一种高效杂交瘤融合方法技术

本发明专利技术公开了一种高效杂交瘤融合方法，具体方法为构建IL2信号肽、特定的CD19scfv蛋白和CD28跨膜结构域融合表达质粒载体；上述载体在骨髓瘤细胞SP2/0中转录翻译形成融合蛋白（命名为MGCP）并被转运至细胞表面；骨髓瘤细胞表面的MGCP蛋白可识别结合小鼠脾细胞表面的CD19蛋白，通过上述两种蛋白的结合可实现骨髓瘤细胞和脾细胞在物理空间上的定向紧密贴合；在PEG和电击诱导融合时，两种细胞的融合效率可提升10

【技术实现步骤摘要】
一种高效杂交瘤融合方法


[0001]本专利技术属于抗体的制备及序列测定领域，具体涉及一种高效杂交瘤融合方法。

技术介绍

[0002]杂交瘤技术是在正常体细胞融合的基础上发展而来的，Kohler和Milstein在1975年首次实现免疫小鼠的脾脏B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，形成了B淋巴细胞
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骨髓瘤细胞杂合体，此杂合体既具有骨髓瘤细胞能在体外培养中快速无限增殖的特点，又具有B淋巴细胞可分泌单克隆抗体的优点。传统经典的杂交瘤技术是利用PEG将HGPRT基因缺陷型骨髓瘤细胞SP2/0与免疫动物的脾细胞进行融合，利用HAT选择性培养基可将正确融合的杂交瘤细胞筛选和培养出来。再通过常规的检测技术如ELISA、FACS等，将能分泌针对特定蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤克隆筛选出来，利用有限稀释的方法对阳性克隆进行亚克隆，亚克隆后得到的细胞即是能分泌均一性单克隆抗体的细胞。
[0003]传统的杂交瘤技术虽然实现了单克隆抗体分泌细胞的永生化，但存在着细胞融合效率较低的问题，在融合体系中可能存在大量未融合的骨髓瘤细胞、脾细胞以及错误融合的骨本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高效杂交瘤融合方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、构建IL2信号肽、特定的CD19scfv蛋白和CD28跨膜结构域融合序列，融合蛋白命名为MGCP，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；S2、对上述融合蛋白MGCP氨基酸序列对应的核苷酸序列进行密码子优化，得到优化后的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；S3、将上述核苷酸序列委托合成后构建至PLVX
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puro慢病毒表达载体，上述载体转染骨髓瘤细胞SP2/0后转录翻译形成融合蛋白MGCP并被转...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓加武，王明强，吕奕，芮兵，
申请(专利权)人：南京佰抗生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：