CRTAP致病突变体及在制备脆骨症制造技术

本发明专利技术涉及基因诊断技术领域，特别是涉及CRTAP致病突变体及在制备脆骨症

【技术实现步骤摘要】
CRTAP致病突变体及在制备脆骨症
Ⅶ
型诊断试剂盒中的应用


[0001]本专利技术涉及基因诊断
，特别是涉及CRTAP致病突变体及在制备脆骨症
Ⅶ
型诊断试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]脆骨症或成骨不全是一种以骨脆性增加为特征的遗传性骨病，又称脆骨病、瓷娃娃、骨膜发育不良；因其主表表现有脆骨、蓝巩膜、耳聋等，所以又称为脆骨
‑
蓝巩膜
‑
耳聋综合征。该病比较罕见，骨折为其主要临床表现，患儿易发骨折，轻微的碰撞也会造成严重的骨折；还包括一些结缔组织异常，如蓝巩膜、牙本质发育不良以及身材矮小等。
[0003]脆骨症的致病基因及其突变谱复杂多样，其中脆骨症
Ⅰ‑Ⅴ
型为常染色体显性遗传，
Ⅵ‑Ⅸ
型为常染色体隐性遗传。
Ⅰ‑Ⅳ
型的致病基因是COL1A1(MIM 120150)和COL1A2(MIM 120160)，
Ⅴ
型的致病基因是IFITM5(MIM 614757)，
Ⅵ
型的致病基因是SERPINF1(MIM 172860)，
Ⅶ
型的致病基因是CRTAP(MIM 605497)，
Ⅷ
型的致病基因是LEPRE1(MIM 610339),
Ⅸ
型的致病基因是PPIB(MIM 123841)。
[0004]其中CRTAP基因(MIM 605497)定位于染色体3p22.3，包括7个外显子和6个内含子，基因长33.6kb，编码401个氨基酸的软骨相关蛋白。CRTAP、LEPRE1和PPIB突变分别是导致VII、VIII和IX型脆骨症的原因，它们编码的蛋白在内质网上以1∶1∶1的比例形成胶原脯氨酰3
‑
羟化复合物，共同参与I型胶原翻译后修饰。该复合体不仅负责α1链的986位脯氨酸残基的3
‑
羟基化，而且还具有脯氨酰顺反异构酶的活性和分子伴侣作用，突变缺失会导致I型胶原螺旋折叠的延迟，影响骨的矿化和重塑，从而致病。
[0005]基因突变是导致疾病发生发展的重要遗传基础，基因诊断是确诊脆骨症
Ⅶ
型的金标准。临床上需要针对不同突变建立相应的检测技术并用于明确病因和疾病诊断。但目前并没有能特异性区分脆骨症
Ⅶ
型患者、携带者和正常人群的诊断试剂盒的报道。

