乙醇50mL，放入恒温油浴锅中，并安装好机械搅拌装置，搅拌速度为150rpm/min，升温至80℃；4、将步骤2中的烧杯中迅速加入步骤3的烧瓶中，搅拌，转速升高至2000rpm/min，计时10min；5、关闭加热，冷却至室温。收集烧瓶内样品，用标准筛网湿态筛选粒径子在15
‑
100μm的颗粒，即最终制备得到棕榈蜡微球溶液，用移液枪取一滴棕榈蜡微球溶液，置于400倍的光学显微镜下，其图像见附图3。
[0020]采用本专利技术的封装方法，可以彻底阻止taq酶在低温下参与体系反应，并在一定的温度下将酶释放于体系中参与反应。在不引入新的蛋白的情况下，确保了酶的活性。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蛋白或酶的封装方法，其特征在于，包括以下步骤：1）在容器中加入待封装的蛋白或酶，而后加入蜡质材料，将容器加热至70
‑
80℃，待蜡质材料融化后，搅拌均匀，其中蜡质材料与蛋白或酶的投加质量比在5
‑
50：1之间；2）称取惰性调节剂加入步骤1）中的容器中继续搅拌至均匀，惰性调节剂与蛋白或酶的投加质量比在5
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50：1之间；3）另取烧瓶加入乳化剂，并加入分散剂，置于恒温油浴锅中，升温至70
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80℃，并进行搅拌；4）将步骤2中的物料加入到步骤3）中的烧瓶内，搅拌混匀10
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30min；5）关闭加热，冷却至室温，收集样品，并过筛。2.根据权利要求1所述的一种蛋白或酶的封装方法，其特征在于，所述蜡质材料选自石蜡、蜂蜡、棕榈蜡、米糠蜡中的一种或多种的混合。3.根据权利要求1所述的一种蛋白或酶的封装方法，其特征在于，步骤3）中，在恒温油浴锅中的搅拌速度在150
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【专利技术属性】
技术研发人员：田飞，袁新旺，刘晓雷，
申请(专利权)人：苏州英泽生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：