一株高产黄曲霉毒素M1的寄生曲霉及其应用制造技术

本发明专利技术提供一株高产黄曲霉毒素M1的寄生曲霉，该菌株用于发酵制备AFT M1以及

【技术实现步骤摘要】
一株高产黄曲霉毒素M1的寄生曲霉及其应用


[0001]本专利技术属于微生物发酵制备
，具体涉及一株高产黄曲霉毒素M1的寄生曲霉及其应用

技术介绍

[0002]黄曲霉毒素M1(Aflatoxin M1，AFT M1)被国际癌症研究机构列为Ⅰ类致癌物，是动物摄入含有黄曲霉毒素B1的饲料后,在体内经肝微粒体细胞色素P450羟基化所形成的代谢产物,以乳及乳制品的污染最为常见，在乳品加工过程中不会被破坏降解，残留超标将对消费者特别是婴幼儿的健康带来严重危害。我国对乳及乳制品中AFT M1的限量标准为 0.5ug/kg(食品安全国家标准《食品中真菌毒素限量GB2761—2017》)。
[0003]食品安全国家标准《食品中黄曲霉毒素M族的测定 GB5009.24—2016》规定了3种AFT M1的检测方法：同位素稀释液相色谱
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串联质谱法、高效液相色谱法及酶联免疫吸附筛查法。检测方法中使用的AFT M1标准品及
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C稳定同位素标记的
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C
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AFT M1内标物难以制备，长期依赖进口，价格昂贵，导致AFT M1的检测成本居高不下。目前公开报道的获得AFT M1的方法主要有寄生曲霉或黄曲霉微生物发酵法以及化学合成法。而
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C
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AFT M1内标物的制备方法未见文献报道。
[0004]胡文娟等(胡文娟等，卫生研究，1980(03)，20
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23)筛选出产AFTM1的477号和116号菌株，实验测定发酵产物中AFT M1的含量分别为4.8mg/kg、11.2mg/kg。Pai(Pai etal,Applied Microbiology,1975,29(6), 850
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851)和Stubblefield(Stubblefield etal,J.Am.Oil Chem.Soc.1970,47, 389
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390)分别用黄曲霉Aspergillus flavus NRRL 3251在液体合成培养基、大米培养基中发酵，AFT M1的含量分别为10.3mg/L、20mg/kg。Purchase 等人(Purchase et al,Mycopathologia Et Mycologia Applicata,1968,35, 239
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244)对27种黄曲霉或寄生曲霉菌株在不同培养基中产AFT M1情况进行了研究，结果表明AFT M1的含量最高为7.5mg/kg。寄生曲霉NRRL2999的AFT M1产量也仅有4ug/kg(Jiirgen,Z Lebensm Unters Forsch， 1981,172,26
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29)。以上使用的菌株以及发酵方法均未能实现AFT M1的高产。
[0005]Christou等(Christou etal，Phytochemtry,1985,24(5),933
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935)试图以黄曲霉毒素B1为原料，通过包括二氧化锡氧化乙酰基保护的黄曲霉毒素B1在内的4步化学转换法制备AFT M1，但反应转化率低、副反应多、分离困难，收率仅有0.03％，且由于原料本身价格昂贵，因此该方法无实际应用价值。Buch等(Buch et al,J.Am.Chem.Soc.1981,103, 3497
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3501)报道了一种AFT M1的全合成方法，该合成路线制备过程复杂，总步骤长达26步，涉及使用多种危险试剂、多步复杂及危险反应，主路线总收率仅1～5％，难以短时间内实现大量、低成本的制备，且最遗憾的是所制备的产物是AFT M1的消旋体，不能用于酶联免疫检测法。
[0006]综上所述，寄生曲霉或黄曲霉微生物发酵法是制备AFT M1的高效途径，筛选获得高产AFT M1的菌株对实现AFT M1标准品和
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C稳定同位素标记的
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C
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AFT M1内标物的规模
化制备具有十分重要的意义。

技术实现思路

[0007]本专利技术提供一株高产黄曲霉毒素M1的寄生曲霉，该菌株用于发酵制备AFT M1以及
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AFT M1内标物，发酵液中AFT M1的含量能够达到98.05mg/L，
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C
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AFT M1的含量能够达到11.67mg/L，能够实现 AFT M1的规模化制备。
[0008]本专利技术所提供的高产AFT M1的寄生曲霉(Aspergillus parasiticus) zk0523株，于2022年6月27日保藏在位于武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2022990。
[0009]本专利技术所筛选获得的寄生曲霉zk0523株，其ITS的序列如下：
[0010]tccgtaggtgaacctgcggaaggatcattaccgagtgtagggttcctagcgagcccaacctcccacc cgtgtttactgtaccttagttgcttcggcgggcccgccctcatggccgccgggggcctcagccccgggcccg cgcccgccggagacaccacgaactctgtctgatctagtgaagtctgagttgattgtatcgcaatcagttaaaac tttcaacaatggatctcttggttccggcatcgatgaagaacgcagcgaaatgcgataactagtgtgaattgcag aattccgtgaatcatcgagtctttgaacgcacattgcgccccctggtattccggggggcatgcctgtccgagc gtcattgctgcccatcaagcacggcttgtgtgttgggtcgtcgtcccctctccgggggggacgggccccaaa ggcagcggcggcaccgcgtccgatcctcgagcgtatggggctttgtcacccgctctgtaggcccggccgg cgcttgccgaacgcaaaacaaccattttttccaggttgacctcggatcaggtagggatacccgctgaacttaa gcatatcaataagcggagga(SEQ ID NO:1)；
[0011]本专利技术所提供的寄生曲霉zk0523株用于发酵制备AFT M1；
[0012]本专利技术所提供的寄生曲霉zk0523株还可用于发酵制备13C稳定同位素标记的
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C
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AFT M1；
[0013]本专利技术另一个方面还提供一种发酵制备AFT M1的方法，是使用所述的寄生曲霉zk0523株来发酵制备AFT M1。
[0014]所述的方法，是将产生孢子的寄生曲霉zk0523株接种至大米粉
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种寄生曲霉，其特征在于，所述的寄生曲霉的保藏编号为CCTCC NO：M2022990。2.如权利要求1所述的寄生曲霉，其特征在于，所述的寄生曲霉的ITS的序列为SEQ ID NO:1。3.权利要求1所述的寄生曲霉在发酵制备AFT M1中的应用。4.权利要求1所述的寄生曲霉在发酵制备13C稳定同位素标记的
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C
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AFT M1中的应用。5.一种发酵制备AFT M1的方法，其特征在于，所述的方法是使用权利要求1所述的寄生曲霉来发酵制备AFT M1。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的方法是将权利要求1所述的寄生曲霉接种至大米粉
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液体合成培养基中发酵培养制备AFT M1。7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的大米粉
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液体合成培养基的配方如下：MgSO4·
7H2O 0.5g，Fe2(SO4)3·
7H2O 10mg，ZnSO4·
7H2O 0.2g,酵母提取物10g，甘氨酸2.0g，KH2PO
4 5.0g,KH2PO
4 6.5g，葡萄糖20g，大米粉100g；用蒸馏水定容至1L,用0.1N HCl将pH调至4.5，120℃高压灭菌20分钟。8.一种制...

【专利技术属性】
技术研发人员：宫斌，曹建华，吴子文，
申请(专利权)人：青岛贞开生物医药技术有限公司，
类型：发明
国别省市：