一种人唾液补体因子抗菌肽CFH3及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种人唾液补体因子抗菌肽CFH3，其氨基酸序列为RPYFPVAVGK，抗菌肽CFH3的分子量为1133Da。实验证明，本发明专利技术抗菌肽CFH3对溶血葡萄球菌能够产生了较强的抑制作用，可以在制备治疗或预防由溶血葡萄球菌引起的疾病的药物，为代替抗生素的药物、奶牛饲料添加剂开发奠定了基础。添加剂开发奠定了基础。添加剂开发奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】
一种人唾液补体因子抗菌肽CFH3及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种人唾液补体因子抗菌肽CFH3及其应用。

技术介绍

[0002]近年随着广谱抗菌药物的广泛使用，溶血葡萄球菌耐药性日益严重。溶血葡萄球菌是一种革兰氏阳性菌，属于人类皮肤黏膜的正常菌群之一，在机体菌群紊乱的情况下，可引起血液、泌尿生殖道和创伤等部位化脓性感染，该菌也可导致部分老年患者感染肺炎，以及新生儿败血症。溶血葡萄球菌能产生黏质，继而形成生物膜能遮蔽细菌的抗原性，有利于细菌定植致病对菌体具有保护和对抗药物作用，因此，是气管插管、留置鼻饲管医院感染的危险因素。此外，溶血葡萄球菌作为引起奶牛乳腺炎的病因之一，影响奶牛业发展，给乳品生产带来巨大损失。
[0003]目前对该菌引起的疾病控制方法以化学药物为主，但滥用化学药物容易引起微生物抗药性，且化学药物对环境也存在危害或潜在危害。因此，寻找化学药物替代品也成为目前研究的一大热点。抗菌肽(AMPs)是一类广泛存在于自然界生物体中的小肽类物质，它是机体先天性免系统的重要组成部分。它具有水溶性好、对高等动物毒性低、无耐药性等特点，被认为是抗生素的潜在替代品，在医药行业和食品添加剂等领域有良好的应用前景。
[0004]因此，提供一种能有效抑制溶血葡萄球菌感染，同时能保持良好稳定性的抗菌肽是本领域亟待解决的技术问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种人唾液补体因子抗菌肽CFH3及其应用，通过唾液补体因子抗菌肽CFH3对溶血葡萄球菌抑菌活性的研究，降低溶血葡萄球菌对抗菌药物的耐药性，减少抗生素的使用。
[0006]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案之一是：提供一种人唾液补体因子抗菌肽CFH3。其氨基酸序列为RPYFPVAVGK，如SEQIDNO：1所示。
[0007]我们首先通过对人口腔唾液进行质谱鉴定，并得到和鉴定出779个肽序列，然后利用Swiss
‑
model服务器对肽结构进行预测，发现了对溶血性葡萄球菌具有很强抗菌作用的抗菌肽序列RPYFPVAVGK，命名为CFH3。
[0008]抗菌肽CFH3的分子量为1133Da，所带电荷为+2，总疏水性比为40％。
[0009]抗菌肽CFH3可以从以下方面对细菌造成破坏：一方面，抗菌肽CFH3具有的正电荷可与细菌细胞膜发生作用，吸附在细菌细胞膜表面，破坏细胞膜导致细菌死亡；另一方面，破坏细胞膜的同时改变细菌细胞膜的通透性，并抑制细胞膜生成，导致细菌死亡；再一方面，与细菌基因组DNA相结合，抑制细菌DNA的合成，从而导致细菌死亡。
[0010]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案之二是：提供一种人唾液补体因子抗菌肽CFH3在制备抗菌药物中的应用，该抗菌药物用于抑制和/或杀灭溶血葡萄球菌。
[0011]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案之三是：提供一种抗菌药物，其有效成
分包括人唾液补体因子抗菌肽CFH3，所述抗菌肽CFH3的氨基酸序列为SEQ ID NO：1。
[0012]在本专利技术一较佳实施例中，所述抗菌药物的有效成分为人唾液补体因子抗菌肽CFH3，所述抗菌肽CFH3的氨基酸序列为SEQ ID NO：1。
[0013]在本专利技术一较佳实施例中，所述抗菌药物用于抑制和/或杀灭溶血葡萄球菌。
[0014]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案之四是：提供一种饲料添加剂，其有效成分包括人唾液补体因子抗菌肽CFH3，所述抗菌肽CFH3的氨基酸序列为SEQ ID NO：1。
