检测或辅助检测动物源性饲料原料中昆虫源的引物组合物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了检测或辅助检测动物源性饲料原料中昆虫源的引物组合物、生物材料及其应用。本申请要解决的解决的技术问题是如何在动物源饲料中检测昆虫源。本申请公开了引物组合物，所述引物组合物包括引物对A、引物对B和引物对C的一种或多种；所述引物对A特异性检测黄粉虫，所述引物对B特异性检测黑水虻，所述引物对C特异性检测柞蚕。通过使用引物对A、引物对B和引物对C的一种或多种对动物源饲料进行体外热循扩增，根据扩增结果可以准确判断动物源饲料中是否含有黄粉虫、黑水虻或柞蚕。黑水虻或柞蚕。黑水虻或柞蚕。

【技术实现步骤摘要】
检测或辅助检测动物源性饲料原料中昆虫源的引物组合物及其应用


[0001]本专利技术涉及分子生物
中检测或辅助检测动物源性饲料原料中昆虫源的引物组合物、生物材料及其应用。

技术介绍

[0002]畜牧业和水产养殖业的快速发展使得我国饲料资源短缺，尤其是蛋白质饲料资源的短缺制约着我国畜牧业和水产养殖业的生产。其中动物源性饲料原料是饲料蛋白中的主要来源，包括鱼粉、肉粉、血粉、血浆蛋白粉、羽毛粉、肉骨粉、皮革粉和昆虫原料等。昆虫原料原料因其蛋白和脂肪含量高，生长速度快，养殖效率高等优势，近些年被作为优质蛋白源被广泛应用于饲料产业，主要包括黄粉虫、黑水虻和柞蚕。黄粉虫(Tenebrio molitor)俗名面包虫，为鞘翅目拟步甲科粉甲属的昆虫。黄粉虫富含蛋白质、维生素、矿物质等营养成分，具有易于消化吸收的特点，是优良的畜禽的饲料添加剂，可以提高产品的产量以及质量。黑水虻(Hermetia illucens L.)，腐生性的水虻科昆虫，能够取食禽畜粪便和生活垃圾，生产高价值的动物蛋白饲料，因其繁殖迅速，生物量大，食性广泛、吸收转化率高，容易管理、饲养成本低，动物适口性好等特点，从而进行资源化利用，其幼虫被称为“凤凰虫”，成为与蝇蛆、黄粉虫、大麦虫等齐名的资源昆虫，在全世界范围内得到推广。柞蚕(Antheraeapernyi)是鳞翅目大蚕蛾科柞蚕属的一种动物。柞蚕分布广泛，繁殖率高，既有野生又有饲养，资源极为丰富。柞蚕体内不仅积累了大量的营养物质，而且含有极其丰富的生理活性物质，在饲料产业的前景十分可观。为了更好服务于饲料产业，区分常见的昆虫原料的种类显得尤为关键。
[0003]昆虫原料在形态上较为相似，不具备明显的特征，使用常规的感官鉴定、化学检测、光镜检测在昆虫原料的检测中效果不佳。
[0004]基因检测技术是基于遗传物质DNA进行鉴定，能够从分子水平对不同物种进行区分，且具有需样品量小，更加准确、灵敏等特点。该方法在鱼粉、肉粉等方面有相关的报道，但针对昆虫原料的检测鲜有报道，亟需弥补昆虫原料基因检测的空缺。

