本发明专利技术提供了一种基于SSR标记的紫罗兰指纹图谱、构建方法及其应用，涉及植物品种鉴定技术领域。本发明专利技术提供了一种紫罗兰品种指纹图谱的构建方法，利用筛选获得的8对SSR标记引物作为构建紫罗兰指纹图谱的核心引物，在同一迁移位置，分别用“1”和“0”标记有无扩增片段，构建了37个紫罗兰品种的指纹图谱。8对引物的特异性条带组合作为一个品种的DNA指纹，可用于鉴别不同品种。本发明专利技术提供的紫罗兰指纹图谱为从国内外紫罗兰品种种质资源中筛选出有价值的育种材料提供了科学依据，减少育种盲目性，提高了紫罗兰育种效率，为新品种知识产权的保护和品种鉴定、紫罗兰创新育种提供了依据。紫罗兰创新育种提供了依据。紫罗兰创新育种提供了依据。
【技术实现步骤摘要】
一种基于SSR标记的紫罗兰指纹图谱、构建方法及其应用
[0001]本专利技术涉及植物品种鉴定
，具体涉及一种基于SSR标记的紫罗兰指纹图谱、构建方法及其应用。
技术介绍
[0002]SSRs(简单重复序列)，也称为微卫星，是发生在编码区和非编码区的串联重复DNA基序。研究发现，SSR普遍存在于基因组中，重复单位为1～6nt。SSR分子标记具有数量多、多态性高、等位变异多、共显性、成本低、易于PCR检测等优点，在遗传分析中得到广泛应用，如群体结构和遗传多样性分析、QTL定位、标记辅助选择育种、DNA指纹图谱构建等。
[0003]紫罗兰(Matthiola incana(L.)R.Br.)是十字花科紫罗兰属植物，原产于欧洲大陆地中海沿岸，是欧洲名花之一；紫罗兰花色丰富、花量大、花期长、株型多样，既可以满足庭院、道路等室外栽种，亦可满足室内盆栽观赏应用场景多样；其优良的抗寒性使之成为冷凉季节为数不多的能够开花的观赏植物。目前，国外已选育出数百个不同类型的园艺栽培种，主要集中在株型(高、中、低)、花色(白、黄、橙、粉、红、紫等)、花型(单瓣、双瓣、叠瓣)等性状方面；国内的紫罗兰育种水平有限，高端品种都依赖进口，我国引进的各类紫罗兰品种达数十种，然而尚无统一规范的品种鉴定标准，产品以次充好，品种混淆的现象普遍存在。为促进适应市场需求的品种选育、鉴定和推广，势必要求建立与之相适应的紫罗兰品种鉴定标准。因此，开展紫罗兰品种鉴定工作对于种质资源鉴评、种质创新利用以及商品花质量监督和市场规范等方面具有重要意义。目前，在国内还未见基于SSR分子标记对紫罗兰品种进行鉴定的相关报道。
技术实现思路
[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种基于SSR标记的紫罗兰指纹图谱及构建方法，首次实现了对紫罗兰品种的鉴定，为从国内外紫罗兰品种种质资源中筛选出有价值的育种材料提供了科学依据。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术提供了以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种用于鉴定紫罗兰的SSR标记引物组，所述引物组包括8对特异性引物对，所述引物对的核苷酸序列分别如SEQ IDNO.1～SEQ ID NO.16所示。
[0007]本专利技术提供了一种紫罗兰品种指纹图谱的构建方法，所述构建方法包括如下步骤：
[0008]利用引物组对紫罗兰各品种DNA进行PCR扩增，对所得产物进行电泳检测后即可获得所述紫罗兰品种指纹图谱。
[0009]优选的，所述引物组包括8对特异性引物对，所述引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.16所示。
[0010]优选的，所述紫罗兰品种包括：种源为日本泷井的和谐深玫红、和谐浅玫瑰花、和谐淡紫、和谐紫、圣诞杏、圣诞紫、圣诞深红、圣诞白、贵族白；种源为日本坂田的辉煌白、辉
煌粉、辉煌桃粉、辉煌玫瑰红、辉煌紫、辉煌淡紫、麦萌浅粉、麦萌白、麦萌紫、麦萌玫红、麦萌红；种源为美国泛美的卡兹杏色、卡兹红宝石、卡兹白色、铁系蓝色、铁杏色、铁系淡黄樱草、铁系宫殿紫、佳酿白、佳酿玫红、佳酿紫、彩虹方糖；种源为美国的草莓冰糕、紫罗兰紫、紫罗兰深玫红、紫罗兰玫红、紫罗兰桃红、紫罗兰乳白。
[0011]优选的，所述PCR扩增的反应体系包括：50ng/μL DNA模板2μL、10ng/μL上游引物0.5μL、10ng/μL下游引物0.5μL、PCRMasterMix5μL、加ddH2O至10μL。
[0012]优选的，所述PCR扩增的反应程序为：94℃5min；94℃30s、60℃30s、72℃30s，9个循环，每个循环退火温度递减0.5℃；94℃30s、55℃30s、72℃30s，30个循环；72℃10min。
[0013]优选的，所述电泳检测后统计SSR扩增条带，在相同迁移位置上，将有条带的记为“1”，无条带的记为“0”，形成各自的数据矩阵即为所述紫罗兰品种指纹图谱。
[0014]本专利技术还提供了上述的引物组或上述的构建方法在紫罗兰品种鉴定中的应用。
