一种6-FAM亚磷酰胺的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种6

【技术实现步骤摘要】
一种6
‑
FAM亚磷酰胺的制备方法


[0001]本专利技术涉及有机合成
，尤其是涉及一种6
‑
FAM亚磷酰胺的制备方法。

技术介绍

[0002]6‑
FAM亚磷酰胺(6
‑
Fluorescein Phosphoramidite，6
‑
FAM)是一种荧光素衍生物类的标记物，主要在荧光标记技术中，应用于核酸探针和DNA自动测序等。6
‑
FAM亚磷酰胺分子式为C46H58N3O10P，分子量约为843.9。其主要结构中，苯环上较大的羧基使芬香环保持在生色团垂直的位置上，这提高了荧光量子的产率。此外，6
‑
FAM亚磷酰胺还具有无毒、成本低等优点。传统的荧光素类衍生物存在着ph敏感性较强、光淬灭率较高、发射光谱较宽、斯托克位移小等缺点，但有研究表明，酰胺类荧光素衍生物能够提供多种吸收和发射最大值，具有良好的特异选择性和光稳定性，适合在酸性、中性和碱性环境下进行标记，且因斯托克位移大而使得样品背景干扰小。因此，开发6
‑
FAM亚磷酰胺的制备方法很有必要。
[0003]6‑
羧基荧光素作为6
‑
FAM亚磷酰胺的基础原料，传统的化学合成方法是先用偏苯三酸酐和间苯二酚在酸性条件下缩合生成，该合成路线不可避免的会出现几乎等量的5
‑
羧基荧光素的同分异构体，现有工艺是把5(6)
‑
羧基荧光素的同分异构体通过柱层析等方法提纯分离得到6
‑
羧基荧光素，然后用6
‑
羧基荧光素作为起始原料，再经过三步反应合成6
‑
FAM亚磷酰胺，该路线存在起始原料分离过程复杂且产率低的缺点。
[0004]因此，有必要提供一种新的6
‑
FAM亚磷酰胺的制备方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种6
‑
FAM亚磷酰胺的制备方法，能够有效避免起始原料进行手性拆分的过程，且制备的产物收率高。
[0006]根据本专利技术的第一方面实施例的提供的6
‑
FAM亚磷酰胺的制备方法，包括如下步骤：
[0007]S1、将5(6)
‑
羧基荧光素、有机碱和特戊酸酐进行反应，得到5(6)
‑
羧基荧光素特戊酸酯；
[0008]S2、在醇溶剂中，将5(6)
‑
羧基荧光素特戊酸酯和有机胺进行混合，在
‑
10～
‑
40℃下静置，析出固体6
‑
羧基荧光素特戊酸酯；
[0009]S3、在第一有机溶剂中，将6
‑
羧基荧光素特戊酸酯、N
‑
羟基丁二酰亚胺和N,N'
‑
二环己基碳二亚胺进行反应得到中间体1；将中间体1、6
‑
氨基
‑1‑
己醇和第二有机溶剂中进行反应得到6
‑
羧基荧光素特戊酸酯酰胺醇；
[0010]S4、在第三有机溶剂和惰性气氛下，将6
‑
羧基荧光素特戊酸酯酰胺醇、四氮唑和2
‑
氰乙基N,N,N
’
,N
’‑
四异丙基亚磷酰二胺进行反应，得到6
‑
FAM亚磷酰胺；
[0011]其中，中间体1的结构式如下：
[0012][0013]其中，5(6)
‑
羧基荧光素的CAS号为72088
‑
94
‑
9；6
‑
FAM亚磷酰胺的CAS号为204697
‑
37
‑
0。
[0014]根据本专利技术实施例的制备方法，至少具有如下有益效果：
[0015]本专利技术采用5(6)
‑
羧基荧光素混合物无需分离纯化，用该混合物为原料、有机碱和特戊酸酐进行反应生成5(6)
‑
羧基荧光素特戊酸酯，然后通过有机胺和5(6)
‑
羧基荧光素特戊酸酯形成胺盐，在
‑
10～
‑
40℃下6
‑
羧基荧光素特戊酸酯二异丙胺盐会析出，再通过酸化生成6
‑
羧基荧光素特戊酸酯实现同分异构体的分离，后续通过两步反应合成6
‑
