一种用于鉴定番茄柱头颜色的dCAPS标记引物及其鉴定方法技术

本发明专利技术提供了一种用于鉴定番茄柱头颜色的dCAPS标记引物，包括dCAPS上游引物和dCAPS下游引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:1

【技术实现步骤摘要】
一种用于鉴定番茄柱头颜色的dCAPS标记引物及其鉴定方法


[0001]本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种用于鉴定番茄柱头颜色的dCAPS标记引物及其鉴定方法。

技术介绍

[0002]番茄是目前世界上栽培和消费最广泛的蔬菜作物，具有明显的杂种优势，柱头颜色一般为绿色。柱头是雌蕊的重要组成部分，接受花粉，对番茄授粉受精和种子、果实发育都有重要的意义。对柱头颜色进行快速筛选，可以大大节约杂交育种过程中的人力和物力。

技术实现思路

[0003]本专利技术所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种用于鉴定番茄柱头颜色的dCAPS标记引物及其鉴定方法，该dCAPS标记引物作为番茄育种中优良的标记性状，用于杂交子代的选育，该性状的应用可以大大节约杂交育种过程中的人力和物力。
[0004]为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种用于鉴定番茄柱头颜色的dCAPS标记引物，所述dCAPS标记引物包括dCAPS上游引物和dCAPS下游引物，所述dCAPS上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述dCAPS下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
[0005]本专利技术还提供了上述的用于鉴定番茄柱头颜色的dCAPS标记引物鉴定番茄柱头颜色的方法，该方法为：
[0006]S1、提取待测番茄的基因组DNA；
[0007]S2、用dCAPS上游引物和dCAPS下游引物对S1中提取的待测样品的基因组DNA进行PCR扩增反应，得到PCR产物；r/>[0008]所述PCR扩增的体系为：待测番茄样品的基因组DNA 1μL、dCAPS上游引物0.5μL、dCAPS下游引物0.5μL、5μL 2
×
Taq Master Mix、ddH2O补足至10μL；
[0009]所述PCR扩增的反应程序为：94℃预变性3min；94℃变性45s，55℃退火30s；72℃延伸30s，30个循环；72℃延伸7min；4℃保存；
[0010]S3、取3μL的S2中得到的PCR产物进行1.5％琼脂糖凝胶电泳检测，然后对S2中得到的PCR产物利用BseXI内切酶在温度为65℃的条件下，酶切反应30min，得到酶切产物；
[0011]所述酶切反应体系为：PCR产物7μL，10
×
BseXI buffer 1μL，BseXI酶0.2μL，ddH2O补足至10μL；
[0012]S4、将S3中得到的酶切产物进行12％聚丙烯酰胺凝胶电泳，在功率为20W的条件下电泳1.5h，电泳结束后，进行银染和显影观察酶切检测结果；结果判断：
[0013]酶切检测结果为105bp单一条带，则为黄柱头番茄单株；
[0014]酶切检测结果为68bp和37bp两条带，则为纯合绿色柱头番茄单株；
[0015]酶切检测结果为105bp、68bp和37bp三条带，则为杂合绿柱头番茄单株。
[0016]优选地，S2中所述PCR产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳检测结果指示的条带中，纯合
绿柱头番茄单株PCR结果对应的条带的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；黄色柱头番茄单株PCR结果对应的条带的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
[0017]优选地，S4中所述酶切检测结果中37bp条带的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；68bp条带的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；105bp条带的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示。
[0018]本专利技术与现有技术相比具有以下优点：
[0019]本专利技术的dCAPS分子标记引物适用于番茄柱头颜色种质资源的遗传评价、种质鉴定及分子标记辅助育种研究，重复性好、可靠性高。为培育出新型柱头颜色的番茄新品种提供行之有效的鉴定方法，从而增加番茄遗传多样性和有利于番茄杂交子代鉴定的形态标记，同时本专利技术为番茄外观形态种质资源的遗传评价提供新的依据。
