一种温敏调控体系在合成戊二胺上的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种温敏调控体系在合成戊二胺上的应用，包括如下步骤：（1）以λ噬菌体的pR/pL启动子和温敏阻遏子Ci857，构建温敏传感体系；（2）构建温度调控赖氨酸脱羧酶表达的重组质粒；（3）构建温度调控合成戊二胺的重组大肠杆菌。本发明专利技术可以解决目前由于戊二胺积累导致一步法发酵生产戊二胺受限的首要难题，为二元胺为代表的细胞毒性产品的生产提高了参考，为推动生物制造的发展提供了借鉴。为推动生物制造的发展提供了借鉴。为推动生物制造的发展提供了借鉴。

【技术实现步骤摘要】
一种温敏调控体系在合成戊二胺上的应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种温敏调控体系在合成戊二胺上的应用。

技术介绍

[0002]戊二胺是一种重要的材料单体，可以用于合成尼龙PA5.X系列。目前，戊二胺的生物合成方法包括了酶催化和一步发酵法。戊二胺的一步发酵法可以利用低劣生物质为原料，而受到研究者的青睐。然而，戊二胺本身一种碱性强烈且具备生物毒性的二胺类化学物。过量积累会导致细胞生长停滞，产物合成首先等问题。因此，如何避免戊二胺对底盘细胞造成抑制是戊二胺一步发酵法的首要问题。
[0003]动态调控策略是一种新型的代谢改造手段，依赖于传感器和调控系统，对目标基因实现动态的表达调控。来自噬菌体pR/pL启动子和Ci857阻遏子构建的温敏调控系统，可以根据温度的变化，实现对目标基因的表达调控。低温时（<37℃），阻遏子Ci857具有蛋白活性，会与pR/pL启动子结合，阻遏目标基因的表达。当温度升高时（>39℃），阻遏蛋白失活，无法与pR/pL启动子结合，目标基因的正常表达。将该温敏调控体系应用于戊二胺的合成中，可以有效解决诱导剂添加和戊二胺的抑制等问题。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中戊二胺的生物合成中存在的生物毒性问题，本专利技术的目的在于提供了一种温敏调控体系在合成戊二胺上的应用，避免了使用诱导剂，降低了生产成本，且温度调控参数易于实现，同时能有避免戊二胺对细胞代谢的抑制。
[0005]为解决现有技术问题，本专利技术采取的技术方案为：一种温敏调控体系在合成戊二胺上的应用，包括如下步骤：步骤1，构建温敏调控体系步骤1.1，利用λ噬菌体的pR/pL启动子和温敏阻遏子Ci857，构建温敏传感器，实现温度调控下游基因cadA的表达；步骤1.2，将赖氨酸脱羧酶基因构建于pR/pL启动子后，并亚克隆到pET28a(+)上，获得重组质粒，实现温度调控赖氨酸脱羧酶的表达；步骤1.3，将步骤1.2所得重组质粒导入赖氨酸生产菌株NT1003
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Met
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Thr中，获得温度调控合成戊二胺的重组工程菌NT03201；步骤2，将步骤1.3合成戊二胺的重组工程菌NT03201合成戊二胺。
[0006]作为改进的是，步骤1.1中，所述λ噬菌体的pR/pL启动子的序列如SEQ ID No.1所示。
[0007]TTGACTATTTTACCTCTGGCGGTGATAATGGTTGCATGTACTAAGGAGGTTGTATGGAACAACGCATAACCCTGAAAGATTATGCAATGCGCTTTGGGCAAACCAAGACAGCTAAAGATCTCTCACCTACCAAACAATGCCCCCCTGCAAAAAATAAATTCATATAAAAAACATACAGATAACCATCTGCGGTGATAAATTATCTCTGGCGGTGTTGACATAAATACCACTGGCGGTGATACTAAGGAGATATACC（SEQ ID No.1）
作为改进的是，步骤1.1中，所述温敏阻遏子Ci857的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
[0008]tcagccaaacgtctcttcaggccactgactagcgataactttccccacaacggaacaactctcattgcatgggatcattgggtactgtgggtttagtggttgtaaaaacacctgaccgctatccctgatcagtttcttgaaggtaaactcatcacccccaagtctggctatgcagaaatcacctggctcaacagcctgctcagggtcaacgagaattaacattccgtcaggaaagcttggcttggagcctgttggtgcggtcatggaattaccttcaacctcaagccagaatgcagaatcactggcttttttggttgtgcttacccatctctccgcatcacctttggtaaaggttctaagcttaggtgagaacatccctgcctgaacatgagaaaaaacagggtactcatactcacttctaagtgacggctgcatactaaccgcttcatacatctcgtagatttctctggcgattgaagggctaaattcttcaacgctaactttgagaatttttgcaagcaatgcggcgttataagcatttaatgcattgatgccattaaataaagcaccaacgcctgactgccccatccccatcttgtctgcgacagattcctgggataagccaagttcatttttctttttttcataaattgctttaaggcgacgtgcgtcctcaagctgctcttgtgttaatggtttcttttttgtgctcat（SEQ ID No.2）作为改进的是，步骤1.2中，所述赖氨酸脱羧酶的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，赖氨酸生产菌株NT1003
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Met
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Thr，已于2013年5月30日保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号：CCTCC NO：M2013239。
[0009]ATGAACGTTATTGCAATATTGAATCACATGGGGGTTTATTTTAAAGAAGAACCCATCCGTGAACTTCATCGCGCGCTTGAACGTCTGAACTTCCAGATTGTTTACCCGAACGACCGTGACGACTTATTAAAACTGATCGAAAACAATGCGCGTCTGTGCGGCGTTATTTTTGACTGGGATAAATATAATCTCGAGCTGTGCGAAGAAATTAGCAAAATGAACGAGAACCTGCCGTTGTACGCGTTCGCTAATACGTATTCCACTCTCGATGTAAGCCTGAATGACCTGCGTTTACAGATTAGCTTCTTTGAATATGCGCTGGGTGCTGCTGAAGATATTGCTAATAAGATCAAGCAGACCACTGACGAATATATCAACACTATTCTGCCTCCGCTGACTAAAGCACTGTTTAAATATGTTCGTGAAGGTAAATATACTTTCTGTACTCCTGGTCACATGGGCGGTACTGCATTCCAGAAAAGCCCGGTAGGTAGCCTGTTCTATGATTTCTTTGGTCCGAATACCATGAAATCTGATATTTCCATTTCAGTATCTGAACTGGGTTCTCTGCTGGATCACAGTGGTCCACACAAAGAAGCAGAACAGTATATCGCTCGCGTCTTTAACGCAGACCGCAGCTACATGGTGACCAACGGTACTTCCACTGCGAACAAAATTGTTGGTATGTACTCTGCTCCAGCAGGCAGCACCATTCTGATTGACCGTAACTGCCACAAATCGCTGACCCACC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种温敏调控体系在合成戊二胺上的应用，其特征在于，包括如下步骤：步骤1，构建温敏调控体系步骤1.1，利用λ噬菌体的pR/pL启动子和温敏阻遏子Ci857，构建温敏传感器，实现温度调控下游基因cadA的表达；步骤1.2，将赖氨酸脱羧酶基因构建于pR/pL启动子后，并亚克隆到pET28a(+)上，获得重组质粒，实现温度调控赖氨酸脱羧酶的表达；步骤1.3，将步骤1.2所得重组质粒导入赖氨酸生产菌株NT1003
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Thr中，获得温度调控合成戊二胺的重组工程菌NT03201；步骤2，将步骤1.3合成戊二胺的重组工程菌NT03201合成戊二胺。2.根据权利要求1所述的一种温敏调控体系在合成戊二胺上的应用，其特征在于，步骤1.1中，所述λ噬菌体的pR/pL启动子的序列如SEQ ID No.1所示。3.根据权利要求1所述的一种温敏调控体系在合成戊二胺上的应用，其特征在于，步骤1.1中，所述温敏阻遏子Ci8...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈可泉，高思远，陆佳晨，王永涛，许晟，王昕，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：