一种F3多肽的制备方法技术

本发明专利技术属于制药技术领域，具体涉及一种F3多肽的制备方法。本发明专利技术包括以下步骤：S1制备Rink Amide MBHA树脂；S2制备全保护肽树脂；S3将步骤S2所得全保护肽树脂加到切割液中进行侧链保护基及树脂的切割，沉淀及洗涤、干燥，得到粗肽；S4将步骤S3所得粗肽进行粗品纯化、换盐纯化、冻干，即得F3多肽；所述步骤S2制备全保护肽树脂时将单个保护的氨基酸和保护的多肽片段连接，按照F3多肽的氨基酸序列倒序合成。本发明专利技术提高了F3多肽的产量，大大降低了杂质含量，显著提高了F3多肽的纯度，有利于制药行业的大规模高纯度生产。的大规模高纯度生产。的大规模高纯度生产。

【技术实现步骤摘要】
一种F3多肽的制备方法


[0001]本专利技术属于制药
，具体涉及一种F3多肽的制备方法。

技术介绍

[0002]生物体内几乎所有细胞都受多肽调节，如：细胞分化、神经激素递质调节、免疫调节等，多肽具有调节机体生理功能和提供机体营养的双重功效，因此多肽药物的研究和开发具有重要的研究意义和应用前景。F3多肽中文序列为：甘氨酰
‑
L
‑
亮氨酰
‑
L
‑
苯丙氨酰
‑
甘氨酸
‑
L
‑
缬氨酰
‑
L
‑
亮氨酰
‑
甘氨酰
‑
L
‑
丝氨酰
‑
L
‑
异亮氨酰
‑
L
‑
丙氨酰
‑
L
‑
赖氨酰
‑
L
‑
组氨酰
‑
L
‑
缬氨酰
‑
L
‑
亮氨酰
‑
L
‑
脯氨酰
‑
L
‑
组氨酰
‑
L
‑
缬氨酰
‑
L
‑
缬氨酰
‑
L
‑
脯氨酰
‑
L
‑
缬氨酰
‑
L
‑
异亮氨酰
‑
L
‑
丙氨酰
‑
L
‑
谷氨酰
‑
L
‑
赖氨酰
‑
L
‑
亮氨酰醋酸盐。
[0003]英文序列为：
[0004]H
‑
Gly
‑
Leu
‑
Phe
‑
Gly
‑
Val
‑
Leu
‑
Gly
‑
Ser
‑
Ile
‑
Ala
‑
Lys
‑
His
‑
Val
‑
Leu
‑
Pro
‑
His
‑
Val
‑
Val
‑
Pro
‑
Val
‑
Ile
‑
Ala
‑
Glu
‑
Lys
‑
Leu
‑
NH2。分子式为：C
124
H
206
N
32
O
28
。
[0005]F3多肽的结构如下：
[0006][0007]人们可以利用生物体内分离、生物技术及化学合成等方法获得多种活性肽，尤其是化学合成过程中能够方便改变多肽的一级结构、加入特殊氨基酸、对多肽末端进行修饰等优点，备受关注。现有F3多肽的制备方法是根据多肽序列，将Fmoc
‑
氨基酸依次连接，但对于N端存在连续疏水性氨基酸的序列，合成过程中易于发生缩聚而导致杂质含量高，不利于制药行业的大规模高纯度生产。

