CTSS在皮肤纤维瘤中的应用制造技术

本发明专利技术涉及CTSS的医药用途，具体涉及CTSS在皮肤成纤维增殖与分化活性相关的疾病的应用，尤其是CTSS在皮肤纤维瘤中的应用。本发明专利技术提供CTSS的表达水平的检测试剂制备辅助诊断皮肤成纤维增殖与分化活性相关的疾病，包括皮肤纤维瘤产品中的应用。本发明专利技术还提供CTSS抑制剂在制备用于治疗皮肤纤维瘤药物中的应用。本发明专利技术找到皮肤成纤维增殖与分化活性相关的疾病包括皮肤纤维瘤诊断标志物，以及将标志物抑制剂应用到皮肤纤维瘤医药中。制剂应用到皮肤纤维瘤医药中。制剂应用到皮肤纤维瘤医药中。

【技术实现步骤摘要】
CTSS在皮肤纤维瘤中的应用


[0001]本专利技术涉及CTSS的医药用途，具体涉及CTSS在皮肤成纤维增殖与分化活性相关的疾病的应用，尤其是CTSS在皮肤纤维瘤中的应用。

技术介绍

[0002]皮肤纤维瘤（dermatofibroma，DF），又名良性纤维组织细胞瘤（benign fibrous histiocytoma ，BFH），皮肤纤维瘤是成纤维细胞或组织细胞灶性增生引致的一种真皮内的良性肿瘤，是一种常见的皮肤病变，约占一个皮肤病理学实验室收到的皮肤病变标本的 3%。 它的发生机制尚不明确，多认为是微小皮肤损伤所引起的一种反应性纤维增生。本病好发于中青年，女性多见，可见于身体任何部位，但以四肢较为多见，常表现为单发褐色皮肤结节，组织病理学上主要由成纤维细胞和组织细胞构成。典型皮肤纤维瘤易于诊断，但由于其在组织学上谱系广泛，且表现各异，这就给诊断带来了一定困难。该病的治疗方法以手术治疗和保守治疗为主。
[0003]CTSS是一种分泌蛋白酶，在多种器官纤维性疾病中发挥重塑多种细胞外基质成分的作用，如胶原蛋白和纤连蛋白。据以往报道，CTSS参与了肺肉芽肿、囊性纤维化样肺病等多种纤维化疾病的发展，CTSS在肺囊性纤维化患者中上调，靶向干预CTSS的表达减少了气道炎症。干预组织蛋白酶降解弹性胶原的过程可有效抑制皮肤老化。然而，CTSS在皮肤纤维疾病，尤其是皮肤纤维瘤形成中的作用仍未得到解答。
[0004]本领域迫切需要寻求皮肤纤维瘤诊断标志物，以及将标志物抑制剂应用到皮肤纤维瘤医药中，这是亟需要解决的技术问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在提供干预ctss表达或抑制其活性片段用于预防或治疗皮肤纤维瘤的医药用途。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案。
[0007]CTSS的表达水平的检测试剂制备辅助诊断皮肤成纤维增殖与分化活性相关的疾病产品中的应用。
[0008]进一步的，所述应用包括CTSS的表达水平的检测试剂制备辅助诊断皮肤纤维瘤产品中的应用进一步的，所述的皮肤成纤维增殖与分化活性相关的疾病诊断筛查的产品以CTSS基因或CTSS蛋白作为诊断标记物。
[0009]进一步的，所述的CTSS表达水平在皮肤成纤维增殖与分化活性相关的疾病中表达上调。
[0010]进一步的，所述的诊断产品为芯片、制剂或试剂盒。
[0011]本专利技术提供CTSS抑制剂在制备用于治疗皮肤成纤维增殖与分化活性相关的疾病药物中的应用。
[0012]进一步的，包括CTSS抑制剂在制备用于治疗皮肤纤维瘤药物中的应用。
[0013]进一步的，所述CTSS抑制剂抑制人成纤维细胞分化，所述CTSS抑制剂通过抑制CTSS基因表达达到抑制皮肤纤维瘤的发生和发展。
[0014]进一步的，所述CTSS抑制剂的包括CTSS抑制剂LY30003283。
[0015]进一步的，所述CTSS抑制剂的包括shRNA干扰靶序列，所述shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0016]进一步地，所述药物为任何药物治疗学上可接受的剂型。
[0017]进一步地，所述药物为任何药物治疗学上可接受的剂量。
[0018]与现有技术相比本专利技术的有益效果。
[0019]专利技术人通过大量实验发现，在建立的模型中，ctss表达明显上调；反之，注射ctss抑制剂的小鼠改善皮肤纤维瘤。
[0020]在人体皮肤纤维瘤皮肤组织中，ctss表达明显上调。
[0021]细胞学水平发现，抑制ctss表达后可以抑制成纤维细胞分化，进而抑制皮肤纤维瘤发生和发展。
