SOGA1作为诊断或治疗卵巢癌耐药性的标志物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及SOGA1作为诊断或治疗卵巢癌耐药性的标志物及其应用；所述SOGA1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。基于所述SOGA1，提供一种抑制卵巢癌耐药性的制剂和检测卵巢癌耐药性的试剂盒。所述制剂包括降低SOGA1活性的抑制剂。所述包括基于定量PCR方法和/或基于探针杂交方法检测肿瘤样本中SOGA1。本发明专利技术发现，SOGA1在卵巢癌

【技术实现步骤摘要】
SOGA1作为诊断或治疗卵巢癌耐药性的标志物及其应用


[0001]本专利技术涉及一种生物标记物，具体涉及SOGA1作为诊断或治疗卵巢癌耐药性的标志物及其应用。

技术介绍

[0002]卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤，在我国卵巢癌年发病率居女性生殖系统肿瘤第3位，且呈逐年上升趋势，而死亡率位于女性生殖系统恶性肿瘤之首，严重威胁女性健康。其发病隐匿，早期症状不明显，70％的患者确诊时已至临床晚期，错失手术根治机会。化疗是绝大多数卵巢癌患者不可或缺的初始治疗手段，其中以铂类为基础的联合化疗是推荐的一线方案。患者在治疗初期可获得较为明显的效果，初次治疗的缓解率高，但高达80％的患者经初治后1
‑
2年内复发，甚至多次复发，随后多死于渐进性化疗耐药性疾病。因此，在卵巢癌治疗过程中克服化疗耐药具有十分重要的意义。
[0003]SOGA1(Suppressor Of Glucose,Autophagy Associated 1，Ensembl数据库编号为ENSG00000149639)，被报道参与胰岛素受体信号通路、糖异生和自噬的调节。可通过脂联素及胰岛素依赖性方式调控葡萄糖生成进而调节自噬。现有研究提示，SOGA1可能作为肝细胞肝癌及乳腺癌的诊断生物标志物(PMID:31004302；PMID:33774752)，而对于SOGA1在卵巢癌组织和细胞中的表达模式及功能尚无研究报道，与卵巢癌铂类耐药是否存在相关性尚不可知。

