一种Caerin1.1/1.9联合抗CD47抗体在制备治疗黑色素瘤药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种Caerin1.1/1.9联合抗CD47抗体在制备治疗黑色素瘤药物中的应用。本发明专利技术中Caerin1.1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；Caerin1.9的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明专利技术的Caerin1.1/1.9可以使B16细胞凋亡的同时促使B16细胞高表达CD47，在抗CD47抗体的存在下，促使巨噬细胞吞噬肿瘤细胞，提高caerin1.1/1.9的疗效，也优于单独使用抗CD47抗体，为扩大CD47抑制/阻断药物的应用奠定基础。本发明专利技术提供的Caerin1.1/1.9还可以与anti

【技术实现步骤摘要】
一种Caerin1.1/1.9联合抗CD47抗体在制备治疗黑色素瘤药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种Caerin1.1/1.9联合抗CD47抗体在制备治疗黑色素瘤药物中的应用。

技术介绍

[0002]恶性黑色素瘤是由皮肤和其他器官黑素细胞产生的肿瘤。皮肤黑色素瘤表现为色素性皮损在数月或数年中发生明显改变。虽其发病率低，但其恶性度高，转移发生早，死亡率高，因此早期诊断、早期治疗很重要。恶性黑素瘤大多发生于成人，巨大性先天性色素痣继发癌变的病例多见于儿童。由于黑色素瘤对人体危害极大，因此，其治疗一直是备受各界关注的。
[0003]免疫治疗是肿瘤治疗的新方法。免疫检查点抑制剂如抗PD1，CTLA4已广泛在临床使用。随着科学研究的不断发展进步，新的免疫检查点也不断被发现，如anti
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CD47，但是这些免疫检查点在实际使用时，存在一个共性问题，由于这些免疫检查点在诱导肿瘤细胞凋亡的同时，还会影响巨噬细胞，使其无法吞噬肿瘤细胞，最终破坏肿瘤免疫微环境，限制了免疫治疗效率。
[0004]Caerin1多肽家族是澳大利亚树蛙皮肤分泌的抗菌多肽，包括Caerin1.1、Caerin1.9等，具有抗菌和抗肿瘤细胞生长的活性。研究发现，Caerin1.1、Caerin1.9在体外可以抑制人和小鼠宫颈癌细胞，人甲状腺癌细胞，人乳腺癌细胞生长，通过TNFalpha信号传导通路诱导Hela细胞凋亡；偶联核素，可以提高其抗肿瘤效率；体内可以抑制TC
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1细胞生长，并吸引血细胞如T细胞，NK细胞等到肿瘤组织。但是这些仅证明了Caerin1.1、Caerin1.9可以抑制肿瘤，并不会改变上述问题。而且，现有技术中并没有关于Caerin1.1、Caerin1.9用于黑色素瘤的报道。
[0005]综上可知，现有技术中普遍具有在治疗过程中，破坏肿瘤免疫微环境，影响免疫治疗效率，Caerin1.1、Caerin1.9应用范围窄等技术问题。