技术实现思路

[0008]针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种F3多肽的制备方法。本专利技术大大降低了杂质含量，显著提高了F3多肽的纯度，有利于制药行业的大规模高纯度生产。
[0009]本专利技术的技术方案是：
[0010]一种F3多肽的制备方法，包括以下步骤：
[0011]S1制备Rink Amide MBHA树脂；
[0012]S2制备全保护肽树脂；
[0013]S3将步骤S2所得全保护肽树脂加到切割液中进行侧链保护基及树脂的切割，沉淀及洗涤、干燥，得到粗肽；
[0014]S4将步骤S3所得粗肽进行粗品纯化、换盐纯化、冻干，即得F3多肽；
[0015]所述步骤S2制备全保护肽树脂时将单个保护的氨基酸和保护的多肽片段连接，按照F3多肽的氨基酸序列倒序合成。
[0016]进一步地，所述步骤S1所述Rink Amide MBHA树脂是以MBHA树脂与Rink Amide Linker为主要原料制备而成，所述MBHA树脂的初始取代度为0.1～0.8mmol/g。因为肽链序列比较长，取代度过高，会导致连接更加困难；取代度过低，会对试剂造成浪费，对生产设备的规模和性能提出过高的要求，没法进行大规模工业化生产。
[0017]优选地，所述MBHA树脂的初始取代度为0.47mmol/g。
[0018]进一步地，所述步骤S1制备Rink Amide MBHA树脂的具体步骤为：
[0019](1)称取MBHA树脂置于带筛板固相合成反应器中，加入5％NMM/DMF，在20～30℃下溶胀60～120分钟，抽干，用1.0倍树脂床层体积的DMF洗涤树脂2次，每次2～4分钟，抽干，取少量树脂做茚三酮检测，结果应呈阳性；
[0020](2)称取3eq Rink Amide Linker和2.85eq HBTU加入容器中，0.5～1.0倍树脂体积的DMF溶解，冷浴条件下冷却，缓慢加入NMM，预活化5～15分钟，将上述预活化反应液加入到步骤(1)含有树脂的反应器中，20～30℃条件下反应90～120分钟，反应过程中每30
±
5分钟进行茚三酮检测，如果连续两次茚三酮检测呈阴性，且到规定反应时间，抽干反应液，用1.0倍树脂床层体积的DMF洗涤树脂3次，每次2～4分钟，抽干，即得。
[0021]进一步地，将单个保护的氨基酸和保护的多肽片段连接，按照F3多肽的氨基酸序列倒序合成制备全保护肽树脂的具体步骤为：
[0022](a)将Rink Amide MBHA树脂置于反应器中，向反应器中加入1.0倍树脂床层体积的20％(v/v)的哌啶/DMF溶液，搅拌10
±
1分钟，抽干，向反应器中加入1.0倍树脂床层体积的20％(v/v)的哌啶/DMF溶液，搅拌20
±
1分钟，抽干，得脱Fmoc保护树脂；用1.0倍树脂床层体积的DMF洗涤树脂8次，每次2～4分钟，抽干，取少量树脂做茚三酮检测，结果应呈阳性；
[0023](b)称取单个保护的氨基酸Fmoc
‑
AA
‑
OH或保护的多肽片段Fmoc
‑
AA
‑
AA
‑
OH和偶联剂加入容器中，0.5～1.0倍树脂体积的DMF溶解，冷浴条件下冷却，缓慢加入DIC，预活化5～15分钟，将上述预活化反应液加入到反应器中，20～30℃条件下反应120～180分钟，反应过程中每30
±
5分钟进行茚三酮检测，如果连续两次茚三酮检测呈阴性，且到规定反应本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种F3多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1制备Rink Amide MBHA树脂；S2制备全保护肽树脂；S3将步骤S2所得全保护肽树脂加到切割液中进行侧链保护基及树脂的切割，沉淀及洗涤、干燥，得到粗肽；S4将步骤S3所得粗肽进行粗品纯化、换盐纯化、冻干，即得F3多肽；所述步骤S2制备全保护肽树脂时将单个保护的氨基酸和保护的多肽片段连接，按照F3多肽的氨基酸序列倒序合成。2.如权利要求1所述的F3多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤S1所述Rink Amide MBHA树脂是以MBHA树脂与Rink Amide Linker为主要原料制备而成，所述MBHA树脂的初始取代度为0.1～0.8mmol/g。3.如权利要求1所述的F3多肽的制备方法，其特征在于，将单个保护的氨基酸和保护的多肽片段连接，按照F3多肽的氨基酸序列倒序合成时，所述单个保护的氨基酸为Fmoc
‑
Leu
‑
OH，Fmoc
‑
Lys(Boc)
‑
OH，Fmoc
‑
Glu(OtBu)
‑
OH，Fmoc
‑
Ala
‑
OH，Fmoc
‑
Ile
‑
OH，Fmoc
‑
Val
‑
OH，Fmoc
‑
Pro
‑
OH，Fmoc
‑
His(Trt)
‑
OH，Fmoc
‑
Lys(Boc)
‑
OH，Fmoc
‑
Ser(tBu)
‑
OH，Fmoc
‑
Gly
‑...

【专利技术属性】
技术研发人员：倪国颖，刘晓松，王天放，
申请(专利权)人：中奥生物医药技术广东有限公司，
类型：发明
国别省市：