喹喔啉类荧光探针、方法及应用技术

本发明专利技术公开了喹喔啉类荧光探针、方法及应用，喹喔啉类荧光探针具有对Tau蛋白聚集物亲和性强，响应速度快，特异性好，选择性高，细胞毒性低的特点，可以直接作为检测活细胞及组织样本中神经纤维缠结的荧光探针，从而为包括AD在内的，具有神经纤维缠结特征的神经退行性疾病的，临床诊断带来帮助和突破。临床诊断带来帮助和突破。临床诊断带来帮助和突破。

【技术实现步骤摘要】
喹喔啉类荧光探针、方法及应用


[0001]本专利技术涉及医药
，具体是喹喔啉类荧光探针、方法及应用。

技术介绍

[0002]阿尔茨海默病(Alzheimer
’
s disease,AD)是在老年人群中较为多见的一种致死性神经退行性疾病，尚无有效治疗办法。AD的早期诊断可以为这种毁灭性疾病，提供治疗干预的可能性。由Tau蛋白异常聚集，在脑组织中沉积而造成的神经元纤维性缠结(Tau
‑
PHF)，是AD的重要病理性特征之一，已被证明与疾病的进展和严重程度密切相关。因此，发展以Tau蛋白聚集物为靶点的无创荧光成像技术，可能会促进AD及Tau蛋白相关疾病的早期诊断。
[0003]目前，正电子发射断层扫描(positron emission tomography，PET)和单光子发射计算机断层扫描(single photo emission computed tomography，SPECT)显像的技术手段能够实现对疾病的早期检测、“实时”监测和治疗效果的评估。但PET和SPECT受限于暴露于放射性、昂贵的设备和高技能的人员，以及相对较差的空间分辨率。
[0004]荧光检测法是目前公认的最灵敏的光化学信号检测方法之一，在生物分析检测领域应用广泛。近年来，荧光成像技术因其灵敏度高、分辨率高、性价比高、成像实时等优点，也被用于在细胞和组织水平上对Tau蛋白聚集进行可视化检测。一些小分子荧光探针已经被用来选择性标记Tau蛋白聚集物。然而，他们对Tau蛋白聚集物的特异性识别能力普遍不强。因此，迫切需要开发对Tau蛋白聚集物具有更高选择性和亲和力的荧光成像探针。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供了喹喔啉类荧光探针、方法及应用，为包括AD在内的，具有神经纤维缠结特征的神经退行性疾病的，临床诊断带来帮助和突破。
[0006]为达此目的，本专利技术提供如下的技术方案：
[0007]本专利技术的第一个方面，提供了一种喹喔啉类荧光探针，所述荧光探针具有以下结构式：
[0008][0009]其中，n为1或2或3。
[0010]优选的，n为1时，探针为黄色固体；n为2时，探针为暗红色固体；n为3时，探针为黑色固体。
[0011]本专利技术的第二个方面，提供了本专利技术所述的喹喔啉类荧光探针在检测样本中的Tau蛋白聚集物中的应用。
[0012]优选的，所述荧光探针的浓度不小于0.1μM。
[0013]优选的，所述样本包括细胞、组织。
[0014]优选的，所述荧光探针的最大激发波长为：400
‑
600nm，最大发射波长为500
‑
750。
[0015]优选的，所述荧光探针具有以下结构式：
[0016][0017]其中，n为1或2或3。
[0018]优选的，n为1时，探针为黄色固体；n为2时，探针为暗红色固体；n为3时，探针为黑色固体。
[0019]本专利技术的第三个方面，提供了一种荧光探针试剂盒，包括本专利技术所述的荧光探针。
[0020]优选的，所述荧光探针具有以下结构式：
[0021][0022]其中，n为1或2或3。
[0023]优选的，n为1时，探针为黄色固体；n为2时，探针为暗红色固体；n为3时，探针为黑色固体。
[0024]本专利技术的第四个方面，提供了一种喹喔啉类荧光探针的制备方法，包括以下步骤：
[0025]S1、将化合物2
‑
甲基喹诺啉溶于甲醇；将4
‑
(二甲氨基)
‑
2,6
‑
二甲氧基苯甲溶于氢氧化钠中；混合溶液；
[0026]S2、将甲基三辛基氯化铵溶解于2ml甲醇中；滴加入S1的混合溶液中；
[0027]S3、加热回流，反应完毕后，冷却至室温；
[0028]S4、用乙酸乙酯萃取，有机层用无水MgSO4干燥；
[0029]S5、充分搅拌后，过滤，滤液减压旋蒸，即得粗产物；
