BAZ1B_K426hy及其多克隆抗体在制备检测肿瘤的产品中的应用制造技术

本发明专利技术提供了BAZ1B_K426羟基化(hydroxylation，hy)在制备检测肿瘤的产品中的应用，属于生物技术领域。本发明专利技术还提供了一组免疫原多肽，包括多肽A和多肽B，通过所述免疫原多肽混合免疫动物制备得到抗BAZ1B_K426hy的多克隆抗体，该多克隆抗体可以通过ELISA/Dot blot/Westernblot方法特异性识别内源性BAZ1B_K426hy蛋白，用于肿瘤和威廉姆斯综合征检测产品的制备。综合征检测产品的制备。综合征检测产品的制备。

【技术实现步骤摘要】
BAZ1B_K426hy及其多克隆抗体在制备检测肿瘤的产品中的应用


[0001]本专利技术属于生物
，尤其涉及BAZ1B_K426hy及其多克隆抗体在制备检测肿瘤的产品中的应用。

技术介绍

[0002]BAZ1B基因(也被称为WSTF基因)，是在Williams综合征患者体内检测到的转录因子BAZ1B的编码基因。Williams综合征是一种遗传病，已知有20多种基因与其发病相关，研究发现在患者所表现出的一系列系统性缺陷中，BAZ1B基因扮演着较其他基因更为重要的角色。研究人员发现，与正常对照小鼠比较，BAZ1B基因敲除的小鼠体型较小，而且出生几天后即死去，提示该基因在小鼠正常生长发育中发挥着重要作用。进一步的机制研究揭示，BAZ1B蛋白功能非常多样，其参与的生物学过程包含染色质重塑、基因转录和表达调控、细胞周期和凋亡调节、DNA损伤修复和维生素代谢等。在基因转录调控方面，BAZ1B的参与方式尤为复杂，在三个重要的ATP依赖性染色质重塑复合物中均检测到了BAZ1B蛋白，兼具转录激活和抑制双重作用，这使得BAZ1B被认为处于染色质调控的核心位置。
[0003]目前，有研究表明，BAZ1B可与分泌蛋白NRG3(neuregulin
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3)结合，被运输至细胞外，通过旁分泌方式促进结肠癌发生、发展。又有研究阐明了BAZ1B通过促进细胞增殖、迁移等方式，调控乳腺癌和肺癌发生、发展的作用，将BAZ1B引入肿瘤学研究领域，引起了本领域的密切关注。BAZ1B属于bromodomain adjacent to azinc
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fingermotif(BAZ)蛋白家族，该家族蛋白具有多个结构域(见图1)，生物学功能多样。BAZ1B可通过PHD(plant homeodomain)、WAC(WSTF/Acf1/cbpq46)和Bromodomain结构域识别并结合组蛋白，参与调控组蛋白修饰。BAZ1B的WAC结构域具有酪氨酸激酶活性，能够磷酸化组蛋白H2A.X的第142位酪氨酸残基，参与DNA损伤后的修复或凋亡调控。含有PHD结构域的蛋白通常能够与甲基化的Lys残基(K，Lysine，赖氨酸)结合并调控基因转录，但与WSTF的PHD结构域特异性结合的组蛋白修饰位点尚未被确定。WSTF的Bromodomain结构域可与乙酰化的组蛋白结合(如H3K14Ac、H4K16Ac和H2BK12Ac)，调控下游靶基因转录。
[0004]BAZ1B促进乳腺癌细胞增殖、迁移等的功能是受到其翻译后修饰的种类和水平调控的，而且BAZ1B在多个位点可以发生多种翻译后修饰。在乳腺癌细胞中已鉴定出，在BAZ1B的Ser158(S，Serine，丝氨酸)和Lys426残基能够分别发生磷酸化(S158ph)和乙酰化(K426Ac)修饰。然而不管是Ser158残基磷酸化还是Lys426残基乙酰化，都正向调控BAZ1B活性。负向调控信号对于蛋白功能的发挥也同样具有重要的调节作用。在一定的时空特异性背景下，负向和正向调控的平衡才能使细胞和组织处于正常的稳定状态。然而目前，尚未有关于BAZ1B其他修饰位点及对应多克隆抗体/免疫原多肽的相关报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供BAZ1B_K426hy在制备检测肿瘤的产品中的应用，通过
BAZ1B_K426hy的表达量可诊断肿瘤细胞的发生。
[0006]本专利技术的目的在于提供一种免疫原多肽，可用于制备抗BAZ1B_K426hy的多克隆抗体。
[0007]本专利技术的目的还在于提供一种抗BAZ1B_K426hy的多克隆抗体，可以通过ELISA/Dot blot/Western blot方法特异性识别内源性BAZ1B_K426hy蛋白。
[0008]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
[0009]本专利技术提供了BAZ1B_K426hy在制备检测肿瘤的产品中的应用。
[0010]优选的，所述产品包括抗体、药物和试剂盒。
[0011]优选的，所述肿瘤包括肺癌、三阴性乳腺癌、非三阴性乳腺癌、结直肠癌、色素瘤、胃癌、宫颈癌、胶质瘤、食管癌、卵巢癌和胰腺癌。
