一种培养野生弯柄灵芝的方法技术

本发明专利技术公开了一种培养野生弯柄灵芝的方法，用打孔器从长满野生弯柄灵芝菌株菌丝体的平板同一半径处打孔获得7mm菌丝块，接种在培养基平板上，于15

【技术实现步骤摘要】
一种培养野生弯柄灵芝的方法


[0001]本专利技术涉及可食用菌培养
，特别是一种培养野生弯柄灵芝的方法。

技术介绍

[0002]弯柄灵芝Ganoderma flexipes是Patouillard于1907年首次基于采集于越南Tonkin的标本而报道的新种，Steyeart、Ryvarden、赵继鼎和张小青、Wang&Wu等学者对该种做过研究。《中国大型菌物资源图鉴》、《海南莺歌岭大型真菌图鉴》等专著对其均有描述。其主要形态特征是子实体一年生，软木栓质至木栓质；菌盖近匙形至近圆形，小型、表面黄红褐色至红褐色，具漆状光泽，边缘钝或呈截形；具背生或中生柄，弯曲，表面与菌盖同色；菌肉浅黄褐色至褐色，皮壳细胞形态较规则，担孢子椭圆形，纹饰相对较细。夏秋季单生于阔叶林中、竹林中地下腐木上，造成木材白色腐朽。通常，在野外弯柄灵芝与年幼的紫芝G.sinense相似度较高，但是弯柄灵芝菌盖颜色相对较浅，没有达到紫红甚至近紫黑色的状态，且通常情况下，其菌盖在成熟时也较小，与年幼时差异不大。
[0003]目前，国内针对灵芝属真菌的研究与开发主要集中在赤芝G.lingzhi和紫芝G.sinense等种类，而弯柄灵芝作为热带、亚热带区域的优势品种之一，其相关研究却较少见报道。因此，开展弯柄灵芝的相关研究与开发具有重要的科学意义和产业价值。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是要解决现有技术中存在的不足，提供一种培养野生弯柄灵芝的方法。
[0005]为达到上述目的，本专利技术是按照以下技术方案实施的：
[0006]一种培养野生弯柄灵芝的方法，包括以下步骤：
[0007]S1、制备培养基，所述培养基为：碳源20g，氮源2g，KH2PO
4 1.5g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，所述碳源为淀粉、葡萄糖、蔗糖、乳糖、果糖、甘露醇、麦芽糖中的一种，所述氮源为蛋白胨、酵母粉、硝酸铵、硝酸钠、氯化铵、尿素、硝酸钾中的一种，所述培养基的pH为5
‑
9；
[0008]S2、用打孔器从长满野生弯柄灵芝菌株菌丝体的平板同一半径处打孔获得7mm菌丝块，接种在培养基平板上，于15
‑
30℃恒温培养箱中避光培养。
[0009]优选地，所述碳源为淀粉。
[0010]优选地，所述氮源为酵母粉。
[0011]优选地，所述培养基的pH为9。
[0012]优选地，所述培养温度为30℃。
[0013]优选地，所述步骤S1中，用1mol/L盐酸或1mol/L的氢氧化钠调节培养基的pH。
[0014]与现有技术相比，本专利技术的野生弯柄灵芝的最适培养条件为：碳源淀粉、氮源酵母粉、pH 9.0、温度30℃，在该培养情况下野生弯柄灵芝生长最快，长势最优，且更喜欢在偏碱性环境下生长；为进一步开发和利用弯柄灵芝资源提供基础研究数据，也为研究该属的近缘种类生物学特性与驯化栽培研究提供了基础数据参考。
具体实施方式
[0015]为使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步的详细说明。此处所描述的具体实施例仅用于解释本专利技术，并不用于限定专利技术。
[0016]弯柄灵芝野生子实体采自海南尖峰岭国家级自然保护区，经组织分离、纯化后获得纯培养菌株，由中国热带农业科学院热带生物技术研究所菌物标本馆(FCATAS)鉴定、保藏，菌株编号为FCATAS3；该菌株经宏观形态、显微结构特征综合鉴定为弯柄灵芝。经ITS序列分析，并在Gen Bank运用Blast进行同源性比对得出，与灵芝属的弯柄灵芝最大同源性高达99.84％，结合宏观形态、显微结构鉴定为弯柄灵芝(Ganoderma flexipes)，其ITS碱基序列为：
[0017][0018]本实施例的一种培养野生弯柄灵芝的方法，具体步骤如下：
[0019]S1、制备培养基，所述培养基为：淀粉20g，酵母粉2g，KH2PO