技术实现思路

[0006]针对现有技术普遍具有的问题，本专利技术提供了一种Caerin1.1/1.9联合抗CD47抗体在制备治疗黑色素瘤药物中的应用。三者联合用于制备治疗黑色素瘤的药物，提高了免疫治疗效果。
[0007]为了达到上述目的，本专利技术采用的技术效果为：一种Caerin1.1/1.9联合抗CD47抗体在制备治疗黑色素瘤药物中的应用。
[0008]优选地，所述Caerin1.1/1.9与抗CD47抗体（clone:MIAP301）的质量比为3：10~25（即60μg：200~500μg/小鼠）。
[0009]小鼠添加的抗CD47抗体的剂量为200~500μg /小鼠，Caerin1.1/1.9的添加剂量为60μg/小鼠，其中，Caerin1.1与Caerin1.9的质量比为1：1，即各添加30μg/小鼠。
[0010]优选地，所述Caerin1.1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述Caerin1.9的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0011]GLLSVLGSVAKHVLPHVLPHVVPVIAEHL
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NH2（SEQ ID NO.1）；GLFGVLGSIAKHVLPHVVPVIAEKL
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NH2（SEQ ID NO.2）；本专利技术还提供了一种Caerin1.1/1.9在诱导黑色瘤细胞B16大量表达CD47中的应用。
[0012]优选地，所述药物还包括药学上可接受的载体。
[0013]本专利技术还提供了一种Caerin1.1/1.9在制备治疗肿瘤药物组合物中的应用。
[0014]优选地，所述药物组合物还包括anti
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CD47抗体、治疗型疫苗。
[0015]优选地，所述治疗型疫苗由黑色素瘤治疗性疫苗，MPLA，α
‑
IL10r组成。
[0016]优选地，所述肿瘤为黑色素瘤、子宫颈癌。
[0017]机理研究发现，Caerin1.1/1.9改善肿瘤免疫微环境，重新极化肿瘤浸润巨噬细胞，使其从M2型向M1型转化。分泌更多的白介素12，更少的白介素10。如果治疗型疫苗含黑色素瘤治疗性疫苗，白介素10抑制抗体，caerin1.1/1.9与之联合使用，抑制TC
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1细胞生长的效率更好。Caerin1.1/1.9与anti
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CD47抗体，治疗型疫苗三者联合使用，可以使20
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50%的TC
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1荷瘤小鼠完全清除肿瘤。
[0018]专利技术人发现，Caerin1.1/1.9 体外抑制黑色素瘤B16细胞生长，诱导黑色素瘤B16细胞凋亡，并可以进入B16细胞，在体内抑制B16细胞生长。使B16细胞高表达CD47，在B16模型中提高抗CD47抗体效率，吸引血细胞到肿瘤，特别是巨噬细胞，CD4+T细胞到肿瘤，使巨噬细胞吞噬肿瘤细胞。与anti
‑
CD47抗体，治疗型疫苗联用，可以使50%荷瘤小鼠完全清除肿瘤。
[0019]与现有技术相比，本专利技术技术方案具有如下优势：本专利技术解决了抗CD47在黑色素瘤的疗效问题，诱导B16细胞高表达CD47，抗CD47与Caerin1.1/1.9联用提高了其治疗B16肿瘤的疗效。抗CD47与治疗性疫苗和Caerin1.1/Caerin1.9进行三联治疗能达到较使用α
‑
PD
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1时更好的治疗B16肿瘤的效果。
附图说明
[0020]图1为MTT试验检测细胞活性结果图；图2为细胞凋亡检测结果图；为F1/F3联用促进CD47增加结果图；图3为F1/F3 联用瘤内注射治疗的生存周期与肿瘤称重结果图；图4为不同抗体标记的细胞活性对比结果；图5为肿瘤涂抹检测试验结果图；图6为F1/F3联用治疗MDSC向巨噬细胞转化结果图；图7为分选体外刺激培养实验结果图；图8为F1/F3联合α
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PD
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1（抗程序性死亡受体1）治疗黑色素瘤结果图；图9为F1/F3联用促进CD47增加结果图；图10为F1/F3联合anti
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CD47治疗黑色素瘤结果图；图11为F1/F3联合α
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PD
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1与治疗性疫苗治疗黑色素瘤细胞存活性结果图；图12为肿瘤体积变化结果图；
图13~14为三联疗法免疫微环境变化研究分析结果图；图15为F1/F3治疗裸鼠荷瘤模型结果图；图16为F1/F3联合anti
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CD47与治疗性疫苗治疗黑色素瘤结果图。
具体实施方式
[0021]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步解释，但是应当注意的是，以下实施例仅用以解释本专利技术，而不能用来限制本专利技术，所有与本专利技术相同或相近的技术方案均在本专利技术的保护范围之内。本实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域常规技术方法和仪器说明书内容进行操作；所用试剂或仪器未注明本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种Caerin1.1/1.9联合抗CD47抗体在制备治疗黑色素瘤药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述Caerin1.1/1.9与抗CD47抗体的质量比为3：10~25。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述Caerin1.1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述Caerin1.9的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。4.一种Caerin1.1/1.9在诱导黑色瘤细胞B16大量表达CD47中的应用。5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物还包...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘晓松，李俊杰，倪国颖，王天放，
申请(专利权)人：中奥生物医药技术广东有限公司，
类型：发明
国别省市：