FAM亚磷酰胺。从而实现了由5(6)
‑
羧基荧光素混合物为原料合成6
‑
FAM亚磷酰胺的新路线。避免了传统工艺合成6
‑
FAM亚磷酰胺时需要在原料阶段拆分5(6)
‑
羧基荧光素为6
‑
羧基荧光素的复杂步骤。
[0016]根据本专利技术的一些实施例，所述有机胺选自二异丙胺、三乙胺或N
‑
甲基苄胺中的至少一种。
[0017]根据本专利技术的一些实施例，步骤S2中，5(6)
‑
羧基荧光素特戊酸酯和有机胺在
‑
20～
‑
30℃下进行混合。由此，该反应具有较高的产率，当温度高于
‑
20℃时，产率降低。
[0018]根据本专利技术的一些实施例，所述醇溶剂选自乙醇、甲醇或异丙醇中的至少一种。
[0019]根据本专利技术的一些实施例，所述5(6)
‑
羧基荧光素特戊酸酯和有机胺的摩尔比为1：(3～4)。
[0020]根据本专利技术的一些实施例，所述酸化采用盐酸酸化。
[0021]根据本专利技术的一些实施例，步骤S1中，所述有机碱选自吡啶、三乙胺或二异丙基乙胺中的至少一种。
[0022]根据本专利技术的一些实施例，所述第一有机溶剂选自乙酸乙酯、二氯甲烷、乙腈中的至少一种。
[0023]根据本专利技术的一些实施例，所述第二有机溶剂选自二氯甲烷、乙腈、四氢呋喃中的至少一种。
[0024]根据本专利技术的一些实施例，所述第三有机溶剂选自二氯甲烷、乙腈或四氢呋喃中的至少一种。
[0025]根据本专利技术的一些实施例，所述惰性气氛包括氮气、氩气中的至少一种。
[0026]根据本专利技术的一些实施例，所述5(6)
‑
羧基荧光素可以通过购买得到，或者采用本专利技术如下的方法制备得到：反应方程式如下：
[0027][0028]将间苯二酚溶解、甲基磺酸和溶剂中加入到反应瓶中,加入偏苯三酸酐，氮气保护下加热反应得到5(6)
‑
羧基荧光素。
[0029]根据本专利技术的一些实施例，所述加热反应的温度为100～130℃。
[0030]本专利技术的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本专利技术而了解。
具体实施方式
[0031]以下是本专利技术的具体实施例，并结合实本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种6
‑
FAM亚磷酰胺的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将5(6)
‑
羧基荧光素、有机碱和特戊酸酐进行反应，得到5(6)
‑
羧基荧光素特戊酸酯；S2、在醇溶剂中，将5(6)
‑
羧基荧光素特戊酸酯和有机胺进行混合，在
‑
10～
‑
40℃下静置，析出固体6
‑
羧基荧光素特戊酸酯二异丙胺盐；将其进行酸化得到6
‑
羧基荧光素特戊酸酯；S3、在第一有机溶剂中，将6
‑
羧基荧光素特戊酸酯、N
‑
羟基丁二酰亚胺和N,N'
‑
二环己基碳二亚胺进行反应得到中间体1；将中间体1、6
‑
氨基
‑1‑
己醇和第二有机溶剂中进行反应得到6
‑
羧基荧光素特戊酸酯酰胺醇；S4、在第三有机溶剂和惰性气氛下，将6
‑
羧基荧光素特戊酸酯酰胺醇、四氮唑和2
‑
氰乙基N,N,N
’
,N
’‑
四异丙基亚磷酰二胺进行反应，得到6
‑
FAM亚磷酰胺；其中，中间体1的结构式如下：2.根据权利要求1所述的6
‑
FAM亚磷酰胺的制备方法，其特征在于，所述有机胺选自二异丙胺、三乙胺或N<...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘华奇，王梦杰，夏雨佳，
申请(专利权)人：长沙奕信生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：