表达趋化因子CXCL10、CXCL13、CCL19的免疫细胞及其制备方法与应用技术

本发明专利技术属于医药领域，具体涉及表达趋化因子的免疫细胞及其制备方法与应用。本发明专利技术提供了表达CXCL10、CXCL13、CCL19中至少一种趋化因子的免疫细胞及其制备方法，还提供了该免疫细胞在制备用于增强抗肿瘤免疫反应同时抑制肿瘤生长药物中的应用，以及该免疫细胞在制备用于提高过继性免疫治疗肿瘤功效药物中的应用。本发明专利技术发现表达趋化因子CXCL10、CXCL13、CCL19及其任意组合的免疫细胞具有优异的抗肿瘤免疫治疗效果，明显抑制肿瘤生长，有效提高过继性免疫治疗的疗效和反应率，促进CAR

【技术实现步骤摘要】
表达趋化因子CXCL10、CXCL13、CCL19的免疫细胞及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于医药领域，具体涉及表达趋化因子的免疫细胞及其制备方法，以及其在制备用于提高过继性免疫治疗功效药物中的应用。

技术介绍

[0002]肿瘤通过形成抑制性微环境抑制免疫细胞的功能，这是肿瘤免疫逃逸的重要原因之一，严重影响免疫疗法的反应率。改善肿瘤免疫微环境，增加肿瘤浸润T细胞有利于提高免疫治疗的效果。肿瘤微环境是肿瘤细胞和宿主免疫系统相互作用的主要场所，不同的免疫细胞亚群可以通过趋化因子和趋化因子受体之间的相互作用被招募到肿瘤微环境中，从而影响着肿瘤进展和免疫治疗结果。因此，选择性的靶向趋化因子及其受体信号可以作为提高免疫疗法疗效的策略。
[0003]趋化因子是一种微小的分泌蛋白，以介导免疫细胞运输和淋巴组织发育而闻名，根据其蛋白质序列中前两个半胱氨酸残基的位置，可进一步细分为四个主要类别：CC
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趋化因子、CXC
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趋化因子、C
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趋化因子和CX3C
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趋化因子。在肿瘤微环境中，肿瘤细胞和其他细胞，包括免疫细胞和基质细胞都可以表达趋化因子。在特定趋化因子的作用下，不同的免疫细胞亚群会迁移到肿瘤微环境中，通过直接和间接影响肿瘤免疫，影响肿瘤进展、治疗效果和患者预后。CD8+T细胞、表达IFN
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γ的Th1细胞和NK细胞等其他免疫细胞通过趋化因子
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趋化因子受体信号通路被募集到肿瘤微环境中，如CXCR3及其配体CXCL9和CXCL10在驱动Th1细胞、CD8+T细胞和NK细胞进入肿瘤微环境中起着关键作用。此外，CXCL9和CXCL10水平的增加与肿瘤浸润CD8+T细胞数量增加呈正相关，从而降低卵巢癌和结肠癌患者肿瘤转移水平，提高生存率。而CCL20/CCR6信号通路则能促进Th17细胞的募集。抗原呈递细胞，如巨噬细胞和树突状细胞也可被招募到肿瘤微环境中，这些细胞可以激活和局部扩大免疫效应细胞，从而促进肿瘤消退。
[0004]然而，目前仍不清楚何种趋化因子或趋化因子组合适合用于抗肿瘤免疫治疗。如何找到合适的趋化因子，并通过不同趋化因子组合来提高过继性免疫治疗，是目前急需解决的问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提供了一种表达趋化因子CXCL10、CXCL13、CCL19的免疫细胞及其制备方法和应用。
[0006]本专利技术通过筛选具有抑制肿瘤生长作用的趋化因子，将其基因编码序列构建到趋化因子过表达质粒中，再将趋化因子过表达质粒进行病毒包装，感染免疫细胞，将该免疫细胞应用于过继性免疫治疗(包括CAR
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T(Chimeric Antigen Receptor T cells，嵌合抗原受体T细胞)治疗、TCR
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T(T cell receptor
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engineered T cells，T细胞受体工程化T细胞)治疗、TIL细胞(Tumor Infiltrating Lymphocytes，肿瘤浸润淋巴细胞)治疗等)中，发现表达
趋化因子CXCL10、CXCL13、CCL19的免疫细胞在过继性免疫治疗中可明显提高对肿瘤的免疫治疗功效，并对肿瘤的生长具有良好的抑制效果，从而为利用趋化因子进行肿瘤相关的免疫治疗提供了新的思路和治疗手段。
[0007]本专利技术的第一方面，提供了一种免疫细胞，该免疫细胞表达至少一种趋化因子。优选地，所述趋化因子包括以下任意一种或者多种：CXCL10、CXCL13、CCL19。
