一种秋水仙碱杂质F的HPLC检测方法技术

本发明专利技术公开了一种秋水仙碱杂质F(去甲秋水仙碱)的HPLC检测方法。本发明专利技术具有较高的系统适用性，同时在专属性、定量限、检测限、线性范围以及重复性上表现出无可拟比的优势，具有较高的精密度。较高的精密度。

【技术实现步骤摘要】
一种秋水仙碱杂质F的HPLC检测方法


[0001]本专利技术属于化学药物分析检测领域，具体涉及一种秋水仙碱杂质F的HPLC检测方法。

技术介绍

[0002]秋水仙碱(Colchicine)为百合科植物丽江山慈菇Iphigenia indica Kunthet Benth.的球茎中提取得到的一种生物碱，主要用于抗痛风病。本品在中国药典、欧洲药典和美国药典中均有收载，且各国药典秋水仙碱原料药标准均收载了杂质F，都采用与三价铁显色法检查。结构式分别如下：
[0003][0004]显色法方法专属性差，无法给出具体杂质含量数值，片剂中由于辅料干扰，无法采用该法测定杂质F；另采用药典有关物质检查色谱条件，杂质F峰形差，积分不准确。本专利技术采用HPLC法测定秋水仙碱中杂质F的含量。峰形良好，专属性强，不受其他杂质干扰，方法可靠，能计算出杂质具体含量值。

技术实现思路

[0005]专利技术目的：本专利技术的目的是提供一种秋水仙碱及其片剂中杂质F的HPLC检测方法，使其专属性、定量限、检测限、线性范围、重复性、准确度等方面完全符合标准并且具有较高的精密度。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种秋水仙碱杂质F的HPLC检测方法，其特征在于，通过液相色谱法检测秋水仙碱及其片剂中杂质F的含量；
[0007]所述杂质F为去甲秋水仙碱，化学名称为N
‑
(10
‑
羟基
‑
1,2,3
‑
三甲氧基
‑9‑<br/>氧代
‑
5,6,7,9
‑
四氢苯并[a]庚二烯
‑7‑
基)乙酰胺，结构式如下：
[0008][0009]具体地，该检测方法采用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，采用溶液A
‑
甲醇的混合溶液作为样品溶液的稀释剂和流动相进行等度洗脱，所述溶液A为依地酸二钠(又称乙二胺四乙酸二钠或EDTA
‑
2Na)
‑
磷酸
‑
水的混合液。
[0010]具体地，本专利技术所提供的一种秋水仙碱中杂质F的HPLC检测方法，包括如下步骤：
[0011]a)配制原料药供试品溶液
[0012]精密称取秋水仙碱原料药置量瓶中，用稀释剂制成每1ml中含0.25mg秋水仙碱原料药的供试品溶液；
[0013]b)配制片剂供试品溶液
[0014]取秋水仙碱片，研细，精密称定适量，置量瓶中，加稀释剂制成每1ml中含0.25mg秋水仙碱的片剂供试品溶液；
[0015]c)配制对照品溶液
[0016]取杂质F对照品适量，加稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含2.5μg的溶液；
[0017]d)分别精密量取供试品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，采用外标法以峰面积计算供试品溶液中杂质F的含量。
[0018]具体地，所述步骤a)、b)、c)中的稀释剂为：溶液A
‑
甲醇(55∶45)。
[0019]具体地，所述步骤d)中计算公式为：
[0020][0021][0022]其中：
[0023]式中：f—响应因子；m
S
—对照品溶液中杂质B的称样量；c
S
—杂质B的含量；V
S
—对照品溶液中杂质B总稀释体积；A
S
—对照品溶液色谱图中杂质B的峰面积f
平均
—响应因子的平均值；A
i
—供试品中杂质B的峰面积；m
i
—供试品称样量；V
i
—供试品稀释体积。
[0024]优选的，所述液相色谱的检测条件为：
[0025]色谱柱：Welch Xtimate C8色谱柱，规格为150mm
×
4.6mm，5μm；
[0026]流动相：溶液A
‑
甲醇(55∶45)；
[0027]洗脱方式：等度洗脱；
[0028]流速：1.0ml/min；
[0029]柱温：25℃；
[0030]检测波长：245nm；
[0031]进样量：20μL。
[0032]具体地，所述溶液A的配制方法为，取依地酸二钠100mg和磷酸2.0ml，加水溶解并稀释至1000ml，摇匀。
[0033]优选的，该检测方法最低能定量检测供试品中0.01％的杂质F。
[0034]具体地，该方法适用于需要进行秋水仙碱杂质F检测的秋水仙碱及含秋水仙碱的相关制剂，优选为秋水仙碱片剂。
[0035]有益效果：(1)本专利技术在溶剂和流动相中添加了磷酸和依地酸二钠，优化了杂质F
峰形，同时避免杂质F与溶剂及色谱系统中污染的金属离子络合，使杂质F对照品标准曲线的回归系数大于0.999。(2)本专利技术在专属性、定量限、检测限、线性范围、准确性以及精密度上表现出无可拟比的优势。
附图说明
[0036]图1是杂质F在流动相1(水
‑
甲醇)体系下色谱图；
[0037]图2是杂质F在流动相2(0.2％磷酸溶液
‑
甲醇)体系下色谱图；
[0038]图3是杂质F在流动相3(溶液A
‑
甲醇)体系下色谱图；
[0039]图4是杂质F对照品的标准曲线图。
具体实施方式
[0040]为了加深对本专利技术的理解，下面将结合实施例和附图对本专利技术作进一步详述，该实施例仅用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术保护范围的限定。
[0041]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0042]依照本专利技术所述检测方法，主要针对杂质F的检测，用外标法进行计算。
[0043]本专利技术所述检测方法在实施方式中采用的仪器与试剂信息见下表：
[0044][0045][0046]实施例1
[0047]本实施例提供一种秋水仙碱中杂质F的HPLC检测方法。
[0048]1、检测方法
[0049](1)配制稀释剂
[0050]取依地酸二钠100mg和磷酸2.0ml，加水溶解并稀释至1000ml，摇匀，配制成溶液A，溶液A
‑
甲醇(55：45)。
[0051](2)配制原料药供试品溶液
[0052]取秋水仙碱约25mg，精密称定，置100ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
[0053](3)配制片剂供试品溶液
[0054]取本品25片(约相当于含秋水仙碱25mg)，置100ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
[0055](4)配制对照品溶液
[0056]取杂质F对照品适量，加稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含2.5μg的溶液。
[0057](5)分别本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种秋水仙碱杂质F的HPLC检测方法，其特征在于，通过色谱法检测秋水仙碱或秋水仙碱片剂中杂质F的含量；所述杂质F为去甲秋水仙碱，结构式如下：2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法采用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，采用溶液A
‑
甲醇的混合溶液作为样品溶液的稀释剂和流动相进行等度洗脱，所述溶液A为依地酸二钠
‑
磷酸
‑
水的混合液。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：a)配制秋水仙碱原料药供试品溶液精密称取秋水仙碱原料药置量瓶中，用稀释剂制成秋水仙碱原料药供试品溶液；b)配制秋水仙碱片剂供试品溶液取秋水仙碱片，研细，精密称定适量，置量瓶中，加稀释剂制成秋水仙碱片剂供试品溶液；c)配制对照品溶液取杂质F适量，加稀释剂溶解制成对照品溶液；d)分别精密量取供试品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱兵，徐海燕，陈小星，
申请(专利权)人：南京华威医药科技集团有限公司，
类型：发明
国别省市：