一种经尿液检测前列腺癌的标志物tRF-Thr-TGT-4-M2及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种经尿液检测前列腺癌的标志物tRF

【技术实现步骤摘要】
一种经尿液检测前列腺癌的标志物tRF
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Thr
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TGT
‑4‑
M2及其应用


[0001]本专利技术涉及分子生物学检测
，尤其涉及一种经尿液检测前列腺癌的标志物tRF
‑
Thr
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TGT
‑4‑
M2及其应用。

技术介绍

[0002]2016年Nature Genetics杂志报道了tRNA是一种高丰度的、广泛存在的、被动参与的mRNA解码器及蛋白翻译元件。tRNA通过其反密码子与mRNA的密码子结合而显著影响生物学过程和疾病进展。同时，tRNA在体液中高丰度存在的特点使其成为临床应用的生物标志物，可被运用到肿瘤增殖、转移的检测中。随后有人报道了tRF和tiRNA是在特定的细胞/组织中或者在细胞受到胁迫等特定条件下，由特定的核酸酶[如Dicer、血管生成素(ANG)]在tRNA的环上剪切，产生的特定大小的小片段RNA。tRF和tiRNA属于一类小的非编码RNA，被统称为tsRNA。tRF分为tRF
‑
1,tRF
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2,tRF
‑
3,tRF
‑
5和i
‑
tRF；tiRNA分为5
′
tiRNA和3
′
tiRNA。成熟的tRNA经剪切后转变为tRF和tiRNA，tRF和tiRNA在抑制蛋白质合成、调节基因表达、启动病毒逆转录酶和调节DNA损伤反应中发挥重要作用，可视为tRNA的功能单位。<br/>[0003]目前对于前列腺癌细胞增殖检测的方法通常采取血清PSA检测来评判。但在广泛应用的过程中发现此检测方法特异性差与敏感性不足，不能区分前列腺重度炎症及提示早期前列腺癌细胞增殖。虽然还有超声、核磁共振等检测方法作为补充，但这些方法仍具有上述不足之处。因此寻找敏感性高、特异性强的标志物检测前列腺癌细胞增殖，已成为医学研究的热点。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种经尿液检测前列腺癌的标志物tRF
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Thr
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TGT
‑4‑
M2及其在检测前列腺癌细胞增殖中的应用。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种检测前列腺癌的标志物tRF
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Thr
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TGT
‑4‑
M2，所述标志物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0007]本专利技术还提供了一种检测所述的标志物的引物，，所述引物包括如SEQ ID NO:2所示的上游引物和如SEQ ID NO:3所示的下游引物。
[0008]本专利技术还提供了一种所述的标志物或所述的引物在制备检测前列腺癌的试剂或试剂盒中的应用。
[0009]优选的，所述试剂或试剂盒的检测样本包括前列腺细胞株、新鲜前列腺组织、新鲜穿刺前列腺组织、新鲜尿液、新鲜前列腺按摩液或血液。
[0010]本专利技术还提供了一种经尿液检测前列腺癌的试剂盒，所述试剂盒包括所述的引物。
[0011]本专利技术可通过检测尿液中tRF
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Thr
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TGT
‑4‑
M2相对表达量，评判前列腺癌细胞的增
殖水平。tRF
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Thr
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TGT
‑4‑
M2的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，属于tRF
‑
5c类型。
附图说明
[0012]图1为tRF
‑
Thr
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TGT
‑4‑
M2基因在前列腺癌组织和前列腺正常组织中的表达情况。
具体实施方式
[0013]下面结合实施例对本专利技术提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本专利技术保护范围的限定。
[0014]实施例1
[0015]本实施例以新鲜尿液为检测样本。尿液排出体外时经过尿道前列腺部，因此对尿沉渣进行相关检测具有一定的意义。2021年10月至2022年1月期间，收集扬州大学附属医院有前列腺疾病临床症状表现患者晨起第一次排尿，收集后立即进行以下操作处理。
[0016]1.匀浆
[0017]取上述受检者晨起第一次排尿的中段尿液200mL，随即4℃下6000转/分钟离心20分钟，收集尿沉渣备用。加入TRI REAGENT试剂反复吹打使细胞裂解，每克沉渣使用1ml TRI REAGENT试剂，并避免在加入TRI REAGENT试剂进行裂解前清洗细胞，因为清洗会很可能导致mRNA的降解。
[0018]2.两相分离
[0019]匀浆后样本于25℃孵育5分钟，以便核酸蛋白复合体完全解离。然后按照每1ml的TRI REAGENT试剂匀浆的样品中加入0.2ml的氯仿(上海化学试剂有限公司)，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，25℃孵育3分钟。4℃下12000转/分钟离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相，中间层和上层的无色的水相。RNA全部被分配于水相中。水相的体积大是匀浆时加入的TRI REAGENT试剂的60％。
[0020]3.RNA沉淀
[0021]将水相转移到新离心管中。水相与异丙醇(上海化学试剂有限公司)混合以沉淀其中的RNA，异丙醇的加入量按照每个样本匀浆时加入1ml TRI REAGENT试剂加入0.5ml异丙醇。混匀后30℃孵育10分钟后，于4℃12000转/分钟离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
[0022]4.RNA清洗
[0023]移去上清液，加入75％乙醇(以DEPC水配制，DEPC水购自上海浦予工业科技有限公司)，清洗RNA沉淀。75％乙醇的加入量按照每个样本匀浆时加入1ml TRI REAGENT试剂加入1ml 75％的乙醇。振荡后，4℃7500转/分钟，离心5分钟。
[0024]5.重新溶解RNA沉淀
[0025]去除乙醇溶液，空气中干燥RNA沉淀10分钟，切勿真空离心干燥。操作过程中注意RNA沉淀不要完全干燥。溶解RNA时，先加入1mL无RNA酶的水用枪反复吹打几次，然后60℃孵育10分钟。获得的RNA溶液保存于
‑
70℃。
[0026]6.对照样本RNA的抽提
[0027]从对照样本人前列腺增生细胞系(BPH
‑
1细胞系，购自上海宾穗生物科技有限公司)细胞中抽提RNA。
[0028]加入800μl的TRI REAGENT试剂至1mL对照样本中，样本裂解后，重复步骤2至步骤5的操作。此外，在加异丙醇沉淀RNA前，加10μg的无RNA酶的糖原作为水相载体。为降低溶液粘度，在加氯仿前先将样本两次过26号针头以剪切基因组DNA。两相分离后糖原留在水相中并和RNA共沉淀。只要糖原浓度不高于4mg/ml，不会影响cDNA的合本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测前列腺癌的标志物tRF
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Thr
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TGT
‑4‑
M2，其特征在于，所述标志物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。2.一种检测权利要求1所述的标志物的引物，其特征在于，所述引物包括如SEQ ID NO:2所示的上游引物和如SEQ ID NO:3所示的下...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴书涛，姚颖，王磊，
申请(专利权)人：扬州大学附属医院，
类型：发明
国别省市：