一种检测TGF-β1的试剂盒、检测方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种检测TGF

【技术实现步骤摘要】
一种检测TGF
‑
β
1的试剂盒、检测方法及应用


[0001]本专利技术涉及体外诊断
，具体而言，涉及一种检测TGF
‑
β1的试剂盒、检测方法及应用。

技术介绍

[0002]转化生长因子是一类由多种细胞分泌的具有多重生物学效应的多肽类细胞因子，转化生长因子
‑
β1(transforming growth factorβ1,TGF
‑
β1)属于TGF
‑
β超家族，TGF
‑
β1分子量为25KD，同时含量最高，具有代表性：它是由分子量为12.5KD的两个单体分子通过二硫键连接成的二聚体，可调节细胞的增殖、分化；还在血管生成、损伤修复、免疫抑制、细胞外基质形成、纤维化和肿瘤的发生起重要作用。
[0003]目前临床检测人体TGF
‑
β1的含量，在诊断癌症病人中起着关键和双重的作用。在肿瘤早期发展阶段，TGF
‑
β1引发的是抑制行为，体现在TGF
‑
β1信号通路的核心部件的缺失和突变，同时支持肿瘤的生长、传播和免疫，表现为TGF
‑
β1受体改变及癌基因突变。人卵巢颗粒细胞、卵泡膜细胞以及各阶段的卵母细胞都能合成并分泌TGF
‑
β1，而且这些细胞表面均高表达TGF
‑
β1受体，调节卵泡发育成熟及排卵。
[0004]据相关资料报道，胃癌中TGF
‑
β1的阳性率约为65％，TGF
‑
β1的高表达与癌症的发生、发展及转移过程中起到重要作用，胃癌细胞分化程度变低，临床分期的进展以及淋巴结转移的出现，TGF
‑
β1的表达也越来越强，可作为反映胃癌生物学行为的指标。随着生物技术和药物的研究，可以通过阻止TGF
‑
β1及其受体的表达，研究新的抗肿瘤药物，有望成为新的胃癌的治疗方法。
[0005]TGF
‑
β1是参与血管重构发病机制的主要调节因子，也参与严重哮喘患者肺纤维化的发展及哮喘气道重塑，促进成纤维细胞向肌成纤维细胞分化，可能导致上皮下纤维化和哮喘气道平滑肌的增值。
[0006]目前市场上定量检测人体血样TGF
‑
β1的试剂盒大多应用酶联免疫吸附法、胶乳比浊法和免疫荧光层析法，使用化学发光方法的较少。酶联免疫吸附法的缺点在于灵敏度不够高，检测时间长，线性范围不够宽。胶乳比浊法和免疫荧光层析法可以快速检测，但准确度偏低。微孔板酶促发光法虽然灵敏度高，检测时间短，准确度高，但是也容易受体内一些物质的干扰，试剂的稳定性相对偏低。
[0007]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于提供一种检测TGF
‑
β1的试剂盒及其使用方法和应用，以提高人血样本中TGF
‑
β1的灵敏度和特异性。
[0009]本专利技术是这样实现的：
[0010]第一方面，本专利技术提供了一种检测TGF
‑
β1的试剂盒，其包括：
[0011]第一试剂：包括有抗异硫氰酸荧光素抗体联结的磁微粒；
[0012]第二试剂：包括有异硫氰酸荧光素标记的TGF
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β1抗体；以及
[0013]第三试剂：包括有吖啶类发光物标记的TGF
‑
β1抗体。
[0014]第二方面，本专利技术提供了一种TGF
‑
β1的检测方法，采用上述检测TGF
‑
β1的试剂盒，其包括以下步骤：
[0015]取待测样本和校准品加入反应管中，然后依次加入第二试剂、第三试剂，孵育后加入第一试剂，再次孵育并清洗，然后加入预激发液A和激发液B，检测其发光值
[0016]第三方面，本专利技术提供了上述检测TGF
‑
β1的试剂盒在检测TGF
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β1含量中的应用。
[0017]本专利技术具有以下有益效果：
[0018]本专利技术使用FITC与抗
‑
FITC系统，并具有磁分离和化学发光的双重优势，可以较好地避免内源性生物素在检测人体血样时的干扰，具有较高的检测灵敏度和特异性，线性范围较其它有明显的优势，检测通量大，成本低，在发光仪上可实现全自动操作。
附图说明
[0019]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0020]图1为实施例2的校准曲线图。
[0021]图2为对比例1的校准曲线图。
[0022]图3为实验例4中两种试剂的散点图。
具体实施方式
[0023]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0024]为了提高人血样本中TGF
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β1的灵敏度和特异性，本专利技术提出的TGF
‑
β1的检测试剂盒，应用FITC与抗
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FITC系统，将能够识别抗原上不同表位的TGF
‑
β1单克隆抗体1和TGF
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β1单克隆抗体2分别与FITC和吖啶酯联结，通过抗原抗体特异免疫反应后，在发光底物存在的条件下实现高灵敏度和特异性检测。
[0025]本专利技术提出的TGF
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β1检测试剂盒，包括：第一试剂：包括有抗异硫氰酸荧光素抗体联结的磁微粒；第二试剂：包括有异硫氰酸荧光素标记的TGF
