一种热打击下可促进海马区神经元凋亡的小胶质细胞外泌体miRNA及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了一种热打击下可促进海马区神经元凋亡的小胶质细胞外泌体miRNA及其应用，具体公开了miR

【技术实现步骤摘要】
一种热打击下可促进海马区神经元凋亡的小胶质细胞外泌体miRNA及其应用


[0001]本专利技术属生物
，具体一种热打击下可促进海马区神经元凋亡的小胶质细胞外泌体miRNA及其应用。

技术介绍

[0002]中暑(heatstroke)属于急性医疗事件，是与高热相关的系统性炎症应答。广州地处亚热带地区，高温高湿气候持续时间较长，是中暑的高发地区。中暑高死亡率的原因在于对其引起多器官功能衰竭的发病机制认识不清。既往研究中根据内、外热源不同，分为典型性和劳力性中暑。根据临床表现又可分为先兆中暑、轻症中暑和重症中暑。重症中暑有三个阶段，即过高热
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神经系统急性期、血液
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酶促期(24～48小时达到高峰)、肝
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肾期(如临床症状持续96小时或以上)，由于中枢神经系统对过高热极度敏感，热打击下脑代谢率增高、血流量减少，血脑屏障通透性增大，更多的炎性因子及病原体进入脑中，因此中枢神经系统是重症中暑较易累及的靶器官，高热引起的脑损伤也是重症中暑患者预后不良的重要原因。在我院重症监护室收治的重症中暑患者中，磁共振检查可见近半数患者合并脑弥漫性病变，受累部位多为海马等对缺血缺氧敏感的部位。海马区为重要的认知区域，受损后引起的认知功能障碍对患者预后及生存质量有重要影响。目前对于重症中暑海马区损伤及具体分子机制未见报道，对于中枢神经系统中多种细胞的相互作用知之甚少。由此可见明确重症中暑中枢神经系统损伤的具体机制对中暑患者的救治至关重要，其中海马损伤更是重要的关注方向。
[0003]小胶质细胞为中枢神经系统中的固有免疫细胞，其介导中枢神经系统损伤和疾病的内源性免疫反应，在神经炎症中发挥重要作用，中暑属于高热相关的系统性炎症应答，过度的免疫激活为其发病过程的重要一环。目前对于重症中暑过程中小胶质细胞发挥的作用及其对神经元的影响未有研究。外泌体是一类直径30～100nm的囊泡样小体，其含有蛋白质、mRNA、微小RNA(microRNA)、DNA片段等，是细胞间物质和信息转导的重要媒介。多种细胞可分泌外泌体，包括肿瘤细胞、成纤维细胞、免疫细胞、内皮细胞等，外泌体具有脂质双分子膜，使其包含的内容物在远距离传递中仍可保持稳定，其可通过融合或相互作用参与调节特异性的细胞与细胞间的交流。这种由外泌体调节的细胞间信号转导参与多种生理及病理过程，包括肿瘤发生及炎症性疾病，可调控多种免疫细胞，在炎症应答中发挥重要作用。
[0004]小胶质细胞作为大脑内驻留的巨噬细胞同样可通过释放外泌体与神经元及其他胶质细胞相互作用，其外泌体内含蛋白质、miRNA、LncRNA等，调控多种细胞的生物学功能，其中miRNA最为常见。既往研究表明小胶质细胞外泌体miR
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124可下调USP14来减轻脑卒中后的神经损伤，通过靶向海马神经元中的Rela/ApoE信号通路有助于减轻创伤性脑损伤小鼠的神经变性并促进细胞损伤后神经突触的生长，同时可通过Bcl
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2/Bcl
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xl途径抑制神经元凋亡。而上调小胶质细胞外泌体miRNA
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5p的表达，可通过抑制smad3通路在损伤早期抑制星形胶质细胞增殖，避免其过度增殖形成“胶质瘢痕”，有利于神经功能的恢复。除此之
外，小胶质细胞外泌体还参与神经递质传递、突触生长及成血管作用等，在中枢神经系统损伤中发挥重要作用。目前，对于中暑脑损伤中小胶质细胞来源外泌体的作用及具体机制仍不清楚，国内外文献尚未报道，值得我们进一步探究。

技术实现思路

[0005]本专利技术第一方面的目的，在于提供miR
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5p在制备预防和/或治疗中暑脑损伤药物中的应用。
[0006]本专利技术第二方面的目的，在于提供含有miR
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5p核酸分子的表达盒、载体或细胞系在制备预防和/或治疗中暑脑损伤药物中的应用。
[0007]本专利技术第三方面的目的，在于提供miR
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5p抑制剂在制备预防和/或治疗中暑脑损伤药物中的应用。
[0008]本专利技术第四方面的目的，在于提供miR
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5p抑制剂在制备Bcl
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2促进剂中的应用。
[0009]本专利技术第五方面的目的，在于提供miR
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5p抑制剂或阻断剂在制备海马神经元凋亡抑制剂中的应用。
[0010]本专利技术第六方面的目的，在于提供miR
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5p抑制剂或阻断剂在促进Bcl
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2的表达中的应用。
[0011]本专利技术第七方面的目的，在于提供miR
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5p作为靶标在筛选中暑脑损伤诊断试剂中的应用。
[0012]本专利技术第八方面的目的，在于提供检测miR
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5p表达量的试剂在制备诊断中暑脑损伤的产品中的应用。
[0013]本专利技术第九方面的目的，在于提供一种试剂。
[0014]本专利技术第十方面的目的，在于提供一种药物。
[0015]为了实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案是：
[0016]本专利技术的第一个方面，提供miR
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5p在制备预防和/或治疗中暑脑损伤药物中的应用。
[0017]miR
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5p模拟物在制备预防和/或治疗中暑脑损伤药物中的应用。
[0018]优选地，所述miR
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5p的核苷酸序列为5
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GUGUGUGUGUGUGUGUGUGU
‑3’
(SEQ ID NO:1)。
[0019]优选地，所述miR
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5p促进海马神经元的凋亡。
[0020]本专利技术通过实验验证，发现miR
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5p在热打击处理的小胶质细胞BV2培养上清外泌体中高表达，在体外和体内实验中，过表达miR
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5p会促进海马神经元的凋亡，而抑制miR
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5p表达能够明显促进抗凋亡蛋白Bcl
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2表达，从而抑制海马神经元的凋亡；在热打击动物模型上抑制miR
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5p能有效降低重症中暑脑损伤的发生。
[0021]优选地，所述的miRNA
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模拟物(miRNA mimics/agomir)是模拟生物体内源的miRNA，运用化学合成的方法合成，能增强内源性miRNA的功能。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.(1)或(2)在制备预防和/或治疗中暑脑损伤药物中的应用；(1)miR
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5p；(2)miR
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5p模拟物。2.含有miR
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5p核酸分子的表达盒、载体或细胞系在制备预防和/或治疗中暑脑损伤药物中的应用。3.(3)～(5)中至少一种在制备预防和/或治疗中暑脑损伤药物中的应用；(3)miR
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5p抑制剂；(4)靶向下调miR
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5p的试剂；(5)靶向抑制miR
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5p活性的试剂。4.根据权利要求1～3中任一所述的应用，其特征在于，所述药物通过促进Bcl
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2的表达、抑制caspase
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3的表达而达到预防和/或治疗中暑脑损伤的目的。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述中暑脑损伤包括中暑中枢神经系统损伤。6.根据权利要求5所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：任广立，朱婕，谢国强，刘志锋，
申请(专利权)人：中国人民解放军南部战区总医院，
类型：发明
国别省市：