技术实现思路

[0005]基于上述内容，本申请要解决的技术问题是如何提供一种鉴定检测或辅助检测动物源性饲料原料中昆虫源的引物组合物，尤其是黄粉虫、黑水虻和柞蚕。
[0006]为了解决上述问题，本申提供了鉴定或辅助鉴定动物源饲料原料中昆虫原料成分来源的引物组合物。
[0007]所述引物组合物包括特异于黄粉虫的引物对A、特异于黑水虻的引物对B和特异于柞蚕的引物对C这三种引物对中的三种、两种或一种；
[0008]所述引物对A由A
‑
F和A
‑
R组成，所述A
‑
F是核苷酸序列为SEQ ID No.1的单链DNA分子，A
‑
R是核苷酸序列为SEQ ID No.2的单链DNA分子；
[0009]所述引物对B由B
‑
F和B
‑
R组成，所述B
‑
F是核苷酸序列为SEQ ID No.3的单链DNA分子，B
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R是核苷酸序列为SEQ ID No.4的单链DNA分子；
[0010]所述引物对C由C
‑
F和C
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R组成，所述C
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F是核苷酸序列为SEQ ID No.5的单链DNA分子，C
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R是核苷酸序列为SEQ ID No.6的单链DNA分子。
[0011]为了解决上述问题，本申还提供了鉴定或辅助鉴定动物源饲料原料中昆虫原料成分来源的生物材料。
[0012]所述生物材料包括下述任一种：
[0013]D1)含有上述引物组合物的体外核酸扩增试剂；
[0014]D2)含有上述引物组合物或D1)所述体外核酸扩增试剂的试剂盒；
[0015]D3)含有上述引物组合物、D1)所述体外核酸扩增试剂或D2)所述试剂盒的检测仪器。
[0016]上述引物组合物或上述的生物材料在下述任一中的应用；
[0017]E1)用于辅助检测或检测样本中是否含有昆虫；
[0018]E2)用于制备辅助检测或检测样本中是否含有昆虫的产品。
[0019]上述的应用中，所述样本为动物源饲料。
[0020]本申请中，所述动物源可来为偶蹄目动物。所述偶蹄目可为猪、牛和羊中的一种或多种。
[0021]所述动物源还可为今鸟亚纲动物。所述今鸟亚纲动物可为鸡和鸭中的一种或多种。
[0022]所述动物源还可为节肢动物门动物。所述节肢动物门动物可为蟹、小龙虾、南极磷虾和虾中的一种或多种。
[0023]所述动物源还可为真兽亚纲动物。所述真兽亚纲动物可为狐狸、兔和貉子中的一种或多种。
[0024]所述动物源还可为脊椎动物亚门动物。所述脊椎动物亚门动物可为巴沙鱼、罗非鱼、沙丁鱼、汉氏棱鳀、赤鼻棱鳀、鲽鱼、鳕鱼和鮰鱼的一种或多种。
[0025]上述的应用中，所述昆虫为黄粉虫、黑水虻和柞蚕中的一种或多种。
[0026]本申请中，根据体外核酸扩增条带的有无判断是否存在黄粉虫、黑水虻或柞蚕。具体可为存在扩增条带为样本中含有在黄粉虫、黑水虻或柞蚕，不存在扩增条带为样本中不含有黄粉虫、黑水虻或柞蚕。
[0027]为了解决上述问题，本申还提供了鉴定或辅助鉴定动物源饲料原料中昆虫原料成分来源的方法。
[0028]所述方法包括利用上述的引物组合物或上述的生物材料对上述的样品进行述体外核酸扩增，根据体外核酸扩增的特异性产物判断样品中是否存在昆虫。
[0029]所述体外核酸扩增技术可为聚合酶链式反应(PCR)、链替代扩增(SDA)、连接酶链式反应(LCR)和依赖核酸序列的扩增(NASBA)、滚环核酸扩增(RCA)、环介导等温扩增(lamp)、依赖解旋酶的等温扩增技术(HDA)或Qβ复制技术。
[0030]本申请以聚合酶链式反应(PCR)为扩增手段进行特异性扩增。
[0031]上文中，所述体外核酸扩增的特异性产物可为体外核酸扩增的特异性产物的序列或大小或有无。
[0032]本申请中，所述饲料可为动物源性饲料。
[0033]本申请中，所述样本含有猪、牛、羊、鸡、鸭、虾、巴沙鱼、罗非鱼、沙丁鱼、汉氏棱鳀、赤鼻棱鳀、狐狸、貉子、鲽鱼、鳕鱼、鮰鱼、蟹、小龙虾、南极磷虾、兔、黄粉虫、黑水虻或柞蚕中的一种或多种。所述样品可为基因组DNA模板。
[0034]本申请中，所述猪、牛、羊、鸡、鸭、虾、巴沙鱼、罗非鱼、沙丁鱼、汉氏棱鳀、赤鼻棱鳀、狐狸、貉子、鲽鱼、鳕鱼、鮰鱼、蟹、小龙虾、南极磷虾和兔可为
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20℃冷冻保存样品。
[0035]本申请中，所述昆虫为黄粉虫、黑水虻或柞蚕。
[0036]上述的方法中，，所述体外核酸扩增的反应条件为93
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97℃预变性5min；92
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96℃变性30sec，55
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65℃退火30sec，7本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.鉴定或辅助鉴定动物源饲料原料中昆虫原料成分来源的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物包括特异于黄粉虫的引物对A、特异于黑水虻的引物对B和特异于柞蚕的引物对C这三种引物对中的三种、两种或一种；所述引物对A由A
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F和A
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R组成，所述A
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F是核苷酸序列为SEQ ID No.1的单链DNA分子，A
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R是核苷酸序列为SEQ ID No.2的单链DNA分子；所述引物对B由B
‑
F和B
‑
R组成，所述B
‑
F是核苷酸序列为SEQ ID No.3的单链DNA分子，B
‑
R是核苷酸序列为SEQ ID No.4的单链DNA分子；所述引物对C由C
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F和C
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R组成，所述C
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F是核苷酸序列为SEQ ID No.5的单链DNA分子，C
‑
R是核苷酸序列为SEQ ID No.6的单链DNA分子。2.鉴定或辅助鉴定动物源饲料原料中昆虫原料成分来源的生物材料，其特征在于，所述生物材料包括下述任一种：D1)含有权利要求1所述引物组合物的体外核酸扩增试剂；D2)含有权利要求1所述引物组合物或D1)所述体外核酸扩增试剂的试剂盒；D3)含有权利要求1所述引物组合物、D1)所述体外核酸扩增试剂或D2)所述试剂盒的检测仪器。3.权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：周志刚，杨雅麟，孟德龙，杜东东，赵雅洁，药园园，冉超，张震，
申请(专利权)人：中国农业科学院饲料研究所，
类型：发明
国别省市：