[0015]本专利技术还提供了一种紫罗兰品种的鉴定方法，所述鉴定方法包括如下步骤：
[0016]提取待检紫罗兰的基因组DNA，以上述的引物组对所述基因组DNA进行PCR扩增，所得PCR扩增产物进行电泳检测；
[0017]将所得电泳检测结果与利用上述构建方法构建得到的指纹图谱进行对照即可实现待检紫罗兰的品种鉴定。
[0018]优选的，所述电泳检测结果为：电泳检测后统计SSR扩增条带，在相同迁移位置上，将有条带的记为“1”，无条带的记为“0”形成的数据矩阵。
[0019]本专利技术的有益效果：
[0020]本专利技术提供了一种紫罗兰品种指纹图谱的构建方法，利用筛选获得的8对SSR标记引物作为构建紫罗兰指纹图谱的核心引物，在同一迁移位置，分别用“1”和“0”标记有无扩增片段，构建了37个紫罗兰品种的指纹图谱。8对引物的特异性条带组合作为一个品种的DNA指纹，可用于鉴别不同品种。本专利技术提供的紫罗兰指纹图谱为从国内外紫罗兰品种种质资源中筛选出有价值的育种材料提供了科学依据，减少育种盲目性，提高了紫罗兰育种效率，为新品种知识产权的保护和品种鉴定、紫罗兰创新育种提供了依据。
附图说明
[0021]图1为选用的22对多态性引物的电泳效果。
具体实施方式
[0022]本专利技术提供了一种用于鉴定紫罗兰的SSR标记引物组，所述引物组包括8对特异性引物对，所述引物对的核苷酸序列分别如SEQ IDNO.1～SEQ ID NO.16所示。
[0023]本专利技术中，所述SSR标记引物组来源于开发的紫罗兰全基因组SSR引物的序列；所述引物组优选的由广州天一辉远基因科技有限公司合成。本专利技术筛选出的8对引物组扩增条带清晰、多态性高，所述引物组序列信息具体如下表1所示：
[0024]表1紫罗兰SSR标记引物组
[0025][0026]本专利技术利用300份SSR引物对6份紫罗兰DNA进行扩增，筛选出一系列多态性引物，从中选取了位于7号染色体上的22对条带清晰、多态性高的SSR引物用于全部37份紫罗兰材料的分析，对获得的多态性基因座进行分析得到上述8对引物可以区分37种紫罗兰材料，因此，筛选获得8对SSR标记的引物被用作构建指纹图谱的核心引物，8对引物的特异性条带组合作为一个品种的DNA指纹，可用于鉴别不同品种。
[0027]本专利技术提供了上述紫罗兰品种指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：
[0028]利用上述的引物组对紫罗兰各品种DNA进行PCR扩增，对所得产物进行电泳检测后即可获得所述紫罗兰品种指纹图谱。
[0029]本专利技术中，所述引物组包括8对特异性引物对，所述引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.16所示。本专利技术中，所述紫罗兰品种及来源如下表2：
[0030]表2紫罗兰品种及来源
[0031][0032]本专利技术中，所述PCR扩增的反应体系优选的包括：50ng/μL DNA模板2μ本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于鉴定紫罗兰的SSR标记引物组，其特征在于，所述引物组包括8对特异性引物对，所述引物对的核苷酸序列分别如SEQ IDNO.1～SEQ ID NO.16所示。2.一种紫罗兰品种指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：利用引物组对紫罗兰各品种DNA进行PCR扩增，对所得产物进行电泳检测后即可获得所述紫罗兰品种指纹图谱。3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述引物组包括8对特异性引物对，所述引物对的核苷酸序列分别如SEQ IDNO.1～SEQ ID NO.16所示。4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述紫罗兰品种包括：种源为日本泷井的和谐深玫红、和谐浅玫瑰花、和谐淡紫、和谐紫、圣诞杏、圣诞紫、圣诞深红、圣诞白、贵族白；种源为日本坂田的辉煌白、辉煌粉、辉煌桃粉、辉煌玫瑰红、辉煌紫、辉煌淡紫、麦萌浅粉、麦萌白、麦萌紫、麦萌玫红、麦萌红；种源为美国泛美的卡兹杏色、卡兹红宝石、卡兹白色、铁系蓝色、铁杏色、铁系淡黄樱草、铁系宫殿紫、佳酿白、佳酿玫红、佳酿紫、彩虹方糖；种源为美国的草莓冰糕、紫罗兰紫、紫罗兰深玫红、紫罗兰玫红、紫罗兰桃红、紫罗兰乳白。5.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系包括：50ng/μLDNA模板2μL、10ng/μL上游引物0.5μL、10ng...
【专利技术属性】
技术研发人员：谭晨，陈道宗，张海梅，陈海东，沈文杰，刘镒，
申请(专利权)人：赣南师范大学，
类型：发明
国别省市：
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