一种益生菌及其外膜囊泡在制备防治支气管哮喘制剂中的应用制造技术

本发明专利技术属于益生菌转化应用技术领域，具体涉及一种益生菌及其外膜囊泡在制备防治支气管哮喘制剂中的应用。本发明专利技术从嗜黏蛋白阿克曼菌(Akk菌)的培养上清液中经密度梯度离心、过滤、浓缩和外泌体提取试剂层析提取嗜黏蛋白阿克曼菌外膜囊泡(Akk

【技术实现步骤摘要】
一种益生菌及其外膜囊泡在制备防治支气管哮喘制剂中的应用


[0001]本专利技术属于益生菌转化应用
，具体涉及一种益生菌及其外膜囊泡在制备防治支气管哮喘制剂中的应用。

技术介绍

[0002]支气管哮喘(简称哮喘)是一种以咳嗽、胸闷、喘息和气促等呼吸道症状为主要临床表现的异质性疾病，该病反复发作且缠绵难愈。目前，吸入性糖皮质激素、β肾上腺受体激动剂、白三烯受体拮抗剂和茶碱等常用哮喘治疗药物只能控制症状，并不能预防或根治哮喘。上述药物的长期使用具有一定的副作用，导致依从性不佳，并且存在部分患者对这一些药物不敏感。因此，急需探寻防治哮喘的新制剂。
[0003]当前，生活方式、饮食、体重、环境和微生物组的改变都与过敏和哮喘等慢性炎症疾病的患病风险和严重程度有关，然而，这些因素与宿主免疫调节过程之间复杂的相互作用仍然知之甚少。人体和动物肠道内存在数量庞大的微生物群，能够调节宿主的健康和稳态。微生物群的组成和代谢产物能够激活机体黏膜组织的生物屏障功能和免疫效应功能，亦是过敏和哮喘领域的研究热点和重点。
[0004]嗜黏蛋白阿克曼菌(Akkermansiamuciniphila，Akk)是2004年首次分离提出的一种人类肠道的正常粘蛋白分解细菌，是一种革兰氏阴性、严格厌氧且定植在肠道的益生菌，约占正常人体肠道微生物群落总数的3％
‑
5％，且因其在维持宿主健康方面的综合作用备受关注，被认为是预防或治疗代谢性疾病的“下一代有益微生物”。在乳制品、保健品和药品中添加益生菌用以改善胃肠道功能、治疗消化系统疾病的做法已被人们所熟悉和广泛应用。肠道微生物细胞外膜囊泡(outermembranevesicles，OMV)是介导其与机体靶器官之间相互作用和生物信号的关键成分，可以穿过粘液层并通过循环转移到外周组织发挥作用。但关于益生菌及其外膜囊泡对哮喘疾病的预防和治疗效果尚未见报道。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术通过构建急性和慢性哮喘模型，并利用嗜黏蛋白阿克曼菌或/和嗜黏蛋白阿克曼菌外膜囊泡进行干预，通过对干预处理后小鼠相关生理特征的检测，对抑制气道和肺组织炎症、减少气道粘液分泌的以及具备免疫调节功能的作用；本专利技术提供的Akk菌及Akk
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OMV可作为现有药物的替代物或协助治疗药物，用于改善急性和慢性哮喘的药物、食品和保健品，拓宽了益生菌治疗哮喘的应用领域。
[0006]为了达到上述目的，本专利技术实施例提供了一种益生菌及其外膜囊泡在制备防治支气管哮喘制剂中的应用，所述益生菌为嗜黏蛋白阿克曼菌。
[0007]进一步的，所述嗜黏蛋白阿克曼菌为ATCCBAA
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835菌株。
[0008]进一步的，所述哮喘的类型包括：过敏性哮喘、运动性哮喘、变异性哮喘、月经性哮喘、药物性哮喘、肺源性哮喘、儿童哮喘、职业性哮喘、混合型哮喘。
[0009]进一步的，所述益生菌外膜囊泡的制备方法具体包括：
[0010]将嗜黏蛋白阿克曼菌进行传代培养活化后加入培养基中，在37℃厌氧状态下以60rpm速率摇晃4天培养后离心取上清液过滤，滤液经浓缩获得浓缩液用外泌体提取试剂提取，获取沉淀即为外膜囊泡；
[0011]所述培养基为将BHI培养基加水高温消毒、冷却后加入L
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半胱氨酸、刃天青；
[0012]所述外泌体提取试剂为ExoQuick
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TC外泌体提取试剂，用量为浓缩液的1/5；提取的条件为：4℃环境下反应12小时后，1500
×
g，4℃离心30分钟。
[0013]进一步的，所述离心过程的工艺条件为：12,000
×
g，4℃离心15分钟；所述过滤过程的工艺条件为：将上清液用0.22μm孔径的过滤器过滤；所述浓缩过程的工艺条件为：用孔径为100KD的超滤管将滤液浓缩300
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500倍。
[0014]基于同一专利技术构思的，本专利技术实施例还提供了一种防治支气管哮喘制剂，所述制剂包括嗜黏蛋白阿克曼菌、嗜黏蛋白阿克曼菌外膜囊泡中的任意一种或组合。