‑
β1抗体；以及第三试剂：包括有吖啶类发光物标记的TGF
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β1抗体。
[0026]在本专利技术中，第二试剂中的TGF
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β1抗体和第三试剂中的TGF
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β1抗体是能够识别抗原上不同表位的两种不同的TGF
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β1抗体。上述抗体可以是单克隆抗体、多克隆抗体或抗体功能性片段，优选地，本专利技术中采用的TGF
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β1抗体为TGF
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β1单克隆抗体。
[0027]在一些实施例中，磁微粒的表面修饰有羧基、氨基和甲苯磺酰基中的其中一种基团。
[0028]在一些实施例中，磁微粒的直径为0.5
‑
5μm。
[0029]在一些实施例中，第一试剂中还包括磁微粒稀释液。
[0030]在一些实施例中，磁微粒稀释液的成分包括：1.0
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2.0wt％的牛血清，0.15mol/L的NaCl，0.20
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测TGF
‑
β1的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：第一试剂：所述第一试剂包括有抗异硫氰酸荧光素抗体联结的磁微粒；第二试剂：所述第二试剂包括有异硫氰酸荧光素标记的TGF
‑
β1抗体；以及第三试剂：所述第三试剂包括有吖啶类发光物标记的TGF
‑
β1抗体。2.根据权利要求1所述的检测TGF
‑
β1的试剂盒，其特征在于，所述磁微粒的表面修饰有羧基、氨基和甲苯磺酰基中的其中一种基团；优选地，所述磁微粒的直径为0.5
‑
5μm。3.根据权利要求2所述的检测TGF
‑
β1的试剂盒，其特征在于，所述第一试剂中还包括磁微粒稀释液；优选地，所述磁微粒稀释液的成分包括：1.0
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2.0wt％的牛血清，0.15mol/L的NaCl，0.20
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0.80wt％的酪蛋白，0.40wt％的Proclin
‑
300，0.10mol/L、pH7.6的磷酸盐缓冲液。4.根据权利要求3所述的检测TGF
‑
β1的试剂盒，其特征在于，所述第一试剂的制备方法包括：将清洗后的磁微粒与抗FITC抗体混合，然后在混合溶液中加入EDC溶液，偶联反应后进行磁分离，弃上清，洗涤后再用磁微粒稀释液稀释至所需浓度，平衡后用超声将其完全分散；优选地，所述磁微粒与抗FITC抗体的添加质量比为100
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200:15；优选地，所述偶联反应的时间为25
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30min；优选地，所述平衡的条件为：在2
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8℃下平衡22
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24h；优选地，所述第一试剂中磁微粒的浓度为0.5
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1.0mg/mL。5.根据权利要求1所述的检测TGF
‑
β1的试剂盒，其特征在于，所述第二试剂中还包括抗体稀释液；优选地，所述抗体稀释液的成分包括1.0
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2.0wt％的BSA，0.4wt％的Proclin
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300，100mmol/L的NaCl，3
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10g/L的黄原胶，1mg/mL的阻断剂HBR，0.2g/L的EDTA，0.5wt％的蛋白保护剂，0.10mol/L、pH7.6的磷酸盐缓冲液。6.根据权利要求5所述的检测TGF
‑
β1的试剂盒，其特征在于，所述第二试剂的制备方法包括：将透析后的TGF
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β1单克隆抗体加入FITC溶液中，混合均匀，在2

【专利技术属性】
技术研发人员：肖文峰，王福生，胡国茂，
申请(专利权)人：北京森美希克玛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：