利用红果参茎段诱导丛生芽的组培快繁方法技术

利用红果参茎段诱导丛生芽的组培快繁方法，涉及生物技术领域。本发明专利技术的方法，包括外植体获取、清洁、消毒、丛生芽诱导、增殖培养和生根培养步骤。其中，消毒是用75%酒精消毒20

【技术实现步骤摘要】
利用红果参茎段诱导丛生芽的组培快繁方法


[0001]本专利技术涉及生物
，特别涉及红果参的组织培养领域。

技术介绍

[0002]红果参（Campanumoea lancifolia ）又名长叶轮种草、蜘蛛果，为桔梗科金钱豹属多年生草本植物，根以及茎叶可入药，具补虚益气、祛痰止痛的功效，同时其果实为浆果，味鲜美甘甜，富含维生素、花青素、果胶、黄酮等多种对人体有益物质。
[0003]随着红果参产业的发展，通过其果实口感、果实大小、药用部位有效成分含量等进行了不同品种（品系）的筛选或育种研究，并获得了更多的新品种（品系）。而目前红果参主要繁殖方式为种子繁殖，但种子繁殖存在杂交，可能导致筛选出的母本优良性状不能很好保持。
[0004]近年来有些关于红果参组织培养方面的研究报道，中国专利《一种红果参离体外繁方法》（CN201811004746）主要是通过利用茎段诱导愈伤组织，再通过愈伤组织分化出芽的途径进行红果参组培苗的繁育，就一般而言，愈伤组织为植物的非器官组织，一方面易受外界因子的影响而产生变异，另一方面其不是具体的植物或器官，需要通过分化培养而获得丛生芽，再通过生根最终获得生根苗，生产步骤较为繁琐。