[0015]进一步的，所述制剂至少包含一种药学、食品学或保健品学上可接受辅料；
[0016]所述辅料为载体、赋形剂、稀释剂、润滑剂、润湿剂、乳化剂、悬浮液稳定剂、防腐剂、甜味剂以及香料中的一种或多种。
[0017]进一步的，所述制剂的剂型为注射液、口服液、胶囊剂、片剂、喷雾剂或软膏剂中的任意一种。
[0018]本专利技术提供了Akk菌及Akk
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OMV在防治急性和慢性哮喘药物中的新用途，本专利技术通过实验，验证了Akk菌及Akk
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OMV对抑制气道和肺组织炎症、减少气道粘液分泌的以及具备免疫调节功能的作用。其中抑制急性和慢性哮喘中肺泡灌洗液中气道炎症包括：Akk菌及Akk
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OMV均能减少屋尘螨和鸡卵清蛋白诱导哮喘小鼠的肺泡灌洗液中总的细胞数和嗜酸性粒细胞数目；其中减轻急性和慢性哮喘中肺组织炎症以及气道周围炎症细胞浸润包括：肺脏组织气道周围炎症细胞浸润减少，肺组织损伤减少；其中减少急性和慢性哮喘中气道粘液分泌包括杯状细胞化生导致的黏液蛋白分泌减少；其中慢性哮喘气道重构包括支气管壁增厚、基底膜假性增厚、细胞外基质地改变、粘液性肥厚、平滑肌增生肥大等。
[0019]有益效果：
[0020]本专利技术首次提出了将嗜黏蛋白阿克曼菌及其外膜囊泡应用至防治哮喘的制剂中，通过相关小鼠模型的构建、干预治疗和结果检测，可以知道嗜黏蛋白阿克曼菌及其外膜囊泡哮喘肺组织炎症中有显著效果：抑制急性和慢性哮喘中肺泡灌洗液中气道炎症；减轻急性和慢性哮喘中肺组织炎症以及气道周围炎症细胞浸润；减少急性和慢性哮喘中气道粘液分泌以及减少慢性哮喘气道重构；还可以用于其他过敏性疾病的预防和治疗，具有良好的产业化前景。
附图说明
[0021]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0022]图1为本专利技术实施例1提供的屋尘螨诱导哮急性喘小鼠灌胃Akk菌及Akk
‑
OMV后，肺
脏组织染色结果对照图；
[0023]图2为本专利技术实施例1提供的鸡卵清蛋白诱导急性哮喘小鼠灌胃Akk菌及Akk
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OMV后，肺脏组织染色结果对比图；
[0024]图3为本专利技术实施例1提供的屋尘螨、鸡卵清蛋白诱导哮急性喘小鼠灌胃Akk菌及Akk
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OMV后，肺泡灌洗液数目和细胞类型数目变化情况；
[0025]图4为本专利技术实施例提供的鸡卵清蛋白诱导慢性哮喘小鼠模型灌胃Akk菌及Akk
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OMV后，肺脏组织染色结果对照图。
具体实施方式
[0026]为了更加清楚阐本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种益生菌及其外膜囊泡在制备防治支气管哮喘制剂中的应用，其特征在于，所述益生菌为嗜黏蛋白阿克曼菌。2.根据权利要求1所述的益生菌及其外膜囊泡在制备防治支气管哮喘制剂中的应用，其特征在于，所述哮喘的类型包括：过敏性哮喘、运动性哮喘、变异性哮喘、月经性哮喘、药物性哮喘、肺源性哮喘、儿童哮喘、职业性哮喘、混合型哮喘。3.根据权利要求1所述的益生菌及其外膜囊泡在制备防治支气管哮喘制剂中的应用，其特征在于，所述益生菌外膜囊泡的制备方法具体包括：将嗜黏蛋白阿克曼菌进行传代培养活化后加入培养基中，在37℃厌氧状态下以60rpm速率摇晃4天培养后离心取上清液过滤，滤液经浓缩获得浓缩液用外泌体提取试剂提取，获取沉淀即为外膜囊泡；所述培养基为将BHI培养基加水高温消毒、冷却后加入L
‑
半胱氨酸、刃天青；所述外泌体提取试剂为ExoQuick
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TC外泌体提取试剂，用量为浓缩液的1/5；提取的条件为：4℃环境下反应12小时后，1500<...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢辉，胡新月，祝晟，王振兴，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，
类型：发明
国别省市：