用于检测冠状病毒的中和抗体的免疫色谱装置制造方法及图纸

本公开提供了用于检测阻断分子结合对的第一分子组分和第二分子组分结合的分析物(例如，中和抗体)的测定如侧流测定及其组分。在一些实施方式中，所公开的测定及其组分能够快速检测来自个体样品中的SARS

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测冠状病毒的中和抗体的免疫色谱装置
相关申请本申请要求2021年5月20日提交的美国申请序列号17/325,681的优先权，其要求2020年5月22日提交的美国临时申请序列号63/029,243和2020年12月11日提交的美国临时申请序列号63/124,579的优先权。上述全部申请都通过引用并入本文。


本公开涉及用于检测阻断分子结合对的第一分子组分和第二分子组分结合的分析物如中和抗体的测定。在本公开的其它方面中还提供了本文描述的测定的装置、制造和使用测定的方法、和测定的套组(试剂盒，kits)。

技术介绍

床旁(即时，Point
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of
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care)测定通常被设计以基于分析物的结构特征来检测分析物。这种测定的实例是侧流免疫测定。侧流免疫测定横跨多个行业领域(sectors)被广泛用作床旁检测，这些领域包括医疗诊断、疾病诊断、环境测试、动物健康测试、以及食品和饲料测试。大多数侧流测定采用固定化抗体作为捕获剂，其识别目标分子的独特结构(例如表位)。这种基于结构的识别在临床应用中常常导致令人不满意的灵敏度和/或特异性。因此，存在对灵敏度和特异性更好的床旁测定的需求。