[0015]在本专利技术一较佳实施例中，所述饲料添加剂的有效成分为人唾液补体因子抗菌肽CFH3，所述抗菌肽CFH3的氨基酸序列为SEQ ID NO：1。
[0016]在本专利技术一较佳实施例中，所述饲料添加剂用于抑制和/或杀灭溶血葡萄球菌。
[0017]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案之五是：提供一种编码人唾液补体因子抗菌肽CFH3的编码基因。
[0018]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案之六是：提供含有人唾液补体因子抗菌肽CFH3编码基因的表达盒、重组菌、重组载体或转基因细胞系。
[0019]本专利技术的抗菌肽可以采用本领域技术人员已知的方法合成，例如固相合成，并采用本领域技术人员已知的方法进行纯化，例如高效液相色谱法。
[0020]实施本专利技术，具有如下有益效果：本专利技术以人唾液为研究对象，通过质谱鉴定并筛选，发现一个全新氨基酸序列的多肽CFH3。研究CFH3对溶血葡萄球菌的抑菌活性；并用透射电镜观察CFH3对其破坏程度；最后对它的抑菌机制进行研究。实验结果表明，该肽对溶血葡萄球菌具有强烈的抑制作用。它的抑菌机理是首先吸附在细菌表面，穿透细胞膜的脂质双分子层，然后与细菌基因组DNA相结合，抑制细菌DNA的合成，从而导致细菌死亡。本专利技术为CFH3作为药物和饲料添加剂提供了实验依据。
附图说明
[0021]图1为抗菌肽CFH3的质谱分析图；图2为抗菌肽CFH3的预测模型结构视图；图3为抗菌肽CFH3对溶血葡萄球菌最低抑制浓度MIC测定对照图。其中：A：抗菌肽浓度0μg/mL；B：抗菌肽浓度125.0μg/mL；C：抗菌肽浓度62.5μg/mL；D：抗菌肽浓度31.3μg/mL；E：抗菌肽浓度15.6μg/mL；F：抗菌肽浓度7.8μg/mL；图4为本专利技术抗菌肽CFH3对溶血葡萄球菌时间
‑
杀伤曲线Time kill图。在0.01MpH7.2磷酸盐缓冲液中稀释至106‑7CFU/mL。抗菌肽浓度为7.8μg/mL；图5为本专利技术抗菌肽CFH3作用溶血葡萄球菌的透射电镜观察图，其中：A：溶血葡萄球菌空白对照组；B：CFH3处理2h后的溶血葡萄球菌；图6为本专利技术抗菌肽CFH3与溶血葡萄球菌DNA结合电泳图，其中：
条带7：空白对照；条带1
‑
6：分别是CFH3与DNA质量比为100/1，50/1，25/1，25/2，25/4，25/8；图7为本专利技术抗菌肽CFH3作用溶血葡萄球菌细胞内K
＋
泄漏图。菌液浓度为106‑7CFU/mL与质量浓度MIC的抗菌肽CFH3混合，测量上清液中K
＋
质量浓度的变化情况，每隔10min记录一次，共记录7次；图8为本专利技术抗菌肽CFH3与EB竞争性结合DNA的荧光光谱图。用多功能酶标仪测定样品在激发波长535nm及发射波长550~750nm范围内的荧光光谱；图9为抗菌肽作用于细菌细胞膜时二级结构变化的圆二色谱图。
具体实施方式
[0022]为了更好地理解本专利技术，下面结合实施例和附图对本专利技术做进一步的详细说明，但本领域技术人员了解，下述实施例不是对本专利技术保护范围的限制，任何在本专利技术基础上做出的改变和变化，都在本专利技术的保护范围之内。
[0023]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0024]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[002本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人唾液补体因子抗菌肽CFH3，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。2.如权利要求1所述的人唾液补体因子抗菌肽CFH3在制备抗菌药物中的应用,其特征在于：所述抗菌药物用于抑制和/或杀灭溶血葡萄球菌。3.一种抗菌药物，其特征在于：其有效成分包括人唾液补体因子抗菌肽CFH3，所述抗菌肽CFH3的氨基酸序列为SEQ ID NO：1。4.如权利要求3所述的抗菌药物，其特征在于：其有效成分为人唾液补体因子抗菌肽CFH3，所述抗菌肽CFH3的氨基酸序列为SEQ ID NO：1。5.如权利要求3或4任一项所述的一种抗菌药物，其特征在于：所述抗菌药物用于抑制...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨燊，范学楠，胡佳琦，裘德，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：