细菌外膜囊泡在制备调节肠道稳态产品中的用途制造技术

本发明专利技术涉及医药领域，提供细菌外膜囊泡在制备调节肠道稳态产品中的用途。本发明专利技术调节肠道稳态产品能上调有益微生物群、避免肠道机会性病原体大量繁殖；转移到派氏结激活黏膜免疫球蛋白A反应，调节肠道免疫稳态；进入肠上皮细胞刺激紧密连接和粘液的表达来维持肠屏障的完整性，以此逆转肠道生态紊乱。所述调节肠道稳态产品通过降低病原体丰度、维持免疫稳态和增强肠上皮紧密连接所构成的肠道稳态改善葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎症状和病理表现。所述调节肠道稳态产品还通过维持有益的肠道微生物结构克服肿瘤免疫治疗中对PD

【技术实现步骤摘要】
细菌外膜囊泡在制备调节肠道稳态产品中的用途


[0001]本专利技术涉及医药领域，特别是涉及细菌外膜囊泡在制备调节肠道稳态产品中的用途。

技术介绍

[0002]肠道微生物群已成为维持肠道和全身稳态的关键因素。在肠道生态系统中，由于存在上皮屏障，微生物与宿主通讯很少通过直接的细胞
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细胞接触来介导。大量研究表明，细菌代谢物可以介导微生物与宿主的相互作用。例如，梭菌产生的丁酸盐可刺激结肠调节性T细胞，从而抑制宿主炎症反应。肠道微生物组修饰的胆汁酸已被证明能够调节肝脏肿瘤中自然杀伤T细胞的积累。毫无疑问，肠道微生物群与宿主之间错综复杂的串扰是多向和互惠的，这意味细菌分泌的具有最佳特征的衍生物可能参与了它们的相互作用。革兰氏阴性菌在生长过程中通常会释放外膜囊泡(OMV)。OMV是一种双层膜纳米结构，大小从20到400nm不等，含有核酸、蛋白质、酶和脂多糖等多种亲本成分。因为具备这些特性，OMV可能在微生物
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微生物和宿主
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微生物相互作用中发挥关键作用。最近的研究强调了由致病菌和工程共生细菌产生的OMV在穿越宿主屏障后引发的免疫刺激反应。尽管OMV的生物功能扩展到运输活性物质和防御外膜作用的压力因素，例如噬菌体捕食和抗菌剂的入侵，但其是否可以介导免疫系统单方面防御以外的其他宿主反应仍然知之甚少。人们普遍认为，长期进化促进了肠道微生物群与宿主的先进共生关系。然而，尚未有明确证据表明OMV可以成为有效调节肠道稳态的细胞外机制。因此，有必要提供一种共生细菌衍生的OMV在调节肠道微生物群、粘膜适应性免疫和物理化学屏障来治疗肠道及肠道外疾病的用途。