[0022]以上结果表明，ctss在皮肤纤维瘤过程中起重要调控作用。
附图说明
[0023]图1是人正常皮肤和皮肤纤维瘤组织中的CTSS mRNA表达水平。
[0024]图2是人正常皮肤和皮肤纤维瘤组织中的CTSS的蛋白表达水平。
[0025]图3是敲低CTSS后，I型胶原蛋白（collagenI，Col1）、III型胶原蛋白（collagenIII，Col3）和纤连蛋白（fibronectin，Fn）的mRNA表达图。
[0026]图4是敲低CTSS后，I型胶原蛋白（collagenI，Col1）、III型胶原蛋白（collagenIII，Col3）和纤连蛋白（fibronectin，Fn）的蛋白表达图。
[0027]图5是对照小鼠和LY3000328治疗小鼠病变面积表达图。
[0028]图6是两组的H&E染色图和α
‑
SMA IHC染色图像及对应的病变面积表达图。
具体实施方式
[0029]实施例1。
[0030]1、皮肤组织或细胞中总RNA提取及qRT
‑
PCR。
[0031]1.1、组织中总RNA提取。
[0032]向装有组织的Ep管中加入1mlTrizol裂解液，使用低温组织匀浆仪充分裂解组织至均一状态。冰上静置组织10min等待进一步裂解充分。向EP管中加入200μL氯仿，使用涡旋机充分震荡15s将液体混匀，静置于冰上10min。之后使用低温离心机按12000g离心10min，取上层透明液体于新的EP管中，并加等体积异丙醇，上下颠倒混匀，静置于冰上10min。之后使用低温离心机按12000g离心10min。弃上清，加入1ml 75%乙醇清洗沉淀，使用低温离心机按7000g离心5min，弃上清。使用滤纸吸干乙醇并置于通风橱将残留液体挥发。使用去RNA酶水溶沉淀，进行后续实验。
[0033]1.2、RNA定量、逆转录，实时荧光定量PCR。
[0034]RNA定量：用 NanoDrop 2000分光光度计检测 RNA 在260mm 和 280mm 处的吸光度，获得比值，若A260/A 280位于1.8
‑
2.0，表示RNA的纯度较好，测得的RNA浓度可以用于后续实验。
[0035]RNA逆转录：将RNA反转录成为cDNA，按照以下步骤进行。
[0036]表1 去基因组DNA反应体系。
[0037]。
[0038]反应条件：42℃加热 2 min；降温至4℃。反应体积：10μL。
[0039]表2 cDNA合成反应体系。
[0040]。
[0041]反应调节：37℃ 15min；85℃ 5 s；降温至4℃。反应体积：20μL反转录结束后进行实时荧光定量PCR，以下是反应体系。
[0042]表3 PCR反应体系。
[0043]。
[0044]反应条件：第一阶段，预变性：95℃，5min；第二阶段，循环反应：95℃，15s；60℃，45s（40循环）；第三阶段，溶解曲线：95℃，15s；60℃，60s，95℃，15s。
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.CTSS表达水平的检测试剂制备辅助诊断皮肤成纤维增殖与分化活性相关的疾病产品中的应用。2.根据权利要求1所述的CTSS的表达水平的检测试剂制备辅助诊断皮肤成纤维增殖与分化活性相关的疾病产品中的应用，其特征在于，包括CTSS表达水平的检测试剂制备辅助诊断皮肤纤维瘤产品中的应用。3.根据权利要求1所述的CTSS表达水平的检测试剂制备辅助诊断皮肤成纤维增殖与分化活性相关的疾病产品中的应用，其特征在于，所述的皮肤成纤维增殖与分化活性相关的疾病诊断筛查的产品以CTSS基因或CTSS蛋白作为诊断标记物。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的CTSS表达水平在皮肤成纤维增殖与分化活性相关的疾病中表达上调。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品为芯片、制剂或试剂盒。6.CTSS抑制剂在制备用于治疗皮肤...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹佳俐，高兴华，吴严，袁正伟，齐瑞群，陈洪铎，孙艳，刘丹，
申请(专利权)人：中国医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：