一种利用光子晶体芯片和重组酶聚合酶扩增检测miRNA的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用光子晶体芯片和重组酶聚合酶扩增检测miRNA的方法，属于核酸检测领域。本发明专利技术方法包括如下步骤：制备光子晶体芯片；使用两条探针与靶标miRNA互补配对后利用SplintR ligase连接；以连接产物为模板，引入引物，在重组酶的作用下发生重组酶扩增反应；往重组酶扩增产物中加入Super GelBlue染料，滴于光子晶体芯片上，使用荧光测量装置进行检测。本发明专利技术方法具有超高的灵敏度，在最优实验条件下，该方法miRNA的检测限低至0.24aM。本发明专利技术无需对循环miRNA进行分离提取，可直接用于血清样本中循环miRNA的高通量快速定量检测。测。测。

【技术实现步骤摘要】
一种利用光子晶体芯片和重组酶聚合酶扩增检测miRNA的方法


[0001]本专利技术属于核酸检测领域，具体涉及一种利用光子晶体芯片和重组酶聚合酶扩增高通量高灵敏快速检测miRNA的方法。

技术介绍

[0002]miRNA是一种短的(约为20个碱基)非编码RNA，通过研究发现其在体内含量的改变与癌症的显现关系密切，在不同部位的肿瘤中都可观察到这一变化，被公认为治疗靶点，是一类相对较新的疾病生物标志物和诊断标记物。传统的miRNA检测方法，如RT
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PCR、微阵列、第二代测序多局限于实验室昂贵而精密的仪器、前处理复杂、耗时较长，无法实现临床应用中简单便携、灵活、快速经济的诊断要求。
[0003]临床对于癌症的诊断还是更依赖于肿瘤组织中直接取样，这种诊断方式虽然保证了准确率，但对生物的强侵入性与伤害不可逆性使它在实际临床应用领域有很多的局限性。相反，体液易于收集并且大量存在(血浆、血清、汗液、尿液)，也可以对特定病理状态进行判断，因此将血清中的循环miRNA作为癌症标记物进行诊断的方法受到广泛关注。但体液中miRNA的低含量和本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用光子晶体芯片和重组酶聚合酶扩增检测miRNA的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)制备光子晶体芯片：将微球分散液滴到聚二甲基硅烷基底上，加热至完全干燥，形成光子晶体芯片；(2)使用探针1和探针2与靶标miRNA互补配对后利用SplintR ligase连接；其中，探针1与靶标miRNA的3
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端互补，探针2与靶标miRNA的5
’
端互补，且探针2的5
’
端有磷酸化修饰；(3)以连接产物为模板，引入引物，在重组酶的作用下发生重组酶扩增反应；(4)往重组酶扩增产物中加入Super GelBlue染料，滴于光子晶体芯片上，使用荧光测量装置进行检测。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述的微球的粒径为270nm。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述的微球为羧基化修饰的二氧化硅微球、聚甲基丙烯酸甲酯微球或聚苯乙烯微球。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述的探针1和探针2根据靶标miRNA设计合成，探针1的3
’
端序列、探针2的5
’
端序列与靶标miRNA互补配对，且没有二级结构。5.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜宇昊，周翔，陈肇欣，肖峰，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：