技术实现思路

本申请的一个方面涉及用于检测阻断分子结合对的第一分子组分和第二分子组分结合的中和抗体的测试条。在一些实施方式中，测试条包括：(a)色谱条，具有第一末端区域和第二末端区域，其中色谱条包括第一测试区并且其中第一分子组分被固定在第一测试区内；和(b)样品结合区，包括具有第一末端区域和第二末端区域的结合垫，其中结合垫包括用检测剂标记的第二分子组分，其中色谱条的第一末端区域与结合垫的第二末端区域直接流体流动连通，并且其中(1)第一分子组分包括病毒表面多肽或其片段，而第二分子组分包括细胞表面多肽或其片段，或者(2)第一分子组分包括细胞表面多肽或其片段，而第二分子组分包括病毒表面多肽或其片段。本申请的另一方面涉及检测阻断分子结合对的第一分子组分和第二分子组分结合的中和抗体是否存在的方法，所述方法包括：(a)将样品从个体引入本申请的测试条中；和(b)分析测试条的一个或多个读出(读数，read
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out)，其中第一测试区中不存在可检测的结合表明样品中存在中和抗体，而第一测试区中存在可检测的结合表明样品中不存在中和抗体。本申请的另一方面涉及装置，其包括本申请的测试条。本申请的另一方面涉及测试套组。在一些实施方式中，测试套组包括本申请的测试条和样品收集装置。
附图说明
图1显示了具有测试区120的示例性测试条100的示意图。图2显示了示例性测试条200的示意图，测试条200包括：(a)色谱条202，其包括：(i)包括固定化的重组RBD多肽(r
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RBD)的测试区208；(ii)包括固定化的抗小鼠IgG结合剂的对照区210；和(b)包括用检测剂标记的小鼠Fc
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ACE2融合多肽(mFc
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ACE2)的结合垫216。图3显示了示例性测试条300的示意图，测试条300包括：(a)色谱条302，其包括：(i)包括固定化的重组ACE2多肽(r
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ACE2)的第一测试线308，和(ii)包括固定化的抗小鼠IgG结合剂的对照线310；和(b)包括用检测剂标记的小鼠Fc
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RBD融合多肽(mFc
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RCD)的结合垫316。图4显示了示例性测试条400的示意图，测试条400包括：(a)色谱条402，包括：(i)包括固定化的重组ACE2多肽(r
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ACE2)的第一测试线408，(ii)包括固定化的抗小鼠Ig结合剂(抗mIg)的第二测试线410，和(iii)包括固定化的抗兔IgG结合剂(抗rIgG)的对照线412；和(b)结合垫416，包括：(i)用检测剂标记的兔Fc
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RBD融合多肽(rFC
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RBD)，和(ii)小鼠抗人类Ig结合剂(小鼠抗hIg)。图5显示了示例性测试条500的示意图，测试条500包括：(a)色谱条502，其包括：(i)包括固定化的重组RBD多肽(r
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RBD)的第一测试线508，(ii)包括固定化的抗小鼠Ig结合剂(抗mIg)的第一对照线510，和(iii)包括固定化的抗兔IgG结合剂(抗rIgG)的第二对照线512；和(b)结合垫516，其包括用第一检测剂标记的兔Fc
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ACE2融合多肽(rFc
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ACE2)，和(ii)用第二检测剂标记的小鼠抗人类Ig结合剂(小鼠抗hIg)。图6显示了示例性测试条的示意图，该测试条包括：(a)硝酸纤维素膜，其包括：(i)包括固定化的ACE2多肽(ACE)的第一测试线；(ii)包括固定化的抗人类IgG结合剂(抗hIgG)的第二测试线；(iii)包括固定化的抗人类IgM结合剂(抗hIgM)的第三测试线；和(iv)包括抗兔IgG结合剂(抗rIgG)的对照线；(b)包括用RBD和兔Fc标记物标记的60nm金珠(金纳米颗粒)的结合垫；(c)被配置以接受样品的样品垫；和(d)吸收垫。图7显示了来自包括三条测试线和一条对照线的示例性测试条的结果。图8显示了来自使用一系列血浆稀释液(dilutions)运行(run)的包括单条测试线和对照线的示例性测试条的结果。图9A显示了使用小鼠血浆中的中和抗体(NAb)稀释液运行的包括测试线和对照线的示例性测试条。图9B显示了使用兔血浆中的中和抗体(NAb)稀释液运行的包括测试线和对照线的示例性测试条。图10显示了示例性测试条，其包括使用来自野生型SARS
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CoV
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2和两种变体的金纳米颗粒标记的刺突蛋白和来自COVID
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19疫苗接种者的血浆运行的测试线和对照线。虽然现在将详细描述本公开，并结合示例性实施方式进行描述，但本公开不受附图和所附权利要求中所示具体实施方式的限制。
具体实施方式
在某些方面中，本申请提供了用于检测阻断分子结合系统的分子组分结合的分析物(如中和抗体)的测定。本公开至少部分地基于专利技术人的独特视角和结果，证明了简单且快速的测定可被设计和运行，以基于分析物的功能属性(例如，相互作用阻断特性)快速(如
在15分钟或更短时间内)检测分析物。本申请的测定系统利用对其结合对应物具有高结合亲和力的非抗体分子展开竞争形式的侧流测定。这种竞争性侧流测定与经典的竞争性侧流测定的根本区别在于检测功能而不是检测分子。因此，可以设计使用分子结合系统(如分子结合对)的至少第一分子组分和第二分子组分的测定，以询问(interrogate)样品的阻断分子结合系统的相互作用和/或关联的分析物。这样的测定还可包括用于进一步表征分析物的特征。例如，在分析物是中和抗体的情况下，可设计该测定来表征抗体，例如，确定中和抗体的Ig类别。本文公开的测定具有广泛的适用性，并且可以用作床旁测定。本申请的装置尤其适用于快速检测病毒中和抗体，这样的抗体中和SARS
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.用于检测阻断分子结合对的第一分子组分和第二分子组分结合的分析物的测试条，所述测试条包括：(a)色谱条，具有第一末端区域和第二末端区域，其中所述色谱条包括第一测试区并且其中所述第一分子组分被固定在所述第一测试区内；和(b)样品结合区，包括具有第一末端区域和第二末端区域的结合垫，其中所述结合垫包括用检测剂标记的所述第二分子组分，其中所述色谱条的第一末端区域与所述结合垫的第二末端区域直接流体流动连通，并且其中(1)所述第一分子组分包括病毒表面多肽或其片段，而所述第二分子组分包括细胞表面多肽或其片段，或者(2)所述第一分子组分包括所述细胞表面多肽或其片段，而所述第二分子组分包括所述病毒表面多肽或其片段。2.权利要求1所述的测试条，其中所述分析物是抗体。3.权利要求1或2所述的测试条，其中所述病毒表面多肽包括：(1)刺突蛋白的受体结合结构域(RBD)或其片段；和/或(2)刺突蛋白的N
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端结构域(NTD)或其片段。4.权利要求1
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3中任一项所述的测试条，其中所述细胞表面多肽或其片段与蛋白标签序列融合。5.权利要求4所述的测试条，其中所述标签序列是非人类Fc区域或重组Fc区域。6.权利要求1
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5中任一项所述的测试条，其中(1)所述第一分子组分包括血管紧张肽转变酶2(ACE2)或其片段，而所述第二分子组分包括病毒刺突蛋白或其片段的RBD和/或NTD，或者(2)其中所述第一分子组分包括病毒刺突蛋白或其片段的RBD和/或NTD，而所述第二分子组分包括ACE2或其片段。7.权利要求6所述的测试条，其中所述病毒刺突蛋白来自冠状病毒。8.权利要求7所述的测试条，其中所述冠状病毒是SARS
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CoV
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2或SAR
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CoV。9.权利要求1
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8中任一项所述的测试条，其中所述检测剂包括酶。10.权利要求1
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9中任一项所述的测试条，其中所述检测剂包括检测颗粒。11.权利要求10所述的测试条，其中所述检测颗粒包括酶纳米颗粒、聚苯乙烯微球、乳胶颗粒、纳米金颗粒、胶体金颗粒、金属颗粒、磁性颗粒、荧光可检测颗粒、或半导体纳米晶体。12.权利要求1
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11中任一项所述的测试条，其中所述色谱条还包括对照区，其中对照捕获剂被固定在所述对照区内，并且其中所述对照捕获剂能够捕获标记的第二分子组分。13.权利要求12所述的测试条，其中所述标记的第二分子组分与非人类Fc区域融合并且其中所述对照捕获剂包括能够结合所述非人类Fc区域的抗非人类IgG结合剂。14.权利要求1
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13中任一项所述的测试条，其中所述色谱条还包括第二测试区，其中测试捕获剂被固定在所述第二测试区内。15.权利要求14所述的测试条，其中所述第二测试区是横跨所述色谱条，基本上垂直于流体流动方向定位的条。16.权利要求14所述的测试条，其中所述测试捕获剂是抗非人类Ig结合剂，其中所述结合垫还包括非人类抗人类Ig结合剂，并且其中所述抗非人类Ig结合剂能够结合所述非人类
抗人类Ig结合剂。17.权利要求16所述的测试条，其中所述非人类抗人类Ig结合剂用第二检测剂标记。18.权利要求1
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17中任一项所述的测试条，其中所述分子结合对不包括抗体或其片段。19.装置，其包括权利要求1
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18中任一项所述的测试条。20.测试套组，其包括权利要求1
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18中任一项所述的测试条和样品收集装置。21.检测是否存在阻断分子结合对的第一分子组分和第二分子组分结合的中和抗体的方法，所述方法包括：(a)将样品从个体引入权利要求1
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18中任一项所述的测试条中，和(b)分析所述测试条的一个或多个读出，其中所述第一测试区...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：贵州美鑫达医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：