技术实现思路

[0006]为了解决上述问题，本专利技术提供了CRTAP致病突变体及在制备脆骨症
Ⅶ
型诊断试剂盒中的应用。利用本专利技术提供的CRTAP致病突变体制备的诊断试剂盒，可以助力脆骨症
Ⅶ
型基因突变的筛查和诊断，可以特异性区分脆骨症
Ⅶ
型患者、携带者和正常人群。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0008]本专利技术提供了一种CRTAP致病突变体，所述CRTAP致病突变体包括c.24_25insGCGGCGCT和/或c.1125dupT；所述c.24_25insGCGGCGCT在登录号为NM_000088.4的1号外显子的第24位和第25位之间存在GCGGCGCT插入突变；所述c.1125dupT在登录号为NM_000088.4的6号外显子的第1125位存在T重复突变。
[0009]本专利技术还提供了上述CRTAP致病突变体作为检测靶点在制备脆骨症
Ⅶ
型诊断或辅助诊断试剂或试剂盒中的应用。
[0010]本专利技术还提供了上述CRTAP致病突变体作为治疗靶点在制备治疗脆骨症
Ⅶ
型药物
中的应用。
[0011]本专利技术还提供了扩增上述CRTAP致病突变体的引物，所述引物包括引物对1和/或引物对2；所述引物对1包括CRTAP
‑
1F和CRTAP
‑
1R，所述引物对2包括CRTAP
‑
2F和CRTAP
‑
2R；所述CRTAP
‑
1F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述CRTAP
‑
1R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述CRTAP
‑
2F的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述CRTAP
‑
2R的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0012]本专利技术还提供了上述引物在制备脆骨症
Ⅶ
型诊断或辅助诊断试剂或试剂盒中的应用。
[0013]本专利技术还提供了一种脆骨症
Ⅶ
型的诊断或辅助诊断试剂，所述诊断或辅助诊断试剂包括上述引物。
[0014]优选的，所述诊断或辅助诊断试剂还包括dNTP，PCR缓冲液，镁离子和Tap聚合酶中的一种或多种。
[0015]本专利技术还提供了一种脆骨症
Ⅶ
型的诊断或辅助诊断试剂盒，所述诊断或辅助诊断试剂盒包括上述的试剂和测序引物。
[0016]优选的，所述测序引物包括测序引物对1和/或测序引物对2；所述测序引物对1包括CRTAP
‑
Seq1F和CRTAP
‑
Seq1R，所述测序引物对2包括CRTAP
‑
Seq1F和CRTAP
‑
Seq1R；所述CRTAP
‑
Seq1F的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述CRTAP
‑
Seq1R的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述CRTAP
‑
Seq2F的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；所述CRTAP
‑
Seq2R的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。
[0017]优选的，所述诊断或辅助诊断试剂盒还包括DNA1和/或DNA2；所述DNA1的单链核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；所述DNA2的单链核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。
[0018]有益效果：
[0019]本专利技术提供了一种CRTAP致病突变体，所述CRTAP致病突变体包括c.24_25insGCGGCGCT和/或c.1125dupT；所述c.24_25insGCGGCGCT在登录号为NM_000088.4的1号外显子的第24位和第25位之间存在GCGGCGCT插入突变；所述c.1125dupT在登录号为NM_000088.4的6号外显子的第1125位存在T重复突变。本专利技术通过外显子组测序技术首次发现了CRTAP:NM_000088.4:exon1:c.24_25insGCGGCGCT:p.L12Rfs*2和exon6:c.1125dupT:p.K376*位点复合杂合突变可以导致脆骨症
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型，以上述突变基因为靶点制备的诊断或辅助诊断试剂或试剂盒，可以特异性区分脆骨症
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型患者、携带者和正常人群，可用于快速、有效地预测或诊断或辅助诊断脆骨症
Ⅶ<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CRTAP致病突变体，其特征在于，所述CRTAP致病突变体包括c.24_25insGCGGCGCT和/或c.1125dupT；所述c.24_25insGCGGCGCT在登录号为NM_000088.4的1号外显子的第24位和第25位之间存在GCGGCGCT插入突变；所述c.1125dupT在登录号为NM_000088.4的6号外显子的第1125位存在T重复突变。2.权利要求1所述CRTAP致病突变体作为检测靶点在制备脆骨症
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型诊断或辅助诊断试剂或试剂盒中的应用。3.权利要求1所述CRTAP致病突变体作为治疗靶点在制备治疗脆骨症
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型药物中的应用。4.扩增权利要求1所述CRTAP致病突变体的引物，其特征在于，所述引物包括引物对1和/或引物对2；所述引物对1包括CRTAP
‑
1F和CRTAP
‑
1R，所述引物对2包括CRTAP
‑
2F和CRTAP
‑
2R；所述CRTAP
‑
1F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述CRTAP
‑
1R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述CRTAP
‑
2F的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述CRTAP
‑
2R的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。5.权利要求4所述的引物在制备脆骨症
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型诊断或辅助诊断试剂或试剂盒中的应用。6.一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾桥，吴伟娟，王维，薛斌，
申请(专利权)人：湖南家辉生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：