一种融合蛋白、生长激素及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种制备生长激素的方法。该方法包括：获取菌体的包涵体，包涵体包括融合蛋白，融合蛋白包括第一肽段和第二肽段，第一肽段为目标生长激素及其片段，第二肽段具有如式(I)所示的氨基酸序列，第一肽段的N端与第二肽段的C端相连；将融合蛋白通过切割酶进行酶切处理，形成游离的目标生长激素及其片段，游离的目标生长激素及其片段序列完整，未产生非特异性酶切，目标生长激素及其片段的N

【技术实现步骤摘要】
一种融合蛋白、生长激素及其制备方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体地，本专利技术涉及一种融合蛋白、生长激素及其制备方法。

技术介绍

[0002]生长激素(human growth hormone，hGH)是由人脑垂体前叶分泌的一种蛋白质激素，由191个氨基酸组成，分子量为22.1KDa，生长激素能够促进骨骼生长，促进机体蛋白质合成和脂肪分解，增加肌细胞的数量和增大肌细胞的体积，调节免疫系统增强免疫能力。生长激素可以用于儿童内源性生长激素缺乏引起的矮小症、特纳综合症、成人GHD、烧伤及创伤修复等症的治疗，还可以用于治疗慢性肾衰竭引起的身材矮小、短肠综合症及老年人延缓衰老等。但传统的制备方法存在表达量低、不易于实现大规模制备等缺点。
[0003]因此，亟需开发一种表达量高、易于大规模高效制备生长激素的方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本专利技术提供了一种生长激素的制备方法，该制备方法具有表达量高、易于大规模高效制备生长激素等优点。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白，其特征在于，包括第一肽段和第二肽段，所述第一肽段为目标生长激素及其片段，所述第二肽段具有如式(I)所示的氨基酸序列，所述第一肽段的N端与所述第二肽段的C端相连；MXB(I)；其中，M为甲硫氨酸，X为保护序列，B为酶切位点；所述融合蛋白适于通过切割酶切割形成游离的所述目标生长激素及其片段，所述目标生长激素及其片段不被所述切割酶切割，游离的所述目标生长激素及其片段的N
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末端不含有额外的氨基酸残基。2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述酶切位点的序列为DDDDK。3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其特征在于，所述保护序列包含1～25个氨基酸；优选地，所述保护序列包含1～15个氨基酸，优选为1～10个；更优选地，所述保护序列包含3个氨基酸；优选地，所述保护序列中氨基酸各自独立地为空、F、T和P；优选地，所述保护序列的氨基酸序列为FTP；任选地，所述第二肽段具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。4.根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其特征在于，所述目标生长激素及其片段具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有99％、98％、97％、96％和95％同一性的氨基酸序列。5.一种制备生长激素的方法，其特征在于，包括：获取菌体的包涵体，所述包涵体包括融合蛋白，所述融合蛋白包括第一肽段和第二肽段，所述第一肽段为目标生长激素及其片段，所述第二肽段具有如式(I)所示的氨基酸序列，所述第一肽段的N端与所述第二肽段的C端相连；将所述融合蛋白通过切割酶进行酶切处理，形成游离的所述目标生长激素及其片段，所述目标生长激素及其片段不被所述切割酶切割，游离的所述目标生长激素及其片段的N
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末端不含有额外的氨基酸残基；MXB(I)；其中，M为甲硫氨酸，X为保护序列，B为酶切位点。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述酶切位点的序列为DDDDK；优选地，采用重组牛肠激酶对所述融合蛋白进行酶切处理；优选地，所述酶切处理是在1～10℃、pH值为8.0～8.2条件下进行11～19h；任选地，所述重组牛肠激酶和所述融合蛋白的质量比为1：(2000～6000)，优选为1：(3000～5000)。7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述保护序列包含1～25个氨基酸；优选地，所述保护序列包含1～15个氨基酸，优选为1～10个；优选地，所述保护序列中氨基酸各自独立地为空、F、T和P；优选地，所述保护序列的氨基酸序列为FTP；任选地，所述第二肽段具有如S...

【专利技术属性】
技术研发人员：王菲，沈玉保，包国庆，郭力鸣，
申请(专利权)人：君合盟生物制药杭州有限公司，
类型：发明
国别省市：