本发明专利技术公开了一种与猕猴桃主干直径QTL连锁的分子标记及应用，涉及分子生物学及遗传育种技术领域。所述分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；在所述分子标记的199bp存在一个SNP位点，为A或G。本发明专利技术在猕猴桃中定位了与猕猴桃主干直径连锁的QTL，提供了一种与猕猴桃主干直径QTL紧密连锁的分子标记。在常规育种方法中，猕猴桃树体生长性状在苗期很难判断，并且准确度和育种效率较低，通过检测上述与猕猴桃主干直径QTL连锁的分子标记，即可预测猕猴桃植株的主干直径性状，进而进行早期筛选，不仅节约生产成本而且大大提高选择效率。不仅节约生产成本而且大大提高选择效率。不仅节约生产成本而且大大提高选择效率。
【技术实现步骤摘要】
一种与猕猴桃主干直径QTL连锁的分子标记及应用
[0001]本专利技术涉及分子生物学及遗传育种
，特别是涉及一种与猕猴桃主干直径QTL连锁的分子标记及应用。
技术介绍
[0002]猕猴桃(Actinidia)为猕猴桃科(Actinidiaceae)猕猴桃属(Actinidia Lindl.)雌雄异株多年生藤本植物，共有54个种和21个变种，是20世纪野生果树人工驯化栽培最有成就的四大果树之一。品种是产业发展的“芯片”，猕猴桃树体的主干直径与树势强弱密切相关，是培育优良品种的基础，也是影响果实生长发育至关重要的因素。此外，树势强壮的植株其综合抗性较强，更便于后期管理，从而大大降低种植风险和投入成本。
[0003]猕猴桃育种方法从传统野生直接选种逐渐转向杂交育种，在杂交育种过程中，从杂交分离后代中挑选优良的重组基因型是其关键步骤。传统依靠表型选择的育种方法耗时费力并且难度大，培育一个新品种需花费10～15年时间，并且多数表型性状是易受环境影响的数量性状，表现不稳定，降低了选育的准确度。随着PCR技术和现代测序技术的发展，产生了分子标记辅助选择(marker
‑
assisted selection，MAS)育种技术，由于该方法是基于基因型而不是表现型来选择育种目标的性状，受到广大育种学家及遗传学家的青睐。在育种工作中采用定向杂交育种与分子辅助育种相结合的方法，将分子标记与性状进行关联分析，从而快速筛选出具有特定优良性状的品种。标记辅助育种的关键是找到和表型连锁的标记，构建遗传连锁图谱(genetic linkage map)并进行数量性状位点(quantitative trait locus，QTL)定位，可有效建立起标记与表型之间的连锁关系，是实施MAS的有效途径。
[0004]由于传统育种方法的局限性，难以在猕猴桃苗期进行选育，结合QTL定位区间信息，开发出与树体主干直径QTL连锁的分子标记，有利于提高育种效率，也为猕猴桃定植后的栽培管理和综合抗性提供有力保障。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的是提供一种与猕猴桃主干直径QTL连锁的分子标记及应用，以解决上述现有技术存在的问题，本专利技术提供的分子标记与猕猴桃主干直径QTL紧密连锁，可用于预测猕猴桃植株的主干直径性状。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0007]本专利技术提供一种与猕猴桃主干直径QTL连锁的分子标记，所述分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述分子标记的199bp存在一个SNP位点，为A或G。
[0008]进一步地，所述SNP位点的基因型为AA或AG。
[0009]进一步地，所述SNP位点的基因型为AA时，猕猴桃植株的主干直径大于AG。
[0010]本专利技术还提供一种利用上述的分子标记预测猕猴桃植株主干直径的方法，包括以下步骤：
[0011](1)获取待预测猕猴桃植株的基因组DNA；
[0012](2)利用如SEQ ID NO.2
‑
3所示的引物对，对所述基因组DNA进行PCR扩增，得到扩增产物，之后测序获得所述扩增产物199bp的基因型，当基因型为AA时，猕猴桃植株的主干直径大于AG。
[0013]进一步地，在步骤(1)中，所述PCR扩增的反应体系包括：Plus PCR Master Mix(With Dye)25μL，正向和反向引物各2μL，基因组DNA模板3μL，ddH2O补足至50μL。
[0014]进一步地，在步骤(1)中，所述PCR扩增的反应程序为：98℃3min；98℃10sec，55℃20sec，72℃30sec；72℃5min。
[0015]本专利技术还提供一种预测猕猴桃植株主干直径的试剂盒，包含如SEQ ID NO.2
‑
3所示的引物对。
[0016]本专利技术还提供上述的分子标记或试剂盒在猕猴桃育种中的应用。
[0017]进一步地，所述应用为预测猕猴桃植株的主干直径。
[0018]本专利技术公开了以下技术效果：
[0019]本专利技术在猕猴桃中定位了与猕猴桃主干直径连锁的QTL。在常规育种方法中，猕猴桃树体生长性状在苗期很难判断，并且准确度和育种效率较低，而通过检测与性状连锁的分子标记，不仅节约生产成本而且大大提高选择效率。本专利技术中猕猴桃主干直径的QTL位点位置明确，分子标记位点的检测方法方便快捷，不受气候、环境等影响。通过检测与性状连锁的分子标记，即可预测猕猴桃植株的主干直径性状，进而进行早期筛选。
附图说明
[0020]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0021]图1为中华猕猴桃杂交群体遗传图谱；
[0022]图2为173个单株的主干直径(即主干粗)检测结果；***表示P<0.001。
具体实施方式
[0023]现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
[0024]应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
[0025]除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所
有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
[0026]在不背离本专利技术的范围或精神的情况下，可对本专利技术说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本专利技术的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本专利技术说明书和实施例仅是示例性的。
[0027]关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
[0028]实施例1
[0029]一、方法
[0030]1.以中华猕猴桃“红阳”为母本，“博山碧玉”配套雄株为父本杂交得到F1代，从中选取173个F1代单株作为研究对象。
[0031]2.取杂交群体173个单株及杂交亲本的新鲜嫩叶，经液氮速冻后采用SDS方法进行基因组DNA提取，并检测DNA质量。
[0032]3.质检合格的基因组DNA用酶随本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种与猕猴桃主干直径QTL连锁的分子标记，其特征在于，所述分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述分子标记的199bp存在一个SNP位点，为A或G。2.根据权利要求1所述的分子标记，其特征在于，所述SNP位点的基因型为AA或AG。3.根据权利要求2所述的分子标记，其特征在于，所述SNP位点的基因型为AA时，猕猴桃植株的主干直径大于AG。4.一种利用权利要求1
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3任一项所述的分子标记预测猕猴桃植株主干直径的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)获取待预测猕猴桃植株的基因组DNA；(2)利用如SEQ ID NO.2
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3所示的引物对，对所述基因组DNA进行PCR扩增，得到扩增产物，之后测序获得所述扩增产物199bp的基因型，当基因型为AA时，猕猴桃植株的主干直径大于AG。5.根据权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：齐秀娟，王然，李思凯，方金豹，林苗苗，孙雷明，顾红，李玉阔，
申请(专利权)人：中国农业科学院郑州果树研究所，
类型：发明
国别省市：
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