一种顺序式模拟移动色谱纯化药用层孔菌多糖的方法技术

本发明专利技术公开了一种顺序式模拟移动色谱纯化药用层孔菌多糖的方法，涉及生物提取技术领域。该方法包括以下步骤：(1)对药用层孔菌进行浸提，得到多糖提取液；(2)利用顺序式模拟移动色谱对所述多糖提取液进行纯化，得到纯化液；(3)所述纯化液经精制除杂处理后，浓缩，干燥，即得所述药用层孔菌多糖。本发明专利技术提供的纯化药用层孔菌多糖的方法，工艺运行成本低，层孔菌多糖的杂质去除率和收率都显著提高，除杂率达到为80

【技术实现步骤摘要】
一种顺序式模拟移动色谱纯化药用层孔菌多糖的方法


[0001]本专利技术涉及生物提取
，特别是涉及一种顺序式模拟移动色谱纯化药用层孔菌多糖的方法。

技术介绍

[0002]药用层孔菌是一类具有药用功能的木层孔菌属真菌，主要包括松针层孔菌、木蹄层孔菌、红缘层孔菌、红肉拟层孔菌、苦白蹄等，经研究发现该类真菌多糖具有显著的抗癌作用，可用于治疗食道癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、肺癌、乳腺癌、子宫癌等，具有改善患者的症状如增加食欲和体重、减轻疼痛等功效。目前，对于药用层孔菌多糖的研究还较少，中国专利CN200810152030.9公布了一种松木层孔菌多糖提取物在制备防治肿瘤转移药物中的应用，其制备的松木层孔菌多糖未经除杂，纯度较低，但显示出了明显的激活多形核白细胞，提高其杀伤肿瘤细胞的能力从而发挥抑制肿瘤转移及术后复发的作用；中国专利CN202110340598.9公布了木蹄层孔菌胞外多糖的应用，木蹄层孔菌胞外多糖可用于制备皮肤创面愈合剂，特别是可用于制备皮肤烫伤愈合剂；中国专利CN201210037925.4公布了药用真菌瓦尼木层孔菌多糖的提取纯化方法，该方法采用的溶剂提取法，方法操作复杂产品纯度较低。通过查阅文献，可见还未对药用层孔菌多糖进行大规模研究与生产，随着研究的深入，药用层孔菌多糖的研究必将取得显著的发展，需求及产量将大幅增加，市场前景广阔。
[0003]目前，多糖的去除小分子的方法主要采用膜分离法，膜分离法存在着设备投入大，容易出现膜污染，需要经常杀菌和清洗，难以在工业上推广应用。多糖脱色的方法多采用H2O2的方法，其效率低下，溶剂消耗多，污染大，不适于工业化生产。随着市场竞争的日益激烈，现有层孔菌多糖除杂的技术已不能满足现有的技术需求，目前急需高效的工业化多糖除杂技术。
[0004]顺序式模拟移动床色谱(SSMB)是目前国际上先进的模拟移动床色谱分离技术，较SMB技术有占地面积小，进料浓度高、进料量大、洗脱剂用量少、产品纯度及收率高、出口浓度高等优势，在国外相关领域应用广泛，目前，未见SSMB层孔菌多糖除杂技术研究的报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种顺序式模拟移动色谱纯化药用层孔菌多糖的方法，以解决上述现有技术存在的问题，本专利技术的方法使得药用层孔菌多糖的杂质去除率和收率都得到提高，从而能够显著提高产品质量。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0007]本专利技术提供一种顺序式模拟移动色谱纯化药用层孔菌多糖的方法，包括以下步骤：
[0008](1)对药用层孔菌进行浸提，得到多糖提取液；
[0009](2)利用顺序式模拟移动色谱对所述多糖提取液进行纯化，得到纯化液；
[0010](3)所述纯化液经精制除杂处理后，浓缩，干燥，即得所述药用层孔菌多糖；
[0011]在步骤(2)中，所述顺序式模拟移动色谱由6根色谱柱组成，编号柱1
‑
6；柱1具有1个进料口、1个进洗脱剂口、1个出料口和1个杂质组分出口，柱2、柱3和柱6分别具有1个进料口和1个出料口，柱4具有1个进料口、1个进多糖原料口和1个出料口，柱5具有1个进料口、1个出料口和1个多糖组分出口；柱1的出料口连接柱2的进料口，柱2的出料口连接柱3的进料口，柱3的出料口连接柱4的进料口，柱4的出料口连接柱5的进料口，柱5的出料口连接柱6的进料口，最终柱6的出料口连接柱1的进料口，形成闭环。
[0012]进一步地，在步骤(1)中，所述药用层孔菌为松针层孔菌、木蹄层孔菌、红缘层孔菌、红肉拟层孔菌和苦白蹄中的一种或几种。
[0013]进一步地，在步骤(2)中，所述多糖提取液的浓度为10
‑
20wt％。
[0014]进一步地，在步骤(2)中，所述纯化的步骤包括：
