一种靶向LILRB4的单克隆抗体制造技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，具体提供了一种靶向LILRB4的单克隆抗体，HCDR1、HCDR2和HCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID No:1、SEQ ID No:2和SEQ ID No:3所示，LCDR1、LCDR2和LCDR3的氨基酸序列分别如SEQ IDNo:4、SEQ ID No:5和SEQ ID No:6所示，本发明专利技术提供的单克隆抗体与LILRB4抗原具有较高的结合能力，能够有效抑制LILRB4抗原与其配体复合物的结合，从而阻止下游NF

【技术实现步骤摘要】
一种靶向LILRB4的单克隆抗体


[0001]本专利技术涉及生物医药
，特别涉及一种靶向LILRB4的单克隆抗体。

技术介绍

[0002]急性白血病(AL)是一种血液系统恶性肿瘤，大多数AL患者的预后没有明显改善，尤其是复发或难治性(R/R)AL。因此，迫切需要针对R/R成人急性髓系白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)的新疗法，急性髓系白血病(AML)是一种造血干细胞恶性肿瘤，是最常见的白血病类型，在欧洲的5年相对生存率为19％。慢性粒细胞白血病(CML)是一种缓慢进展的克隆性恶性疾病，是一种源自双相造血干细胞但由祖细胞驱动的骨髓增殖性疾病。CML后的AML很常见，这可能是由先前的髓系恶性肿瘤、致白血病治疗或没有可识别的前驱症状或暴露于细胞毒性药物引起的。随着生物医药技术的不断发展，AL治疗取得了新的进展，包括靶向治疗和免疫治疗。
[0003]白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员4(LILRB4)作为LILRB家族成员，结构上包含两个细胞外免疫球蛋白样结构域及三个细胞内ITIM结构域。LILRB4在单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞等髓样抗原呈递细胞(APCs)中选择性表达。LILRB4特异性高表达在M4和M5型AML细胞上，并且高表达LILRB4的病人生存率显著降低。载脂蛋白E(ApoE)结合并激活LILRB4，募集SHP
‑
2，调控核因子κB(NF
‑
κB)信号通路，从而刺激尿激酶受体(uPAR)和精氨酸酶1(ARG1)的表达，进一步抑制T细胞增殖，促进组织浸润。抗LILRB4抗体能够阻断LILRB4与ApoE的相互作用，抑制NF
‑
κB信号通路，降低ARG1表达，从而促进T细胞增殖并减少组织浸润。
[0004]目前，有多家生物医药企业均在LILRB4靶点研发针对白血病治疗的抗体药物，为此，抗LILRB4单克隆抗体作为首款有望用于AML的T细胞激活剂，将为全球AML和慢性粒单核细胞白血病(CMML)病患带来创新治疗方案，具有非常大的市场潜力。