技术实现思路

[0003]鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供细菌外膜囊泡在制备调节肠道稳态产品中的用途，所述用途用于修复肠菌平衡、维持免疫稳态和增强肠道紧密连接所构成的肠道稳态，解决现有技术中目前利用肠道微生物群缓解结肠炎使用活细菌移植，以及尚未有通过维持肠道稳态来增强针对结直肠癌的抗PD
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1免疫疗法的产品的问题。
[0004]为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供细菌外膜囊泡在制备调节肠道稳态产品中的用途。
[0005]优选地，所述调节肠道稳态产品为治疗肠炎产品或肿瘤治疗增强剂。
[0006]优选地，所述细菌外膜囊泡为通过革兰氏阴性菌制备得到。
[0007]本专利技术还提供一种调节肠道稳态的药物组合物，所述产品包含细菌外膜囊泡以及药学上可接受的载体或辅料。
[0008]一些具体实施方式中，所述细菌外膜囊泡为来自嗜黏蛋白阿克曼菌、巨单胞菌、考拉杆菌、拟杆菌、脱硫弧菌、普氏栖粪杆菌中的一种或多种产生的细胞外膜囊泡。
[0009]本专利技术还提供细菌外膜囊泡在制备以下任一产品中的用途：
[0010]1)增加肠道益生菌或共生细菌的相对丰度的产品；
[0011]2)降低导致肠道微生物群生态失调的细菌的相对丰度的产品；
[0012]3)促进益生菌的增殖的产品；
[0013]4)引发粘膜免疫调节反应的产品；
[0014]5)修复肠上皮物理化学屏障的产品；
[0015]6)减轻肠道生态紊乱表现的产品。
[0016]如上所述，本专利技术的细菌外膜囊泡在制备调节肠道稳态产品中的用途，具有以下有益效果：
[0017]1.本专利技术提供细菌外膜囊泡的用途能上调有益微生物群、避免肠道机会性病原体大量繁殖；
[0018]转移到派氏结激活黏膜免疫球蛋白A反应，调节肠道免疫稳态；进入肠上皮细胞刺激紧密连接和粘液的表达来维持肠屏障的完整性，以此逆转肠道生态紊乱。
[0019]2.本专利技术提供细菌外膜囊泡的用途通过肠菌平衡修复、免疫稳态维持和紧密连接增强所构成的肠道稳态改善葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎的症状和病理表现；
[0020]3.本专利技术提供细菌外膜囊泡的用途通过维持有益的肠道微生物结构可以克服肿瘤免疫治疗中对PD
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1阻断的耐药性。
附图说明
[0021]图1为肠道微生物群的调节。a
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e肠道微生物群的16S核糖体RNA基因测序分析：DSS处理的小鼠每天用含有20μg总蛋白的100μl Akk OMV悬浮液灌胃5天，然后安乐死取样。用磷酸盐缓冲盐水(PBS)处理的健康小鼠和DSS小鼠分别用作对照；a稀疏曲线(上图)和香农曲线(下图)；b细菌属和c拟杆菌属的物种分布；d产酸拟杆菌(B.acidifaciens)和e多形拟杆菌(B.thetaiotaomicron)的相对丰度；f，g Akk OMV和拟杆菌属物种之间的相互作用:将50μl对数期细菌溶液和100μl Akk OMV悬浮液再1ml培养基中在37℃下共同孵育。用PBS培养的细菌用作对照；f拟杆菌孵育指定时间点后的3D共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)图像和流式细胞术直方图，比例尺：25μm；g通过记录600nm处的OD值来测量细菌生长曲线，数据是平均值
±
平均值的标准误差(SEM)；使用t检验或双向ANOVA检验评估显著性，给出p值，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。
[0022]图2为黏膜免疫反应的调节。a IVIS图像的小鼠派氏结(PP)(上图)和肠系膜淋巴结(MLN)(下图)。在肠内注射(将PP定位的肠段两端绑住)25μl Cy5.5标记的Akk OMV(0.1mg/ml)或PBS后2和4小时观察PP和MLN中的Akk OMV富集情况；与0.1mg/ml Akk OMV或PBS在37℃下孵育24小时后，b骨髓来源树突状状细胞(BMDC)的CLSM图像；c流式细胞术分析(左图)BMDC的CD80+百分比(右图)，Cy5.5标记的OMV用于CLSM和流式细胞术测量，比例尺：10μm；d
‑
i每天给小鼠口服管饲含有20μg总蛋白或PBS的100μlAkk OMV悬浮液5天后，肠道紊乱小鼠的肠道粘膜免疫反应；d PP中CD80+DC的百分比；e PP中B细胞(B220+CD138
‑
)和浆细胞(B220
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CD138+)的代表性流式细胞仪散点图(左图)以及B细胞百分比(右图)；f PP中CD69+B细胞和IgA+浆细胞的定量分析；g肠道中的IgA浓度；h流式细胞仪直方图和IgA+粪便细菌的定量，裸细菌用作对照；i定量分析MLN中IFN
‑
γ+CD4+T细胞、IL
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4+CD4+T细胞、IL
‑
17+CD4+T细胞，以及IL
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4+/IFN
‑
γ+CD4+T细胞和FOXP3+CD25+/IL
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17+CD4+T细胞；数据是平均值
±
SEM，使用t检验评估显着性，给出p值，*p<0.05，**p<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.细菌外膜囊泡在制备调节肠道稳态产品中的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述调节肠道稳态产品为治疗肠炎产品或肿瘤治疗增强剂。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述肠炎选自放射性肠炎、溃疡性结肠炎、克罗恩病、免疫检查点抑制剂相关性肠炎、抗生素相关性肠炎中的一种或多种。4.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述肿瘤选自乳腺癌、胰腺癌、小肠癌、结肠癌、直肠癌、肺癌、头颈癌、卵巢癌、肝细胞癌、食道癌、下咽癌、鼻咽癌、喉癌、骨髓瘤细胞癌、膀胱癌、胆管细胞癌、透明细胞肾癌、前列腺癌、神经内分泌肿瘤、致癌性骨软化症、肉瘤、原发性未知癌、胸腺癌、胶质瘤、神经胶质瘤、星型细胞瘤、子宫颈癌、前列腺癌、白血病、骨癌、脑癌、支气管癌、室管膜瘤癌、成视网膜瘤癌、胃癌、胃肠道癌、黑素瘤癌、肾癌、淋巴瘤癌、间皮瘤癌、口腔癌、口咽癌、卵巢癌、甲状腺癌、垂体癌、肾癌、唾液腺癌、肉瘤癌和皮肤癌中的一种或多种。5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述细菌外膜囊泡为通过革兰氏阴性菌制备得到。6.根据权利要求5所述的用途，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘尽尧，王馨悦，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属仁济医院，
类型：发明
国别省市：