同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法技术

本发明专利技术提供了同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法。同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法包括如下步骤：S1001：在设计目的基因片段PCR扩增反应引物前，选取酶切位点A、酶切位点A1、酶切位点B、酶切位点B1作为载体构建的酶切位点。目标基因片段扩增完成后，对载体和片段分开进行双酶切；本发明专利技术的同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法选用同样的限制性酶切位点，同样的引物设计方法，同样的酶切方法，连接更多的基因片段，不会因为接口处原有的酶切位点消失，出现不能被之前的同尾酶中的任意一个限制性内切酶所识别的现象。的现象。的现象。

【技术实现步骤摘要】
同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法


[0001]本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法。

技术介绍

[0002]在载体构建多基因片段连接时，通常由于载体上酶切位点或者基因片段上的酶切位点的限制，导致酶切位点不够用，而无法完成多基因片段连接到同一个载体上。目前常用的方法是通过overlapping的方法将需要连接到载体上的多个基因片段先连在一起，形成一个大基因片段，再将大基因片段连接到载体上。但这种方法通常会导致最后形成的大基因片段长度太长，从而很难连接到载体上。
[0003]同尾酶是指一对或者多个不同的限制性内切酶，这一对或者多个不同的限制性内切酶能够识别不同的限制性内切酶识别位点，但却能对其所识别的位点切出相同的粘性末端。互为同尾酶的限制性内切酶酶切后的粘性末端可以经DNA连接酶连接，但接口处原有的酶切位点消失，不能被之前的同尾酶中的任意一个限制性内切酶所识别，存在载体构建多基因片段连接时酶切位点不够用的问题。

技术实现思路

[0004]为了克服现有技术的不足，本专利技本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法，其特征在于，包括如下步骤：S1001：选取酶切位点A、酶切位点A1、酶切位点B、酶切位点B1作为载体构建的酶切位点；S1002：在设计目标基因片段的PCR扩增引物时，在正向引物上加上所述酶切位点A1、所述酶切位点A、所述酶切位点B，反向引物上加上所述酶切位点B1；S1003：PCR扩增所述目标基因片段，将所述基因片段和所述载体使用同尾酶分开进行双酶切。2.如权利要求1所述的同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法，其特征在于，步骤S1002中，在设计所述目标基因片段的PCR扩增引物时，还可以在正向引物上加上所述酶切位点A1，反向引物上加上所述酶切位点B1、所述酶切位点B、所述酶切位点A。3.如权利要求1所述的同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法，其特征在于，步骤S1003中，所述载体使用同尾酶A和同尾酶B进行酶切。4.如权利要求1所述的同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法，其特征在于，步骤S1003中，所述基因片段使用同尾酶A1和同尾酶B1进行酶切。5.如权利要求1所述的同尾酶在载体构建多基因片段连接中的应用方法，其特征在于，所述酶切位点A和所述酶切位点A1为一对同尾酶的两个酶切位点；所述酶切位点B和所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：张胜南，吴子豪，鲁立，欧雅莉，郭鹏程，张织，邓红梅，李嫦，宾桂青，
申请(专利权)人：肇东星湖生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：