技术实现思路

[0005]本专利技术通过对免疫文库的筛选，得到了可以与LILRB4特异性结合，且具有较高生物学活性的靶向LILRB4的单克隆抗体。
[0006]本专利技术具体技术方案如下：
[0007]本专利技术提供了一种靶向LILRB4的单克隆抗体，包括：
[0008](1)氨基酸序列如SEQ ID No:1所示的重链互补决定区HCDR1；
[0009](2)氨基酸序列如SEQ ID No:2所示的重链互补决定区HCDR2；
[0010](3)氨基酸序列如SEQ ID No:3所示的重链互补决定区HCDR3；
[0011](4)氨基酸序列如SEQ ID No:4所示的轻链互补决定区LCDR1；
[0012](5)氨基酸序列如SEQ ID No:5所示的轻链互补决定区LCDR2；
[0013](6)氨基酸序列如SEQ ID No:6所示的轻链互补决定区LCDR3。
[0014]进一步的，靶向LILRB4的单克隆抗体包括氨基酸序列如SEQ ID No:7所示的重链
可变区和氨基酸序列如SEQ ID No:8所示的轻链可变区。
[0015]进一步的，靶向LILRB4的单克隆抗体还包括重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区选自鼠的IgG1型、IgG2a型、IgG2b型或IgG3型的恒定区的一种，所述轻链恒定区为氨基酸序列如SEQ ID No:13所示的鼠源C
k
型的恒定区；所述IgG1型的恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No:9所示，所述IgG2a型的恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No:10所示，所述IgG2b型的恒定区的氨基酸序列如SEQ IDNo:11所示，所述IgG3型的恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No:12所示。
[0016]优选的，所述单克隆抗体为Fab、F(ab)2、Fv或ScFv中的一种或几种组合。
[0017]本专利技术还提供了一种蛋白，所述蛋白包含所述的靶向LILRB4的单克隆抗体。
[0018]本专利技术还提供了一种核苷酸分子，所述核苷酸分子编码所述的靶向LILRB4的单克隆抗体。
[0019]本专利技术还提供了一种重组DNA表达载体，所述重组DNA表达载体包含所述的核苷酸分子。
[0020]本专利技术还提供了一种转染所述的重组DNA表达载体的宿主细胞，所述宿主细胞包括原核细胞、酵母细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞；
[0021]优选的，所述宿主细胞为哺乳动物细胞，所述哺乳动物细胞为HEK293细胞、CHO细胞或NS0细胞。
[0022]还提供了一种药物，所述药物包含所述的靶向LILRB4的单克隆抗体。
[0023]本专利技术还提供了所述的靶向LILRB4的单克隆抗体在制备治疗癌症药物中的应用；
[0024]所述癌症包括急性髓系白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤、母细胞性浆细胞样树状突细胞肿瘤、乳腺癌、肺癌或前列腺癌中的一种或多种。
[0025]本专利技术的有益效果如下：本专利技术提供的靶向LILRB4的单克隆抗体与LILRB4抗原具有较高的结合能力，能够有效抑制LILRB4抗原与其配体复合物的结合，从而阻止下游NF
‑
κB信号通路的激活和ARG1的释放，促进T细胞增殖，及抑制组织浸润。此外，本专利技术筛选得到的单克隆抗体能够用于治疗癌症，癌症包括但不限于急性髓系白血病(AML)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、多发性骨髓瘤(MM)、母细胞性浆细胞样树状突细胞肿瘤(BPDCN)、乳腺癌、肺癌或前列腺癌。
附图说明
[0026]图1为本专利技术实施例2中pScFv
‑
Disb
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HS载体的质粒图谱；
[0027]图2为本专利技术实施例3中梯度稀释ELISA单克隆抗体相对亲和力图；
[0028]图3为本专利技术实施例5中载体pTSE的图谱；
[0029]图4为本专利技术实施例5中单克隆抗体分子的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳图；
[0030]图5为本专利技术实施例6中单克隆抗体分子与LILRB4的结合能力图；
[0031]图6为本专利技术实施例8中单克隆抗体分子与人单核细胞白血病细胞(THP
‑
1)表面LILRB4的结合能力图；
[0032]图7本专利技术实施例9中单克隆抗体分子与ApoE竞争结合LILRB4实验图；
[0033]图8为本专利技术实施例10中单克隆抗体分子抑制THP
‑
1分泌ARG1实验图。
具体实施方式
[0034]为了更加容易理解本专利技术，描述实施例之前，先对本专利技术某些技术和科学术语作以下说明：
[0035]本文所使用的术语“抗体”，包含全抗体及其任一抗原结合片段，抗体包括鼠源抗体、人源化抗体、双特异抗体或嵌合抗体，抗体也可以是Fab、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向LILRB4的单克隆抗体，其特征在于，包括：(1)氨基酸序列如SEQ ID No:1所示的重链互补决定区HCDR1；(2)氨基酸序列如SEQ ID No:2所示的重链互补决定区HCDR2；(3)氨基酸序列如SEQ ID No:3所示的重链互补决定区HCDR3；(4)氨基酸序列如SEQ ID No:4所示的轻链互补决定区LCDR1；(5)氨基酸序列如SEQ ID No:5所示的轻链互补决定区LCDR2；(6)氨基酸序列如SEQ ID No:6所示的轻链互补决定区LCDR3。2.如权利要求1所述的靶向LILRB4的单克隆抗体，其特征在于，包括氨基酸序列如SEQ ID No:7所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID No:8所示的轻链可变区。3.如权利要求2所述的靶向LILRB4的单克隆抗体，其特征在于，还包括重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区选自鼠的IgG1型、IgG2a型、IgG2b型或IgG3型的恒定区的一种，所述轻链恒定区为氨基酸序列如SEQ ID No:13所示的鼠源C
k
型的恒定区；所述IgG1型的恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No:9所示，所述IgG2a型的恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No:10所示，所述IgG2b型的恒定区的氨基酸序列如SEQ ID No:11所示，所述IgG3型的恒...

【专利技术属性】
技术研发人员：白义，
申请(专利权)人：北京东方百泰生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：