[0012]本专利技术还提供了制备抗BAZ1B_K426hy的多克隆抗体的免疫原多肽，所述多肽包括序列为SKSPK
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hydroxyl K
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GLKTP的多肽A和序列为NSKSPK
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hydroxyl K
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GLKTPK的多肽B。
[0013]本专利技术还提供了抗BAZ1B_K426hy的多克隆抗体，所述多克隆抗体由所述免疫原多肽混合免疫动物获得。
[0014]优选的，多肽A和多肽B分别与KLH偶联后进行混合免疫。
[0015]优选的，偶联后的多肽A溶液与偶联后的多肽B溶液按照体积比1～2:1～2混合。
[0016]优选的，所述动物为兔。
[0017]本专利技术还提供了上述多克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：将上述免疫原多肽分别与KLH偶联，偶联后的多肽溶液按照体积比1～2:1～2混合后用于动物免疫，收集免疫后动物的血清进行纯化，得到抗BAZ1B_K426hy的多克隆抗体。
[0018]优选的，所述动物免疫次数为3～5次。
[0019]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0020]本专利技术发现BAZ1B的Lys426残基在肿瘤细胞内也能够发生羟基化修饰，并与同位点的乙酰化修饰存在竞争关系。BAZ1B_K426hy蛋白在肿瘤细胞中的表达量与正常细胞中的表达量存在明显差异，通过BAZ1B_K426hy的表达量可诊断到肿瘤细胞的发生。
[0021]本专利技术提供的免疫原多肽具有良好的免疫原性，使用该多肽作为抗原免疫动物所获得的抗BAZ1B_K426hy的多克隆抗体具有较好的亲和性能，可以通过ELISA/Dot blot/Western blot方法特异性识别内源性BAZ1B_K426hy蛋白，具有高特异性、高灵敏度和较高的效价，可用于制备BAZ1B_K426hy蛋白相关疾病检测试剂。
附图说明
[0022]图1：WSTF(BAZ1B)结构示意图；
[0023]图2：BAZ1B多肽A质谱检测结果；
[0024]图3：BAZ1B多肽B质谱检测结果；
[0025]图4：BAZ1B非修饰多肽质谱检测结果；
[0026]图5：血清Westernblot初筛结果；
[0027]图6：抗体Dotblot检测结果；
[0028]图7：抗体Westernblot检测结果，A～D分别表示Mouse testis、Rattestis、HeLa和MCF
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7细胞裂解液；
[0029]图8：Ab1在HeLa和MCF
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7裂解液中Westernblot检测结果；
[0030]图9：Transwell检测各组细胞的侵袭能力结果；
[0031]图10：克隆本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.BAZ1B_K426hy在制备检测肿瘤的产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括抗体、药物和试剂盒。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括肺癌、三阴性乳腺癌、非三阴性乳腺癌、结直肠癌、色素瘤、胃癌、宫颈癌、胶质瘤、食管癌、卵巢癌和胰腺癌。4.制备抗BAZ1B_K426hy的多克隆抗体的免疫原多肽，其特征在于，所述多肽包括序列为SKSPK
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hydroxyl K
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GLKTP的多肽A和序列为NSKSPK
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hydroxyl K
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GLKTPK的多肽B。5.抗BAZ1B_K426hy的多克隆抗体，其特征在于，所述多克...

【专利技术属性】
技术研发人员：李景武，李玉凤，王淑青，张景华，吴景华，胡芬，余源，刘岩，李玉辉，郑璇，
申请(专利权)人：华北理工大学唐山市妇幼保健院，
类型：发明
国别省市：