[0008]根据本专利技术实施例，所述免疫细胞表达趋化因子CXCL10、CXCL13、CCL19中的其中一种，或者同时表达趋化因子CXCL10、CXCL13、CCL19中的任意两种，或者同时表达趋化因子CXCL10、CXCL13、CCL19中的全部三种。
[0009]根据本专利技术具体实施例，所述免疫细胞表达趋化因子CXCL10。根据本专利技术具体实施例，所述免疫细胞表达趋化因子CXCL13。根据本专利技术具体实施例，所述免疫细胞表达趋化因子CCL19。根据本专利技术具体实施例，所述免疫细胞表达趋化因子CXCL10与CXCL13。根据本专利技术具体实施例，所述免疫细胞表达趋化因子CXCL10与CCL19。根据本专利技术具体实施例，所述免疫细胞表达趋化因子CXCL13与CCL19。根据本专利技术具体实施例，所述免疫细胞表达趋化因子CXCL10、CXCL13与CCL19。
[0010]根据本专利技术实施例，所述免疫细胞包括但不限于嵌合抗原受体T细胞(CAR
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T细胞)、T细胞受体工程化T细胞(TCR
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T细胞)、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL细胞)、外周血单个核细胞(PBMC细胞)、NK细胞、NKT细胞、γδT细胞、巨噬细胞、树突状细胞、B细胞。
[0011]根据本专利技术实施例，所述免疫细胞包含趋化因子过表达质粒。根据本专利技术具体实施例，通过将趋化因子过表达质粒进行病毒包装，然后使用该病毒感染免疫细胞，使免疫细胞包含趋化因子过表达质粒。优选地，所述病毒包括逆转录病毒和慢病毒。
[0012]根据本专利技术实施例，所述趋化因子过表达质粒包含编码趋化因子的基因序列。优选地，所述趋化因子过表达质粒包含编码CXCL10、CXCL13和CCL19中至少一种趋化因子的基因序列。
[0013]根据本专利技术具体实施例，编码CXCL10趋化因子的基因序列为：(i)SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与SEQ ID NO.1的核苷酸序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％序列同一性的核苷酸序列；或者(ii)SEQ ID NO.2的核苷酸序列或与SEQ ID NO.2的核苷酸序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％序列同一性的核苷酸序列。
[0014]人类趋化因子CXCL10的基因编码序列(SEQ ID NO.1)：
[0015]ATGAATCAAACTGCCATTCTGATTTGCTGCCTTATCTTTCTGACTCTAAGTGGCATT CAAGGAGTACCTCTCTCTAGAACTGTACGCTGTACCTGCATCAGCATTAGTAATCAACCTGTTAATCCAAGGTCTTTAGAAAAACTTGAAATTATTCCTGCAAGCCAATTTTGTCCACGTGTTGAGATCATTGCTACAATGAAAAAGAAGGGTGAGAAGAGATGTCTGAATCCAGAATCGAAGGCCATCAAGAATTTACTGAAAGCAGTTAGCAAGGAAAGGTCTAAAAGATCTCCTTAA。
[0016]小鼠趋化因子CXCL10的基因编码序列(SEQ ID NO.2)：
[0017]ATGAACCCAAGTGCTGCCGTCATTTTCTGCCTCATCCTGCTGGGTCTGAGTGGGACTCAAGGGATCCCTCT本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种免疫细胞，其特征在于，所述免疫细胞表达以下任意一种或者多种趋化因子：CXCL10、CXCL13、CCL19。2.根据权利要求1所述的免疫细胞，其特征在于，所述免疫细胞包括嵌合抗原受体T细胞、T细胞受体工程化T细胞、肿瘤浸润淋巴细胞、外周血单个核细胞、NK细胞、NKT细胞、γδT细胞、巨噬细胞、树突状细胞、B细胞。3.根据权利要求1所述的免疫细胞，其特征在于，所述趋化因子CXCL10由以下基因序列编码：(i)SEQ ID NO.1的核苷酸序列或与SEQ ID NO.1的核苷酸序列具有至少80％序列同一性的核苷酸序列；或者(ii)SEQ ID NO.2的核苷酸序列或与SEQ ID NO.2的核苷酸序列具有至少80％序列同一性的核苷酸序列。4.根据权利要求1所述的免疫细胞，其特征在于，所述趋化因子CXCL13由以下基因序列编码：(i)SEQ ID NO.3的核苷酸序列或与SEQ ID NO.3的核苷酸序列具有至少80％序列同一性的核苷酸序列；或者(ii)SEQ ID NO.4的核苷酸序列或与SEQ ID NO.4的核苷酸序列具有至少80％序列同一性的核苷酸序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：周鹏辉，熊昕昕，叶婧晗，
申请(专利权)人：中山大学肿瘤防治中心中山大学附属肿瘤医院，中山大学肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：