技术实现思路

[0004]针对上述问题，本专利技术目的在于明确SOGA1与卵巢癌铂类耐药的相关性，提供SOGA1在制备诊断或治疗卵巢癌耐药性的制剂中的应用。
[0005]本专利技术提供的一种在诊断或治疗卵巢癌耐药性的生物标志物，该生物标记物为SOGA1，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0006]卵巢癌患者铂类耐药是卵巢癌治疗效果不佳的重要原因之一。为进一步明确卵巢癌患者铂类耐药的机制，以期为卵巢癌患者提供更好的诊疗策略，本专利技术通过不断增加药物作用浓度的方法筛选卵巢癌顺铂耐药细胞株；随后基于高通量测序方法，对卵巢癌耐药细胞株及敏感株对照进行测序，获得其差异基因表达数据，进而进行生物信息学分析，寻找可表征肿瘤细胞发生耐药性的基因，再研究抑制该基因的功能，能否降低肿瘤细胞的耐药性。
[0007]现有技术中针对SOGA1基因与卵巢癌铂类耐药的关系尚未见研究。本专利技术发现，与卵巢癌顺铂(Cisplatin，CDDP)敏感株相比，SOGA1在卵巢癌
‑
CDDP耐药细胞株中表达显著升高。在卵巢癌
‑
CDDP耐药细胞株中下调SOGA1水平，可抑制卵巢癌
‑
CDDP耐药细胞单克隆形成能力，降低CDDP IC50(half maximal inhibitory concentration)值，即降低肿瘤细胞对于顺铂的耐药性。由此提出了SOGA1在制备诊断或治疗卵巢癌耐药性的制剂中的应用，为卵巢癌诊疗策略的开发提供了新的研究方向。
[0008]本专利技术的又一目的在于，提供一种抑制卵巢癌耐药性的制剂，包括降低SOGA1活性的抑制剂。
[0009]其中，所述抑制剂包括siRNA、shRNA或小分子抑制剂。
[0010]其中，所述抑制剂包括SOGA1 siRNA，其正义链核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示，其反义链核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.3所示。
[0011]本专利技术提供的SOGA1可制备检测卵巢癌耐药性的试剂上应用。
[0012]提供一种检测卵巢癌耐药性的试剂盒，包括基于定量PCR方法和/或基于探针杂交方法检测肿瘤样本中SOGA1。
[0013]其中，所述试剂盒中，用于检测卵巢癌耐药性的试剂包括基于定量PCR方法检测肿瘤样本中SOGA1，其引物包括如SEQ ID NO.4所示的正向引物和如SEQ ID NO.5所示的反向引物。
附图说明
[0014]图1为卵巢癌顺铂耐药细胞株与敏感株中SOGA1表达量检测；
[0015]图2为卵巢癌顺铂耐药细胞株与敏感株中SOGA1表达量检测；
[0016]图3为卵巢癌顺铂耐药细胞株中转染si
‑
NC和si
‑
SOGA1后集落形成能力检测
[0017]图4为卵巢癌顺铂耐药细胞株中转染si
‑
NC和si
‑
SOGA1后IC50检测。
具体实施方式
[0018]以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。
[0019]实施例1：筛选卵巢癌耐药细胞株
[0020]初始细胞株选用Caov
‑
3细胞(卵巢癌细胞，购自中国科学院细胞库)，具体操作步骤如下：
[0021]1、将Caov
‑
3细胞在含有10％胎牛血清和1％双抗的DMEM培养液中，放置37℃、5％CO2、相对湿度为90％的培养箱中培养，2
‑
3天换液1次。
[0022]2、将对数生长期细胞培养至75％贴壁率时，弃上清，加入含顺铂的培养液持续培养，所述顺铂的作用浓度为5μmol/L，可观察到药物作用下，大部分细胞死亡，存活细胞缓慢生长；
[0023]3、稳定后逐步增加药物剂量,从5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L直至50μmol/L，经10个月诱导而成，得到可稳定生长、传代的耐药细胞株，命名为Caov
‑
3/CDDP
‑
50。
[0024]实施例2：高通量测序筛选耐药差异基因
[0025]1、分离收集到的Caov
‑
3/CDDP
‑
50耐药细胞与对照组Caov
‑
3敏感细胞，采用Qiagen公司RNeasy Mini Kit试剂盒进行总RNA提取，按说明书指示进行实验操作。
[0026]2、RNA提取标准：RNA纯度，OD260/280≧1.8，28S/18S≧1；RNA完整性，RIN值≧7.0。
[0027]3、RNA
‑
seq建库与测序：采用KAPA Stranded mRNA
‑
seq试剂盒进行RNA
‑
seq建库，运用llumina Hiseq2500测序系统进行测序，通过去接头、去低质量、去污染等过程完成数据处理，得到最终数据。
[0028]4、使用R包procomp进行Pearson相关系数热力图与主成分分析(PCA)；运用R包limma对基因进行差异分析(log2FC>1.5，FDR<0.05)，筛选差异表达基因(DEGs)。
[0029]实施例3：Real
‑
time PCR检测Caov
‑
3/CDDP
‑
50耐药细胞中SOGA1表达量
[0030]1、取1μg实施例2提本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种在诊断或治疗卵巢癌耐药性的生物标志物，其特征在于，所述生物标记物为SOGA1，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种抑制卵巢癌耐药性的制剂，其特征在于，包括降低SOGA1活性的抑制剂，所述SOGA1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。3.根据权利要求2所述的制剂，其特征在于，所述抑制剂包括siRNA、shRNA或小分子抑制剂。4.根据权利要求3所述的制剂，其特征在于，所述抑制剂包括SOGA1 siR...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁奕，尚晓喻，方军，何胜祥，
申请(专利权)人：安徽同科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：