[0015]a)打开所述柱1的杂质组分出口和所述柱5的多糖组分出口，从所述柱1的进洗脱剂口进洗脱剂，所述柱1的杂质组分出口出杂质组分；在所述柱1进洗脱剂的同时，从所述柱4的进多糖原料口进所述多糖提取液，所述柱5的多糖组分出口出第一部分多糖组分；
[0016]b)关闭所述柱1的进洗脱剂口、所述柱1的杂质组分出口、所述柱4的进多糖原料口和所述柱5的多糖组分出口，物料不进不出，进行大循环，液流方向为由所述柱1至所述柱6流动；
[0017]c)打开所述柱1的进洗脱剂口和所述柱5的多糖组分出口，从所述柱1的进洗脱剂口进洗脱剂，所述柱5的多糖组分出口出第二部分多糖组分。
[0018]进一步地，在步骤a)中，所述洗脱剂的用量为单柱色谱柱体积的10
‑
30％；所述多糖提取液的进料量为单柱色谱柱体积的5
‑
10％；在步骤b)中，所述大循环的循环量为单柱色谱柱体积的20
‑
40％；在步骤c)中，所述洗脱剂的用量为单柱色谱柱体积的5
‑
20％。
[0019]进一步地，在步骤(2)中，所述色谱柱的固定相为强酸性氢离子树脂。
[0020]进一步地，在步骤(2)中，所述纯化的工作温度为50
‑
70℃。
[0021]进一步地，在步骤(3)中，所述精制除杂处理采用柱层析脱色的方法，所述柱层析脱色的大孔树脂为AB
‑
8、X
‑
5或ADS
‑
4。
[0022]本专利技术还提供一种根据上述的方法制备得到的药用层孔菌多糖。
[0023]本专利技术还提供上述的药用层孔菌多糖在制备促进巨噬细胞产NO的产品中的应用。
[0024]本专利技术公开了以下技术效果：
[0025]本专利技术提供的纯化药用层孔菌多糖的方法，工艺运行成本低，层孔菌多糖的杂质去除率和收率都显著提高，除杂率达到为80
‑
90％，收率达到80
‑
90％，脱色率达到60％
‑
80％。本专利技术的方法，无污染，后续成本低，简化操作步骤，设备简单，降低设备投入，增加树脂利用率，能够连续化生产，提升生产效率。
附图说明
[0026]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0027]图1为本专利技术顺序式模拟移动色谱纯化工艺的流程图。
具体实施方式
[0028]现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
[0029]应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种顺序式模拟移动色谱纯化药用层孔菌多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)对药用层孔菌进行浸提，得到多糖提取液；(2)利用顺序式模拟移动色谱对所述多糖提取液进行纯化，得到纯化液；(3)所述纯化液经精制除杂处理后，浓缩，干燥，即得所述药用层孔菌多糖；在步骤(2)中，所述顺序式模拟移动色谱由6根色谱柱组成，编号柱1
‑
6；柱1具有1个进料口、1个进洗脱剂口、1个出料口和1个杂质组分出口，柱2、柱3和柱6分别具有1个进料口和1个出料口，柱4具有1个进料口、1个进多糖原料口和1个出料口，柱5具有1个进料口、1个出料口和1个多糖组分出口；柱1的出料口连接柱2的进料口，柱2的出料口连接柱3的进料口，柱3的出料口连接柱4的进料口，柱4的出料口连接柱5的进料口，柱5的出料口连接柱6的进料口，最终柱6的出料口连接柱1的进料口，形成闭环。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述药用层孔菌为松针层孔菌、木蹄层孔菌、红缘层孔菌、红肉拟层孔菌和苦白蹄中的一种或几种。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述多糖提取液的浓度为10
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20wt％。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述纯化的步骤包括：a)开启所述柱1的杂质组分出口和所述柱5的多糖组分出口，从所述柱1的进洗脱剂口进洗脱剂，所述柱1的杂质组分出口出杂质组分；在所述柱1进洗脱剂的同时，从所述柱4的进多糖原料口进所述多糖提取液，所述柱5的多糖组分出口出第一部分...

【专利技术属性】
技术研发人员：李良玉，何天枫，曹荣安，鹿保鑫，李朝阳，王元开，林欣梅，包荣鹏，
申请(专利权)人：黑龙江八一农垦大学牡丹江食品与生物技术创新研究院，
类型：发明
国别省市：