技术实现思路

[0005]本专利技术提出一种直接利用茎段诱导丛生芽，再通过生根获得完整植株的组培快繁方法。
[0006]利用红果参茎段诱导丛生芽的组培快繁方法，其特征在于该方法包括以下步骤：步骤1，获取外植体；步骤2，外植体去叶，剪成具芽小段；步骤3，清洁外植体；步骤4，对外植体进行消毒；步骤5，外植体进行丛生芽诱导；步骤6，诱导出的丛生芽进行增殖培养；步骤7，增殖的丛生芽进行生根培养；所述步骤4采用的消毒方法是先用75%酒精消毒20
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30s，然后用无菌水涮洗3
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4次，再用饱和漂白粉溶液消毒20
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25min，然后用无菌水涮洗3
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4次，最后用0.05%升汞溶液消毒5
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6min，然后无菌水涮洗6
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8次；所述步骤5采用的丛生芽诱导培养基由改良MS+IBA 0.05
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0.08mg/L+IAA 0.01
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0.02mg/L+CPPU 0.2
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0.3mg/L组成；所述步骤6采用的丛生芽增殖培养基由改良MS+IBA 0.03
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0.05mg/L+CPPU 0.3
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0.5mg/L+CH 30
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40mg/L组成；所述步骤7采用的生根培养基由1/2改良WPM +IBA 0.2
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0.5mg/L+IAA 0.5
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1.0mg/
L+AC 0.5g/L组成；所述改良MS指MS成分不变，pH调整为5.2的MS；所述1/2改良WPM指 WPM成分不变，pH调整为5.2的WPM。
[0007]本专利技术相对于现有技术，生产周期短，生产成本低，种苗质量更佳，具体体现在：1、本专利技术在外植体消毒时，升汞由0.1%浓度降低了一半，同时搭配75%酒精以及漂白粉溶液，一方面可使消毒污染率控制在20%以内，另一方面消毒剂几乎不损伤外植体。
[0008]2、本专利技术在初代诱导时采用IBA、IAA和CPPU的适宜浓度组合，可直接诱导出丛生芽，未采用组培过程中常规的愈伤诱导、愈伤分化成芽途径，减少了愈伤分化成芽的环节，一定程度的缩短了生产周期、简便了生产环节、降低了生产成本，同时还能有效避免愈伤受外界因子影响带来的变异风险。
[0009]3、本专利技术在增殖过程中采用IBA和CPPU的组合，同时创造性的添加了CH，一方面可使增殖系数稳定到6.0以上，另一方面CH的添加可防止玻璃化的发生，苗更加健壮。
[0010]4、一般组培苗进行生根培养时，均需25
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40天的培养时间，更有甚者需更长时间或者进行二次生根培养。本专利技术在增殖过程中添加了CH，可使苗更加健壮，同时在一定程度上促进了基部根原基的形成，再结合1/2改良WPM与IAA和IBA的适宜浓度组合的生根培养基，可在12
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15天即可形成合格的生根苗。
附图说明
[0011]图1为实施例1丛生芽继代增殖苗图。
[0012]图2为实施例2丛生芽15天生根图。
[0013]图3为生根15天后下地驯化后2个月的苗长势图。
[0014]图1中丛生芽继代增殖苗，无愈伤出现，无玻化苗，增殖系数高；图2中丛生芽15天生根苗及根系健壮，生根率100%；图3中生根15天后下地驯化，2个月的苗长势较好，成活率为100%。
具体实施方式
[0015]实施例1：利用红果参茎段诱导丛生芽的组培快繁方法，具体步骤如下：步骤1，选择健壮无病虫害红果参植株，取枝条顶端20
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30cm幼嫩茎段及顶芽为外植体。
[0016]步骤2，剪下的外植体去叶，并剪成2
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3cm具芽小段。
[0017]步骤3，用饱和肥皂液溶液涮洗10min，自来水漂洗至无明显肥皂液残留，后滴加3滴吐温
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80，并加适量水后震摇10min，最后用自来水冲淋50min。
[0018]步骤4，将清洁好的外植体转移至超净工作台，用75%酒精消毒20s，无菌水涮洗3次，饱和漂白粉溶液消毒20min，无菌水涮洗3次，0.05%升汞溶液消毒5min，无菌水涮洗8次。
[0019]步骤5，将消毒好的外植体，剪去两端伤口，保留1
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2cm具芽小段，用无菌纸吸去表面水分，按生理极性接种于改良MS+IBA 0.05mg/L+IAA 0.01mg/L+CPPU 0.2mg/L的丛生芽诱导培养基，并置于温度为25
±
2 ℃，光照强度为2000
‑
3000LX的环境中培养35天，其中光照时间为每天10小时。
[0020]步骤6，将诱导出的丛生芽，剪成单芽，按生理极性接种于改良MS+IBA 0.03mg/L+
CPPU 0.3mg/L+CH 30mg/L的丛生芽增殖培养基上，置于温度为25
±
2 ℃，光照强度为2000
‑
3000LX的环境下培养30天，其中光照时间为每天10小时。
[0021]步骤7，将初代诱导或继代增殖的丛生芽，剪成单芽，接种于1/2改良WPM+IBA 0.2mg/L+IAA 0.5mg/L+AC 0.5g/L的生根培养基上，并置于温度为25
±
2 ℃，光照强度为2000
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3000LX的环境中培养12天，其中光照时间为每天12小时。
[0022]步骤8，将生根苗出瓶后，洗净培养基，栽植于按质量1:1配比的泥炭土与田园土混合基质中，同时进行常规的组培苗驯化管理。
[0023]所述改良MS指MS成分不变，pH调整为5.2的MS。
[0024]所述1/2改本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.利用红果参茎段诱导丛生芽的组培快繁方法，其特征在于该方法包括以下步骤：步骤1，获取外植体；步骤2，外植体去叶，剪成具芽小段；步骤3，清洁外植体；步骤4，对外植体进行消毒；步骤5，外植体进行丛生芽诱导；步骤6，诱导出的丛生芽进行增殖培养；步骤7，增殖的丛生芽进行生根培养；所述步骤4采用的消毒方法是先用75%酒精消毒20
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30s，然后用无菌水涮洗3
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4次，再用饱和漂白粉溶液消毒20
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25min，然后用无菌水涮洗3
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4次，最后用0.05%升汞溶液消毒5
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6min，然后无菌水涮洗6
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8次；所述步骤5采用的丛生芽诱导培养基由改良MS+IBA 0.05

【专利技术属性】
技术研发人员：杨维泽，张金渝，赵露琴，杨美权，曾祥飞，起明菊，
申请(专利权)人：云南植虫药生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：