[0030]S6、分离提取得到喹喔啉类荧光探针。
[0031]优选的，步骤S3的反应条件为：110℃加热回流15h。
[0032]优选的，步骤S6包括：用硅胶分离提纯目标产物，洗脱剂为：石油醚、乙酸乙酯混合液。
[0033]与现有技术相比，本专利技术有益效果及显著进步在于：本专利技术设计并合成了三种喹喔啉类靶向Tau蛋白聚集物的荧光探针，这些化合物具有对Tau蛋白聚集物亲和性强，响应速度快，特异性好，选择性高，细胞毒性低的特点，不但可以有效监测体外Tau蛋白聚集的动力学过程，还能够特异性识别活的AD细胞中以及AD模型小鼠脑组织中，由Tau蛋白聚集物形成的神经纤维缠结，从而为包括AD在内的，具有神经纤维缠结特征的神经退行性疾病的，临床诊断带来帮助和突破。
附图说明
[0034]为更清楚地说明本专利技术的技术方案，下面将对本专利技术的实施例所需使用的附图作一简单介绍。
[0035]显而易见地，下面描述中的附图仅是本专利技术中的部分实施例的附图，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图，但这些其他的附图同样属于本专利技术实施例所需使用的附图之内。
[0036]图1为本专利技术实施例1的T1的1HNMR光谱图；
[0037]图2为本专利技术实施例1的T1的13CNMR光谱图；
[0038]图3为本专利技术实施例1的T1的ESI
‑
MS光谱图；
[0039]图4为本专利技术实施例2的T2的1HNMR光谱图；
[0040]图5为本专利技术实施例2的T2的13CNMR光谱图；
[0041]图6为本专利技术实施例2的T2的ESI
‑
MS光谱图；
[0042]图7为本专利技术实施例3的T3的1HNMR光谱图；
[0043]图8为本专利技术实施例3的T3的13CNMR光谱图；
[0044]图9为本专利技术实施例3的T3的ESI
‑
MS光谱图；
[0045]图10a为本专利技术实施例4的ThS(2μM)分别与Aβ1
‑
42聚集物(10μM)及R3聚集物(30μM)结合后的荧光发射谱(λex＝440nm)；
[0046]图10b为本专利技术实施例4的ThS(10μM)分别与K18单体(15μg/mL)和K18聚集物(15μg/mL)结合后的荧光发射谱(λex＝440nm)；
[0047]图10c为本专利技术实施例4的R3聚集物的透射电镜结果；
[0048]图10d为本专利技术实施例4的Aβ1
‑
42聚集物的透射电镜结果；
[0049]图11a为本专利技术实施例4的T1、λex＝455nm，与PBS中的K18聚集物、R3聚集物、Aβ1
‑
42聚集物和BSA结合后的荧光发射光谱。探针的浓度均为2μM，每种蛋白的浓度为30μg/mL；
[0050]图11b为本发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种喹喔啉类荧光探针，其特征在于，所述荧光探针具有以下结构式：其中，n为1或2或3。2.如权利要求1所述的喹喔啉类荧光探针，其特征在于，n为1时，探针为黄色固体；n为2时，探针为暗红色固体；n为3时，探针为黑色固体。3.如权利要求1所述的喹喔啉类荧光探针在检测样本中的Tau蛋白聚集物中的应用。4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述荧光探针的浓度不小于0.1μM。5.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述样本包括细胞、组织。6.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述荧光探针的最大激发波长为：400
‑
600nm，最大发射波长为500
‑
750。7.一种荧光探针试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的荧光探针。8.一种喹喔啉类荧光探针的...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨丹静，柴可可，涂英，姚天明，
申请(专利权)人：同济大学，
类型：发明
国别省市：