[0020]下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步详细说明。
附图说明
[0021]图1是本专利技术实施例1的番茄绿色柱头和黄色柱头的图。
[0022]图2是本专利技术实施例1的dCAPS分子标记在待检测番茄材料中的检测结果图。
具体实施方式
[0023]实施例1
[0024]本实施例的用于鉴定番茄柱头颜色的dCAPS标记引物，所述dCAPS标记引物包括dCAPS上游引物和dCAPS下游引物，所述dCAPS上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述dCAPS下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
[0025]本实施例还提供了上述的用于鉴定番茄柱头颜色的dCAPS标记引物鉴定番茄柱头颜色的方法，该方法为：
[0026]S1、提取待测番茄的基因组DNA；
[0027]S2、用dCAPS上游引物和dCAPS下游引物对S1中提取的待测样品的基因组DNA进行PCR扩增反应，得到PCR产物；
[0028]所述PCR扩增的体系为：待测番茄样品的基因组DNA 1μL、dCAPS上游引物0.5μL、dCAPS下游引物0.5μL、5μL 2
×
Taq Master Mix、ddH2O补足至10μL；
[0029]所述PCR扩增的反应程序为：94℃预变性3min；94℃变性45s，55℃退火30s；72℃延伸30s，30个循环；72℃延伸7min；4℃保存；
[0030]PCR产物1.5％琼脂糖凝胶电泳检测结果指示的条带中，纯合绿柱头番茄单株PCR结果对应的条带的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；黄色柱头番茄单株PCR结果对应的条带的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；
[0031]S3、取3μL的S2中得到的PCR产物进行1.5％琼脂糖凝胶电泳检测，然后对S2中得到的PCR产物利用内切酶BseXI在温度为65℃的条件下，酶切反应30min，得到酶切产物；
[0032]所述酶切反应体系为：PCR产物7μL，10
×
BseXI buffer 1μL，BseXI酶0.2μL，ddH2O补足至10μL；
[0033]S4、将S3中得到的酶切产物进行12％聚丙烯酰胺凝胶电泳，在功率为20W的条件下电泳1.5h，电泳结束后，进行银染和显影观察酶切检测结果；结果判断：
[0034]酶切检测结果为105bp单一的条带，则为黄柱头番茄单株；所述
[0035]酶切检测结果为68bp和37bp两条带，则为纯合绿色柱头番茄单株；
[0036]酶切检测结果为105bp、68bp和37bp三条带，则为杂合绿柱头番茄单株；
[0037]其中37bp条带的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；
[0038]68bp条带的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；
[0039]105bp条带的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示。
[0040]本实施例中具体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于鉴定番茄柱头颜色的dCAPS标记引物，其特征在于，所述dCAPS标记引物包括dCAPS上游引物和dCAPS下游引物，所述dCAPS上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述dCAPS下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。2.一种如权利要求1所述的用于鉴定番茄柱头颜色的dCAPS标记引物鉴定番茄柱头颜色的方法，其特征在于，该方法为：S1、提取待测番茄的基因组DNA；S2、用dCAPS上游引物和dCAPS下游引物对S1中提取的待测样品的基因组DNA进行PCR扩增反应，得到PCR产物；所述PCR扩增的体系为：待测番茄样品的基因组DNA 1μL、dCAPS上游引物0.5μL、dCAPS下游引物0.5μL、5μL 2
×
Taq Master Mix、ddH2O补足至10μL；所述PCR扩增的反应程序为：94℃预变性3min；94℃变性45s，55℃退火30s；72℃延伸30s，30个循环；72℃延伸7min；4℃保存；S3、取3μL的S2中得到的PCR产物进行1.5％琼脂糖凝胶电泳检测，然后对S2中得到的PCR产物利用内切酶BseXI在温度为65℃的条件下，酶切反应...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁燕，黎玉顺，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：