亚胺还原酶及其制备方法和s-降烟碱的制备方法技术

本申请提供一种亚胺还原酶的制备方法，包括步骤：将工程菌大肠杆菌的液体菌株在液体培养基中扩大培养，得到菌液，记录菌液浓缩度；将菌液按浓度梯度进行稀释，将稀释后的菌体均匀涂布于平板的固体培养基中进行培养；将平板暴露于紫外光下照射进行诱变，照射诱变时间为24

【技术实现步骤摘要】
亚胺还原酶及其制备方法和s
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降烟碱的制备方法


[0001]本公开涉及生物酶催化
，尤其涉及一种亚胺还原酶及其制备方法和s
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降烟碱的制备方法。

技术介绍

[0002]生物碱是存在于植物体内的有机碱性物质，在自然界中只有少部分植物体内存在生物碱。烟草中存在生物碱，并且烟草生物碱是含量很高的一种有机碱，其主要含有烟碱(尼古丁)、降烟碱、新烟草碱和假木贼碱等。而烟碱是烟草植物特有的生物碱，含量约占烟草生物碱总量的95％,，同时也是衡量香烟吃味的重要指标之一。烟碱是造成香烟成瘾的关键，因此合成高纯度烟碱作为烟草制品如电子喷雾等的添加剂，能够最大程度还原天然烟草的风味。因此烟碱的合成具有巨大的经济效益。
[0003]目前人工合成烟碱主要有两种方法，一是化学合成，最早可以追溯到1905年，但是由于化学合成法步骤繁杂，且由于烟碱存在光学活性，后续分离耗费过大，生产烟碱成本过高。而是通过生物酶催化法先合成烟碱前体
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s
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降烟碱，之后再进行合成，在这种情况下，便不存在手性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种亚胺还原酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种亚胺还原酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将转染有能够制备如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的质粒载体的工程菌大肠杆菌的液体菌株在液体培养基中扩大培养，得到菌液，同时记录菌液浓缩度；S2、将菌液按照一定浓度梯度进行稀释，然后将稀释后的菌体均匀涂布于平板的固体培养基中进行培养；S3、将涂布的平板暴露于紫外光下照射进行诱变，紫外灯光照射诱变时间为24
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48h；S4、之后将存活的菌株进行扩增培养，并加入诱导剂IPTG或乳糖进行目的蛋白的诱导；S5、进行酶活检测：收集菌体进行破碎，选择离心后的菌体或细胞破碎液进行酶活检测，菌体细胞破碎时应在pH＝6
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8的磷酸缓冲液中进行，以制得亚胺还原酶。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中的菌液浓度梯度依次为100CFU/ML、200CFU/ML、300CFU/ML、400CFU/ML、500CFU/ML、600CFU/ML。4.一种亚胺还原酶不对称还原麦斯明制备s
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降烟碱的方法，其特征在于，包括如下步骤：将底物麦斯明和亚胺还原酶混合，调节混合液pH＝7～8，待麦斯明完全反应后经离心、碱化、萃取、脱溶后得到s
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【专利技术属性】
技术研发人员：徐海斌，向仲勋，应燕庆，钱海书，
申请(专利权)人：仙居两山生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：