4 1.5g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，所述用1mol/L盐酸或1mol/L的氢氧化钠调节培养基的pH为9；
[0020]S2、用打孔器从长满野生弯柄灵芝菌株菌丝体的平板同一半径处打孔获得7mm菌丝块，接种在培养基平板上，于30℃恒温培养箱中避光培养。
[0021]在利用上述方法及培养基培养情况下野生弯柄灵芝生长最快，长势最优，且更喜欢在偏碱性环境下生长。
[0022]进一步为了验证上述培养基培养情况的可行性，进行以下菌丝体生物学特性研究。
[0023]首先确定碳源基础培养基：蛋白胨2g，MgSO
4 2g，KH2PO
4 1.5g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH自然。
[0024]氮源基础培养基：葡萄糖20g，MgSO
4 2g，KH2PO
4 1.5g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH自然。
[0025]不同碳源对菌丝生长的影响
[0026]以碳源基础培养基为空白对照，分别设置7种碳源(淀粉、葡萄糖、蔗糖、乳糖、果
糖、甘露醇、麦芽糖)作为处理组，浓度均为20g/L。用打孔器从长满菌丝体的平板同一半径处打孔获得7mm菌丝块，接种在7种碳源培养基平板上，于25℃恒温培养箱中避光培养，每个处理4个重复。接种后每24h观察记录菌丝长势，采用十字交叉法测量菌落直径，直至其中一组菌丝长满平板时，停止试验，计算菌丝日平均生长速度。
[0027]不同氮源对菌丝生长的影响
[0028]以氮源基础培养基为空白对照，分别设置7种氮源(蛋白胨、酵母粉、硝酸铵、硝酸钠、氯化铵、尿素、硝酸钾)作为处理组，浓度均为2g/L。
[0029]不同p H对菌丝生长的影响
[0030]用1mol/L盐酸或1mol/L氢氧化钠调节PDA培养基pH值为5.0、6.0、7.0、8.0、9.0，在PDA平板培养基上接种直径为7mm菌丝块，在25℃条件下避光培养。
[0031]不同温度对菌丝生长的影响
[0032]打孔取7mm菌丝块，接种于PDA平板培养基上，分别置于15℃、20℃、25℃、30℃的恒温培养箱中避光培养。
[0033]以菌丝生长速度和菌丝长势为评价指标，选用上述碳源、氮源、pH和温度4个单因素试验结果确定的最优3组水平处理为正交试验因素，按照无交互作用的L9(34)正交试验获得最佳组合，结果如下：
[0034]碳源对菌丝生长的影响
[0035]由表1可知，供试菌株在7种碳源培养基上均可生长，可以看出弯柄灵芝对碳源的需求较为广泛。菌丝平均生长速度由快到慢依次为：淀粉>葡萄糖>蔗糖>果糖>麦芽糖>乳糖>甘露醇>空白对照；其中，空白对照培养基上菌丝生长速度最慢，长势最差；在淀粉为碳源的培养基上菌丝生长速度最快，菌丝最浓密、粗壮，生长情况良好；综合菌丝生长速度及长势，淀粉为弯柄灵芝菌丝生长本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种培养野生弯柄灵芝的方法，其特征在于，利用权利要求1所述的野生弯柄灵芝菌株进行培养，包括以下步骤：S1、制备培养基，所述培养基为：碳源20g，氮源2g，KH2PO
4 1.5g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，所述碳源为淀粉、葡萄糖、蔗糖、乳糖、果糖、甘露醇、麦芽糖中的一种，所述氮源为蛋白胨、酵母粉、硝酸铵、硝酸钠、氯化铵、尿素、硝酸钾中的一种，所述培养基的pH为5
‑
9；S2、用打孔器从长满野生弯柄灵芝菌株菌丝体的平板同一半径处打孔获得7mm菌丝块，接种在培养基平板上，于15<...

【专利技术属性】
技术研发人员：马海霞，屈直，何双辉，马国营，宋子坤，杨孔涛，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院热带生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：